论文-三个品种莱菔子生药学研究-

莱菔子为十字花科植物萝卜(RaphanussativusL.)的干燥成熟种子,具有消食除胀、降气化痰的功效[1]。莱菔子原植物来源广泛、资源丰富,全国各地皆产,河北、河南、浙江、黑龙江为其主产地[2]。作为卫生部公布的“药食同源物品”之一,莱菔子应用范围较广,不仅可榨油食用,而且具有较高的药用价值。《本草纲目》[3]记载其“辛甘,平,无毒”;“下气定喘,治痰,消食,除胀,利大小便,止气痛,下痢后重,发疮疹”。现代药理研究表明莱菔子具有平喘、镇咳、祛痰[4]、降血压[5]、降血脂[6]、增强胃肠道动力[7]、改善泌尿系统[8]等多种药理作用。目前药材市场上莱菔子品种众多,入药品种繁杂难辨,质量参差不齐,以青、白、红三个品种为主,但《中国植物志》、《中国药典》等文献著作在莱菔子药材项下并未对不同品种进行系统探究。本研究收集和整理了三个品种莱菔子样品,通过形态特征及化学成分含量的比较,对样品进行质量评价,以了解不同品种的质量情况,为筛选优良品种、完善莱菔子质量标准、保证临床用药的安全有效及资源的开发利用提供基础数据。1材料与方法1.1供试材料供试材料采集于济南市历城区仲宫镇,经山东中医药大学张永清教授鉴定,均为十字花科植物萝卜的干燥成熟种子。1.2仪器与试剂SZX7体视显微镜(奥林巴斯公司)、游标卡尺(上海九量五金工具有限公司)、SC7620型真空镀膜仪(EMITECH公司)、SUPRA55型热场发射扫描电子显微镜(德国蔡司公司)、PL203电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)、CP225D电子天平(赛多利斯公司)、KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、UV5100B型紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)、安捷伦1260高效液相色谱仪(包括G1311C四元泵、G1329B自动进样器、G1315B二极管阵列检测器、G1316A柱温箱和AgilentChemstation工作站)、芥子碱硫氰酸盐(批号20141113,纯度为98%)、萝卜苷(批号29510701,纯度为98%)、芦丁(MUST-15010707,纯度98%)购于中国药品生物制品检定所。乙腈、磷酸、醋酸为色谱纯,甲醇、乙醇为分析纯。1.3试验方法1.3.1形态特征观察选择成熟饱满的种子置于体视显微镜下,观察外观颜色、形状等特征。每个品种随机选取30粒种子,用游标卡尺测量其长、宽,取平均值。测千粒重(g),重复3次。1.3.2微形态特征观察用超声波清洗机洗净并用毛笔轻轻刷去种皮表面的灰尘、杂质,置于吸水纸上自然干燥备用。在体视显微镜下将5粒样品种子分别粘贴于扫描电镜样品台的双面胶纸上,将双面胶另一面粘于干净的玻片上,用真空镀膜仪喷镀金膜90s,移入热场发射扫描电子显微镜样品室,在5kV加速电压下观察种子形态、表面纹饰、种脐性状等,选择具有代表性的种子表面、局部和种脐拍照。1.3.3总黄酮含量测定取适量种子置于烘箱中40℃干燥至恒重,粉碎,过40目筛,置于硅胶干燥器中备用。精密称取莱菔子粉1g,加80%乙醇10mL,超声提取20min,过滤;重复1次;取两次所得溶液过滤于50mL容量瓶,定容至刻度,备用。标准曲线建立:分别精密吸取0.215mg/mL对照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL置10mL容量瓶中,各加80%乙醇至2.5mL,分别精密加入5%亚硝酸钠0.4mL,摇匀,放置6min;加10%硝酸铝0.4mL,摇匀,放置6min;加氢氧化钠6mL,加80%乙醇至刻度,摇匀,放置15min。以第一瓶作为空白对照,于190~600nm波长范围内扫描,最大吸收波长在510nm处。因此,选用510nm作为检测波长。以总黄酮浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=11.603X-0.00413,R2=0.9995。线性范围为0.01075~0.0645mg/mL。1.3.4芥子碱含量测定参照《中国药典》2015版(一部)莱菔子项下芥子碱含量测定方法。色谱条件:AgilentZORBAXPhenyl色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);以乙腈-3%冰醋酸溶液(15∶85)为流动相;采用二元梯度洗脱,柱温30℃;检测波长为326nm,参比波长为360nm;流速1mL/min。进样量:20μL。标准曲线建立:精密称取芥子碱硫氰酸盐对照品适量,加70%甲醇制成浓度为0.099mg/mL的对照品储备液。以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归,得芥子碱硫氰酸盐标准曲线方程Y=351.85X+300.84,R2=0.9996,线性范围为0.198~4.455μg。1.3.5萝卜苷含量测定参照文献[9]的方法。精密称取过三号筛后的莱菔子粉0.15g,置于100mL具塞锥形瓶中,加入纯净水20mL,密塞,称重,超声处理,冷却,纯净水补重,过0.45μm的微孔滤膜,滤液置棕色瓶中。色谱条件:AgilentZORBAXSB-C18色谱(4.6mm×250mm,5μm);以0.1%磷酸-水溶液作为流动相(5∶95),采用二元梯度洗脱,柱温30℃;检测波长225nm,参比波长360nm;流速1mL/min。进样量:20μL。标准曲线建立:精密称取萝卜苷对照品适量,加纯净水制成浓度为0.222mg/mL的对照品储备液。以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归,得萝卜苷标准曲线方程Y=1019X+2.346,R2=1,线性范围为0.222~1.554μg。2结果与分析2.1外观形态特征三个品种莱菔子为红棕色或黄棕色,卵圆形或椭圆形,一侧有数条纵沟,种子表面有由明显凸起条纹构成的致密网状纹理,种脐点状,褐色,略微外突。平均长度0.306~0.390cm,宽度0.247~0.299cm,千粒重9.734~17.079g。长度、宽度、千粒重均以白萝卜最大,以红萝卜最小,不同品种之间长度、宽度、千粒重差异显著(表1)。2.2微形态特征三个品种莱菔子都是凹陷的网状纹饰,网脊皆隆起,但网脊粗细、网纹凹陷程度、网眼大小有所不同。青萝卜种子网脊隆起最为明显,网纹凹陷最深,网眼最大,其网眼长度与白萝卜、红萝卜差异显著。红萝卜种子网脊隆起最不明显,网纹凹陷最浅,网眼最小。种脐均位于种子基部一端,但种脐凹陷程度和直径有所区别:青萝卜种脐凹陷最深,直径最小;白萝卜种子种脐凹陷最浅,直径最大(图1,表2)。2.3活性成分含量三个品种莱菔子活性成分含量差异显著(表3)。红萝卜总黄酮含量最高,为0.544%,白萝卜最低,为0.428%;红萝卜芥子碱含量最高,为1.640%,白萝卜最低,为1.210%;萝卜苷含量以红萝卜最高,为0.238%,青萝卜最低,为0.163%。3讨论与结论青、白、红三个品种莱菔子的颜色、形状、大小、千粒重差异显著,可从外观上初步进行比较;微形态方面亦有差别,种皮表面网脊粗细、网纹凹陷程度、网眼大小以及种脐性状差异对莱菔子品种的鉴定具有重要参考价值。本研究在外观性状鉴别的基础上加入内在成分指标,总黄酮、芥子碱、萝卜苷含量均以红萝卜为最高,药用价值较高。2015版《中国药典》中只规定了芥子