高中生物选修一课题1DNA的粗提取与鉴定省公开课金奖全国赛课一等奖微课获奖课件

专题5课题1DNA粗提取与判定1/31一、基础知识分析（一）DNA提取原理1、DNA溶解性

DNA和蛋白质等其它成份在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样2/31问题思索与讨论：

①依据DNA在NaCl溶液中溶解度曲线图，思索在什么浓度下，DNA溶解度最小？DNA在NaCl溶液中溶解度是怎样改变？

②怎样经过控制NaCl溶液浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？

NaCl浓度为0．14mol／L时DNA溶解度最低。小于或大于0.14mol／L

，溶解度就逐步增大。利用这一原理，能够使DNA在盐溶液中溶解或析出3/31

DNA不溶于酒精溶液，不过细胞中一些蛋白质则能够溶于酒精。利用这一原理，能够将DNA与蛋白质深入分离2、DNA在酒精溶液中溶解性3、DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性①蛋白酶能水解蛋白质，不过对DNA没有影响②大多数蛋白质不能忍受60－80°C高温，而DNA在80°C以上才会变性③洗涤剂能够溶解细胞细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响4/315/31（二）、DNA判定原理①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，所以，二苯胺能够作为判定DNA试剂

②甲基绿（绿色）6/31二、DNA粗提取与判定试验设计（一）试验材料选取标准上只要含DNA生物材料都能够，不过选取DNA含量相对较高生物组织，成功率更大。7/31教材提供材料中哪些不适合提取DNA？哺乳动物红细胞和液体培养基中大肠杆菌从核DNA数目来看，猪38条，鸡血78条，哺乳动物红细胞0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一个。最好选择？鸡血、猕猴桃8/31（二）破碎细胞，获取含DNA滤液1、动物细胞【鸡血细胞】讨论：为何加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？2、植物细胞【洋葱】讨论：加入洗涤剂和食盐作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐主要成份是NaCl，有利于DNA溶解研磨不充分会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响试验结果，造成看不到丝状沉淀物、用二苯胺判定不显示蓝色等.讨论：假如研磨不充分，会对试验结果产生怎样影响？9/31讨论：为何重复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？

答：用高盐浓度溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中杂质。所以，经过重复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不一样各种杂质.（三）去除滤液中杂质【阅读方案一】10/31讨论：方案二与方案三原理有什么不一样？

答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取DNA与蛋白质分开；【酶专一性】方案三利用是DNA和蛋白质对高温耐受性不一样，从而使蛋白质变性，与DNA分离【DNA稳定性】【阅读方案二、三】11/31（四）DNA析出与判定与滤液体积相等冷却酒精溶液（体积分数为95％）1、DNA析出12/312、DNA判定DNA＋二苯胺甲基绿沸水浴蓝色绿色13/31讨论：答：有丝状物试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色（2）这一判定结果说明什么问题？（1）比较两个试管中溶液颜色有什么不一样？答：提取出丝状物是DNA14/31以鸡血为试验材料进行DNA粗提取三、试验案例②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作试验材料经常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长鸡血细胞做试验材料原因①鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得15/311、准备鸡血细胞液①过程：②柠檬酸钠作用:

讨论：提取鸡血中DNA时，为何除去血液中上清液？

答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细胞，离心后除去上清液是血浆.

取柠檬酸纳溶液（抗凝剂）100ml，注入新鲜鸡血（约180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。预防血液凝固16/31

将制备好鸡血细胞液5mL～10mL，注入到50mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20mL，同时用玻璃棒充分搅拌5min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布漏斗将血细胞液过滤至500mL烧杯中。取其滤液。2、提取鸡血细胞细胞核物质17/31讨论：答：让细胞内浓度大于周围溶液浓度，细胞会吸水以至涨破（1）为何要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么改变？（2）用玻璃棒搅拌有什么意义？答：用玻璃棒搅拌能够加速血细胞和细胞核破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，预防打坏DNA（3）滤去是什么物质？得到是什么？答：过滤将滤去是细胞膜和核膜等物质；得到是与蛋白质等物质结合在一起DNA18/313、溶解细胞核内DNA

将氯化钠物质量浓度为2mol/L溶液40mL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA溶解在溶液中。然后，用放有纱布漏斗过滤，取其滤液。

加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停顿加入蒸馏水（这时氯化钠为0.14mol／L）4、析出含DNA粘稠物19/31讨论：加入蒸馏水目标？降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使DNA从NaCl溶液中析出.5、滤取含DNA粘稠物用放有多层纱布漏斗，过滤步骤4中溶液至500mL烧杯中，含DNA粘稠物被留在纱布上20/316、将DNA粘稠物再溶解

取1个50mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠物质量浓度为2mol／L溶液20mL。用钝头镊子将纱布上粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中.7、过滤含有DNA氯化钠溶液

取1个100mL烧杯，用放有两层纱布漏斗过滤步骤6中溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中.21/318、提取含杂质较少DNA

在上述滤过溶液中，加入冷却、酒精体积分数为95％溶液50mL（使用冷却酒精，对DNA凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸收上面水分。这种丝状物主要成份就是DNA9、DNA判定二苯胺【水浴加热】22/31

答：因为DNA不溶于冷酒精，而其它物质能够溶解在酒精中，使含杂质较少DNA丝状物能够析出,悬浮于溶液中讨论：（2）观察丝状物呈什么颜色？答：白色（1）为何要加50mL冷酒精？23/31答：整个试验共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌”讨论：①两次蒸馏水第一次：细胞吸水胀破第二次：使DNA黏稠物析出（1）此试验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？24/31过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物相关，第二次要用其滤出黏稠物相关，所以要使用多层纱布，第一次、第三次均要用其滤液，使用纱布为1－2层②三次过滤第一次：DNA存在于滤液里第二次：DNA被留在纱布上第三次：DNA存在于滤液里25/31③两次析出第一次：用0.14mol／LNaCI溶液含杂质多第二次：用冷却95％酒精含杂质少④六次搅拌其中除第一步外，其余均要朝一个方向搅拌，搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，这么才能确保得到完整DNA26/31观察你提取DNA颜色，假如不是白色丝状物，说明DNA中杂质较多；二苯胺判定出现蓝色说明试验基本成功，假如不展现蓝色，可能所提取DNA含量低，或是试验操作中出现错误，需要重新制备四、课题结果评价（一）是否提取出了DNA27/31本试验提取DNA粗制品有可能依然含有核蛋白、多糖等杂质（二）分析DNA中杂质（三）不一样试验方法比较对于不一样试验方法，本课题能够采取分组方法进行研究。首先选取不一样试验材料，其次同种材料还能够采取不一样方法，从多方面比较试验结果，如DNA纯度、DNA颜色、二苯胺显色深浅等，看看哪种试验材料、哪种提取方法效果更加好28/31Ⅱ.（7分）以下是DNA粗提取与判定试验（1）试验原理：DNA在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样。在2mol/LNaCl溶液中，DNA溶解，部分蛋白质盐析生成沉淀；在

mol/LNaCl溶液中时，DNA析出。DNA不溶于

溶液，利用这一原理可将DNA与蛋白质深入分离。在沸水浴条件下，DNA溶液遇

试剂会被变成蓝色特征，能够判定提取DNA。（2）制备鸡血细胞液时，要在取新鲜鸡血同时加入

，使血液分层，取下层血细胞沉淀。（3）在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水，其目标是