2025届上海市高三生物一模分类汇编：生物工程（有答案）

四、（2025松江一模）染料废水的生物处理（26分）

活性黑5是一种低毒性、难褪色的含氮染料。欲利用生物酶处理染料废水中的活

性黑5,具体操作流程如图6。从染料废水堆积池的污泥中获得优势菌群，采用浓度梯

度驯化法，进一步培养获得具备强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，并进行基因表达

分析。

污泥稀释液

O产，

挑取单菌落.浓度梯度驯金测定基因确定高表达的分解活

并转接'■一'表达量性黑5的氧化还原酶

BVU5蛋白

多次转接并逐渐提高

（培养基和的成分相同）

In培养液中活性黑5浓度

图6

24.（2分）培养基I中，除了活性黑5以外，还需添加的成分是。（多选）

A.葡萄糖B.抗生素C.水D.琼脂

25.（2分）培养基I从用途上属于«（编号选填）

①固体培养基②液体培养基③通用培养基

④选择培养基⑤鉴别培养基

26.（2分）将细菌从培养基I转移到培养基II的目的是o

27.（2分）浓度梯度驯化过程中，培养液中可能出现的变化有o（多选）

A.假单胞杆菌中BVU5蛋白的含量B.假单胞杆菌对活性黑5的分解速率

C.假单胞杆菌的菌落数目D.假单胞杆菌中BVU5蛋白的空间结构

28.（2分）假单胞杆菌中，BVU5蛋白分解活性黑5的场所最可能为。（单选）

A.拟核B.细胞质基质C.溶酶体D.核糖体

29.（2分）据图6和所学知识推测，驯化后的假单胞杆菌增强了BVU5基因的。（多

选）

A.复制B.转录C.翻译D.逆转录

科研人员为了实现在大肠杆菌中大量表达外源BVU5蛋白，首先需要利用PCR技

术获得BVU5编码基因。该基因编码链首尾处各20个核甘酸的序列及相关信息如图7o

5'-ATGTCGAGCAACTTCCTCAA……ACGTGGTCATCGACTACTAA-3'

起始密码子：AUGAbol识别序列：5'-CCATGG-3'

终止密码子：UAA、UAG、UGASa/I识别序列：s'-GTCGAC-S'

图7

30.（2分）已知BVU5基因编码链总长为1098个核昔酸，据图7及所学知识分析该基因编

码的BVU5蛋白的氨基酸数目为o（编号选填）

①365②366③1095@1098⑤3285@3294

31.（4分）若要在基因的前后位置，分别添加Ncol及SRI限制性内切核酸酶识别序列，并

大量扩增出BVU5基因，则PCR实验中所需的引物序列为

（按方向填空，引物长度应为26个核昔酸）

32.（3分）在利用基因工程表达BVU5蛋白的过程中，PCR实验后应进行的步骤依次是

o（选择编号并排序）

①筛选和鉴定含8VU5基因的大肠杆菌②从细菌中提取DNA

③DNA连接酶拼接DNA片段④限制性内切核酸酶切割

⑤PCR产物的凝胶电泳鉴定⑥2VU5基因导入受体细胞

33.（2分）若想进一步改良BVU5蛋白，但其结构未知，欲通过蛋白质工程迅速获得BVU5

蛋白突变株，应选用的策略是-（单选）

A.定点突变直接改变氨基酸序列B.定点突变直接改变基因序列

C.随机突变直接改变氨基酸序列D.随机突变直接改变基因序列

34.（3分）设计体外实验，验证BVU5蛋白催化反应需要还原型辅酶、而非氧化型辅酶的

辅助。请选择正确的编号补充表3信息。（编号选填）

表3

组别处理方式实验结果（脱色率）

对照组(1)_____-

实验组1⑵_____-

实验组2⑶_____++++

注：代表脱色率低，“+”代表脱色率高

①最适温度、pH②适宜浓度的BVU5蛋白

③活性黑5溶液④生理盐水

©NADH或NADPH⑥NAD+或NADP+

四、印染废水的生物处理（26分）

24.（2分）ACD25.（2分）④26.（2分）进一步分离纯化细菌

27.（2分）ABD28.（2分）B29.（2分）BC30.（2分）①

31.（4分）引物1：5「CCATGGATGTCGAGCAACTTCCTCAA-3，

引物2：5'GTCGACTTAGTAGTCGATGACCACGTS'

32.（3分）⑤④③⑥①33.（2分）D34.（3分）①②③；①②③⑥；①②③⑤

四、（2025青浦一模）人鼠嵌合抗体的设计（25分）

人原癌基因erbB2编码的pl85蛋白可存在于肿瘤细胞膜上，

erbB2的过量表达与肿瘤细胞侵袭、转移密切相关，该过程中人体

自身免疫系统通常不会产生相应抗体。科研人员利用动物细胞融合

技术获得相应的鼠源单克隆抗体（图7）,以期治疗肿瘤。

22.（2分）为获得高度均一的抗体，需要先向小鼠体内注射

。（单选）

A.e仍B2基因B.pl85蛋白注:抗体可变区为特异性结合抗原区

C.人肿瘤细胞D.鼠骨髓瘤细胞域，恒定区为氨基酸序列稳定区域

23.（3分）为获得鼠源单克隆抗体，请选择正确的操作并排序。图7

①促融②筛选③分离脾脏细胞

④细胞核移植⑤克隆培养

鼠源抗体的恒定区易被人体免疫系统识别而失去作用，科研人员研制人鼠嵌合抗体以

期降低免疫排斥，过程如图8。图中引物已按照退火时与模板链结合位置画出，折线部分

表示不与融合基因序列互补配对；转录时a链为编码链。

蓝色荧光SeaI

引物1MboI

MboI蛋白基因

a链.

b耍Xba

融合基因终止子

引物2

步骤①

pBCI载体

重组pBCI载体

嗖知a1步骤③

小鼠终止子

红色荧光

受精卵

蛋白基因

代

胚

胎

孕

注：PI为山羊乳腺特异性表达启动

发

母

育

鼠子，P2为四环素诱导启动于；箭头

变

子囊胚

表示转录方向；限制酶MbohXbal

化

宫

与Seal的识别序列均不相同

中

9

检测乳汁中

抗体含量

图8

早期胚胎2

24.（3分）根据以上信息和图7推测融合基因应包含。（多选）

A.人抗体可变区基因B.鼠抗体可变区基因C.人抗体恒定区基因D.鼠抗体恒定区

基因

25.（2分）下图9为PCR扩增融合基因时的参数设定。步骤丁称为；步骤戊应设定

跳转到步骤—o

步骤甲步骤乙步骤丙步骤丁步骤戊步骤已

（起始变性）98℃56℃72℃72℃

10s\—

2min图9

1\7min

30s30s

26.（4分）为使融合基因正确连接到pBCI载体，图8步骤①应选用的限制酶为；

引物1折线部分为的识别序列。（编号选填）

①Mbol②Xbal③Seal

27.（2分）图8步骤②常用的物理转化方法为o加入四环素后选用发荧光

的受精卵用于后续操作。

28.（3分）关于图8步骤③的相关叙述错误的有o（多选）

A.步骤③含体外受精、胚胎移植等操作

B.代孕母鼠需注射激素使之超数排卵

C.代孕母鼠子宫内早期胚胎1为桑根胚

D.对早期胚胎2进行胚胎分割，可提高转基因小鼠数量

29.（2分）人鼠嵌合抗体的设计属于__________o（编号选填）

①第二代基因工程②定点突变蛋白质③定向进化蛋白质④设计制造全新蛋白

30.（4分）检测小鼠乳汁中的人鼠嵌合抗体水平，发现其含量较低，结合图8和所学知识

推测可能原因。（至少两点）

四、人鼠嵌合抗体的设计（25分）

22.B（2分）23.③一①一②一⑤（3分）24.BC（3分）

25.聚合（1分）；乙（1分）

26.②③（2分）②（2分）27.显微注射法（1分）红色（1分）

28.ABD（3分）29.①④（2分）

30.①山羊乳腺特异性表达启动子在小鼠乳腺细胞中作用效果不理想，抗体表达量低；②融

合基因表达正常，但小鼠乳腺细胞无高效的针对其运输及分泌机制；③融合基因被某些化

学基团修饰，阻碍转录的发生；④融合基因正常转录，但融合基因mRNA因RNA干扰而

被切割（每点2分，其他合理答案酌情给分）

五、（2025宝山一模）小麦白粉病与生物工程（18分）

小麦白粉病是由白粉菌寄生引起的病害，为开展小麦抗白粉病研究，一般用离体叶片接

种法培养并保存白粉菌，包括配制培养基、消毒离体叶片、接种白粉菌、适宜条件培养等步

骤。

29.（2分）据题意可知，配制的培养基应是直接为（离体叶片/白粉菌）提供

营养物质。

30.（3分）为确保获得纯种的白粉菌，需无菌操作的步骤有o（多选）

A,配制培养基

B.消毒离体叶片

C.接种白粉菌

D,适宜条件培养

31.（2分）若要探究适宜的培养条件，现设三种光照条件：无光照、光照12小时、光照16

小时，四种温度条件：4℃、8℃、16℃、32℃,则实验分组数为o（单选）

A.3组B.4组

C.7组D.12组

小麦因存在M基因易感白粉菌。gRNA和Cas9蛋白可以共同作用于DNA特定序列，

对其进行剪切和修复，其中gRNA识别和剪切DNA；Cas9蛋白修复切口。科研人员将

gRNA和Cas9蛋白的基因导入到小麦中，对M基因进行改造，使其无法发挥作用。表达

载体的构建及可能用到的限制性内切核酸酶识别序列如图9所示，启动子是基因表达所必

需。

仁1BamHl

S弋M,1N\1Sql\

「gRNA-启动子A》启动子2—Cas9—潮霉素抗性、

载体1载体2®5'……ACTAGT.....3'

1氨年青霉素抗性^----------卡那霉素抗性----------）

②5\.....GGATCC....3

1

V

(3)5\.....GCTAGC....3

1

V

「eRNA-启动子1—启动子2-Cas9一潮霉素抗性④5'......CCGG.….3'

最终载体

-------------------卡那霉素抗性----------------）

图9

32.（4分）据题意推测，gRNA、Cas9蛋白功能分别类似于、。（编号

选填）

①RNA聚合酶

②DNA连接酶

③DNA聚合酶

④限制性内切核酸酶

33.（5分）在由载体1、载体2构建最终载体时，所需使用的限制性内切核酸酶的识别序

列，最有可能是图9右侧中的（图9中编号选填），在最终载体上保留下来的酶

切位点有（编号选填）。

①5个②4个

③3个④2个

34.（2分）若要检测M基因是否改造成功，可行的操作是o（单选）

A.用一定浓度的潮霉素溶液浇灌小麦

B.检测小麦细胞中是否有Cas9蛋白

C.用白粉菌感染小麦植株

D.检测小麦细胞中是否有启动子1、2的序列

五、小麦白粉病与生物工程（18分）

29.（2分）离体叶片

30.（3分）ABCD

31.（2分）D

32.（4分）④②

33.（5分）①③③

34.（2分）C

五、（2025虹口一模）CAR-T细胞疗法（19分）

肿瘤严重危害人类健康。为提高T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤力，研究人员利用转基

因技术在T淋巴细胞表面嵌合抗原受体（CAR）,成功获得CAR-T细胞，部分相关过程如

图所示。其中，图（b）中“㊉”表示促进作用，“㊀”表示抑制作用；BCR为B淋巴细胞表

面的抗原受体，TCR为T淋巴细胞表面的抗原受体。

免疫细胞清除肿瘤细胞的部分过程

29.（3分）据图及已学知识判断，能发挥细胞免疫功能的是o（多选）

A.巨噬细胞B.B淋巴细胞

C.CAR-T细胞D.T淋巴细胞

30.（3分）CAR-T细胞表面的CAR主要由跨膜区、胞外区等部分组成，据图推测，与天

然的T淋巴细胞相比，CAR-T细胞能高效杀灭肿瘤细胞的原因是它o（多选）

A.无需抗原呈递细胞激活B.能释放免疫活性物质

C.能大量分泌特异性抗体D.能直接识别肿瘤抗原

31.（3分）肿瘤细胞会通过“免疫逃逸”机制，避开免疫系统的“监视”，据图及已学知

识推测，该机制可能包括肿瘤细胞的。（多选）

A.MHC表达量下降B.PD-1的数量增加

C.肿瘤抗原数量增加D.PD-L1的数量增加

临床研究发现，快速增殖的肿瘤细胞会导致肾上腺素异常增多，抑制CAR-T细胞的功

能。2024年，研究人员利用RNA干扰（RNAi）技术影响CAR-T细胞表面肾上腺素受体

相关基因的表达，获得改造后的CAR-T细胞.检测相关细胞的指标，如表所示。

每个细胞表面CFSE

分泌颗粒酶葡萄糖转运蛋白含PD-1的

荧光强度

组另

的细胞占比的相对表达量细胞占比

DayODay8

天然的T淋巴1.00a0.015a0.21。1.10，0.12C

细胞组

未改造CAR-

b

0.98a0.016a0.43b1550.50a

T细胞组

改造后的

0.97a0.018a0.72a2ir0.18b

CAR-T细胞组

注：上述实验仅在DayO加入等量CFSE；CFSE为活细胞荧光染料，可与质膜表面蛋白结

合，是判断细胞分裂能力的指标之一；数字后小写字母不同表示各组间的数据差异显著。

32.（2分）据题干信息推测，肿瘤细胞快速增殖可能对人体造成的影响有。（多选）

A.心律失常B.体温降低C.血糖偏高D,体重增

加

33.（3分）据表、图推测，与未改造的CAR-T细胞相比，改造后的CAR-T细胞具有的优

势可能有o（编号选填）

①细胞分裂速率慢②NF-KB的功能强③细胞凋亡水平低④PI3K磷酸化水平低

34.（5分）据表及相关信息，对CAR-T细胞治疗肿瘤的效果进行估测，阐述分析过程

五、CAR-T细胞疗法（19分）

29.ACD30.AD31.AD32.AC33.②③

34.无论是未改造还是改造的CAR-T,与天然T淋巴细胞相比，细胞分裂不受影响，分泌颗粒

酶细胞占比大，加大攻击肿瘤细胞的力度;葡萄糖转运蛋白的数量增加，能为T细胞提供更多

能量来杀伤肿瘤细胞，且改造后的CAR-T细胞的上述优势不仅均比未改造的CAR-T细胞强,

而且两种CAR-T细胞均提高了含PD-1的细胞占比，提高肿瘤逃逸的风险但改造后的CAR-

T细胞肿瘤逃逸的风险降低。

二、（2025杨浦一模）细胞器进化理论指导光合酵母构建（24分）

内共生学说认为，叶绿体的祖先可能是篮细菌，篮细菌被原始真核细胞摄入后在细胞

质内繁殖，并在共生过程中逐渐演化为叶绿体。光合酵母的成功构建为这一学说提供了支

持。

8.（2分）大量证据表明，内共生现象普遍存在。下列观察中，可作为支持叶绿体内共生证

据的有。（多选）

A.叶绿体和蓝细菌都含有生物膜

B,叶绿体内的DNA为环状分子，与原核生物相似

C.叶绿体内膜与细菌质膜的蛋白质与脂质比值相似

D.叶绿体的蛋白质合成机制更类似于细菌，而非真核生物

9.（2分）叶绿体已失去了其祖先蓝细菌某些功能特性。基于进化理论分析，蓝细菌的基

因组在共生后发生的变化是o（编号选填）

①淘汰全部不利于共生的基因

②有利于共生的基因频率不断提高

③朝着有利于共生的方向发生基因突变

为支持内共生学说，研究者在酵母细胞内构建了光合蓝细菌内共生体。首先，基于ZS

质粒构建工程篮细菌——SynJEC菌株，过程如图所示。重组ZS质粒进入篮细菌后，其内

的整合区域会以一定的频率插入蓝细菌拟核DNA中，并随着蓝细菌DNA的复制而复制。

目的基因1目的基因2SmR：链霉素抗性基因瞅:壮观霉素抗性基因

SynJEC菌株

工程蓝细菌——SynJEC菌株的构建流程

10.（2分）在使用黏性末端各异的限制酶将目的基因1和目的基因2先后插入ZS质粒时,

下列限制酶选用方案中最佳的是o（编号选填）

酶1酶1酶1酶2酶1酶4酶3酶4

!__NJ!一1,鼠1।"

1;_1;_______>_

VVJ____>

目的基因1目的基因1目的基因2目的基因2

①②③④

11.（2分）在上图中的“涂布平板”阶段，正确的无菌操作流程是o（编号排序）

①灼烧涂布棒②在酒精灯火焰旁涂布③培养基高压蒸汽灭菌④置于超净工作台操作

⑤在酒精灯火焰旁倒平板

12.（2分）己知ZS质粒不能在蓝细菌内复制。据题干和图3信息推断，研究者选用ZS质

粒而非其它载体的主要原因是。

A.ZS质粒含有多种标记基因

B.ZS质粒可通过转化操作进入蓝细菌

C.在克隆中消除质粒上无关的DNA区域

D.能减轻质粒复制给受体细胞造成的负担

13.（3分）根据题意和研究人员的设计思路，在使用选择培养基筛选克隆菌株时，形成菌

落的蓝细菌______o

A.仅抗链霉素B.仅抗壮观霉素

C.既抗链霉素又抗壮观霉素D.对链霉素和壮观霉素均敏感

14.（2分）为进一步检测SynJEC菌株构建是否成功，需对目标DNA片段进行PCR扩增

和凝胶电泳鉴定，PCR扩增应选择下列引物中的o

—①►②-A-③►

III>I:>I>11——SynJEC菌株拟核DNA

福苞

随后，研究者再借助细胞融合技术构建光合酵母，后者的工作原理如下图所示。已知

蓝细菌光合作用的主要产物是蔗糖，且留在细胞内；野生酵母几乎不能利用蔗糖作为碳

源。

内共生SynJEC菌株在酵母中的工作原理内共生的SynJEC菌株

15.（2分）据研究人员的设计意图分析，ZS质粒上携带的目的基因1和目的基因2应是

o（编号选填）

①蔗糖分解酶基因②蔗糖转运蛋白基因③光合作用相关基因④糖酵解相关酶基因⑤葡萄糖

转运蛋白基因

16.（4分）在判断光合酵母是否构建成功时，设计培养基配方时应考虑；在检测构

建成功的光合酵母的增殖速度时，设计培养基配方时应考虑。（编号选填）

①不加琼脂②不添加有机碳源③提高氮源的占比④增加生长因子的占比

17.（3分）检测发现，构建的光合酵母生长速度比野生酵母慢。研究人员试图提升关键酶

单个分子的活性以解决这一问题，为此下列策略合理的是o

A.导入关键酶的编码基因

B.强化关键酶编码基因的转录

C.对关键酶编码基因进行定向进化

D.提高关键酶编码mRNA的翻译速率

二、细胞器进化理论指导光合酵母构建（24分）

8.BCD9.②

10.②④11.③④⑤①②或③④⑤④①②12.C13.A

14.①④或②⑤15.①⑤

16.②①②17.C

五、（2025闵行一模）肠道工程益生菌的构建

HT1是一种因FAH酶缺陷引起的酪氨酸代谢异常产生有毒物质引发肝损的疾病。研究

团队试图基于益生大肠杆菌（氏N）设计一种能高效代谢酪氨酸的肠道工程益生菌（EcN-HT）

用于治疗HT1模型小鼠，如图所示。其中，酪氨酸转运蛋白TyrP的基因TyrP和酪氨酸高效

代谢重要酶HpaBC的基因HpaBC均为目的基因。

26.EcN的H1型鞭毛通过单个菌之间的相互作用在肠道上皮形成紧密的网络结构，像一层

防护网，可以抑制病原菌对肠道上皮细胞的侵袭，这种防御属于机体的O（编号选

填）

①第一道防线②第二道防线③第三道防线④特异性免疫⑤非特异性免疫

27.图中，TyrP需要表达在EcN-HT的质膜上，以促进对酪氨酸的吸收。则EcN-HT中参

与TyrP的合成到定位的结构有0（编号选填）

①内质网②核糖体③质膜④高尔基体⑤线粒体

研究人员以质粒pUC57-pfnr为载体，构建pUC57-pfnr-T和pUC57-pfnr-H两种重组质

粒。下图表示了质粒pUC57-pfnr及相关限制性内切核酸酶的识别序列和切割位点。

5-GGATCC-3'

BamWI

3'-CCTAGG-5'注：加加•:厌氧启动子；

t收仁终止子；

I

5'-AAGCTT-31。片:复制原点；

HindIII

3'-TTCGAA-5'Ka小卡那霉素抗性基因

tCW：氯霉素抗性基因；

S'-AGATCT-S,/讹牙:表达的酶蛋白可将无

BglU3'-TCTAGA-5'色的X-gal水解成蓝色产物

t

I

5'-GAATTC-31

EcoRI

3，-CTTAAp-5,

5%ATC-3'

MboI

3'-CTAG-5'

个

|

5'-CCCGGG-3,

Sma1

3'-GGGCCC-5'

个

28.采用“2种重组质粒分别构建—pUC57-pfnr-T导入：EcN并筛选得EcN-T—pUC57-pfnr-

H导入EcN-T并筛选得EcN-HT”的方法时，为实现高效构建和筛选，从①-⑩中合理选择

编号填入表1.

①BamHI②Hindlll③BglII④EcoRI⑤MboI@SmaI⑦卡那霉素⑧氯霉素⑨X-gal⑩琼脂

目的基选择限制性内构建的重组重组质粒导筛选时培养基筛选得受

因切核酸酶质粒入情况应加物质体细胞

pUC57-pfnr-

TyrP④⑥导入EcN(1)_______EcN-T

T

pUC57-pfnr-

HpaBC(2)_______导入EcN-T(3)_______EcN-HT

H

29.目的基因TyrP存在于E.coliK12菌株中。根据表1方案，需在该目的基因两侧添加相

应的限制性内切核酸酶识别序列后才能与质粒成功连接。下图显示了该目的基因两端的序

列，PCR时设计的引物应是。（单选）

转录方向

S'-AAGGCAm..“*0.."""".."*0*******'ACAATG-31

3'-TTCCGT-------------------------------------------TGTTAC-51

TyrP

A.5'-GAATTCAAGGCA-3'和5'-CCCGGGCATTGT-3'

B.5'-AAGGCACCCGGG-3,和5'-CATTGTGAATTC-3'

C.5LAAGGCACCCGGG-3,和5'-TGTTACGAATTC-3'

D.5，-CCCGGGAAGGCA-3,和5'-GAATTCTGTTAC-3'

30.下列属于分子水平检测EcN-HT是否构建成功有。（编号选填）

①PCR后利用凝胶电泳鉴定HpaBC和TyrP是否存在于EcN-HT工程菌中

②检测EcN-HT工程菌中是否存在HpaBC和TyrP转录出mRNA

③检测EcN-HT工程菌中是否存在HpaBC和TyrP蛋白

④检测EcN-HT工程菌是否同时具有抗氨苇青霉素和氯霉素的能力

⑤检测EcN-HT工程菌是否有更强的代谢酪氨酸的能力

31.经体外和HT1模型小鼠的体内检测实验，EcN-HT均表现出优异的酪氨酸代谢能力。若

要将该菌用于临床治疗人类HT1,应考虑哪些因素?（答1方面即可）

五、肠道工程益生菌的构建

26.①⑤27.②③

28.①.⑦⑨⑩②.③④③.（⑦）⑧⑨⑩29.A

30.①②③31.是否会破坏肠道菌群的稳定/是否会在人群中传播从而导致健康人酪氨酸

缺乏/是否会转移到其他器官导致其他器官致病/不能将实验室HTI模型鼠的研究成果直接用

于人类患者的治疗，而需要经过多个复杂过程，以确保药物的安全性和有效性。合理即可。

四、（2025浦东一模）转基因斑马鱼（19分）

水体中的雌激素能使斑马鱼细胞产生E蛋白，激活卵黄蛋白原（vtg）基因（如图14所

示）的表达，因此斑马鱼可用于监测环境雌激素污染程度。为了实现可视化监测，科学家将

斑马鱼的Mg基因，与人工构建的含萤火虫荧光素酶基因（无启动子）的载体（如图15所

示）连接，形成u/g-L〃。基因重组载体，成功培育了转基因斑马鱼。图15中LMC表示萤火虫

荧光素酶基因，可以催化荧光素氧化产生荧光；为氮节青霉素抗性基因，ori为复制起

点，BamHI、EcoRI、HindllLBsrGI为限制酶,T表示转录方向o

引物2

启动了区域

5'3'

••AACTATGCCTCT•

IIIIII

・・Md&KCGGAGA•,

3'

Vtg基因

引物1I

BamHI

注：该DNA片段不含图15所示限制酶的识别序列

24

因软1平用阵依•.上誓1般举。I弱亏磔娱）

@BamHI②EcoRI③HindIII@BsrGI

25.（3分）通过PCR技术获取vfg基因时，需设计合适的引物。依据图14、图15信息，推

测引物1包含的碱基序列为0（单选）

A.55-AACTAT-35B.5,-GAATTCAACTAT-3'

C.5'-TTGATA-3'D.5'-AAGCTTAACTAT-3'

26.（4分）将4吆14基因重组载体”导入大肠杆菌中进行扩增，为便于筛选，应将大肠杆

菌接种在含的培养基中（编号选填）；若要判断斑马鱼转基因是否成功，可在水体

中添加进行检测。（编号选填）

①氨芳青霉素②雌激素③荧光素④卵黄蛋白原⑤荧光素酶

27.（3分）/uc基因载体上有一段P2A序列，其功能如图16所示，下列对P2A序列描述合

理的是一（多选）

A.能与Mg基因、Lac基因一起转录

B.产生的2A肽能剪切P2A核酸序列

C.产生的2A肽能破坏蛋白1和蛋白2的结构

D.有助于序列两侧的基因表达成独立的蛋白质

进一步研究发现，E蛋白能与Wg基因启动子中的基因1P2A|基丽

特定序列结合，启动该基因的表达。图16

28.（2分）E蛋白与启动子结合后，启动转录过程还需要的酶是。（单选）

A.RNA聚合酶B.DNA聚合酶C.DNA连接酶D.限制性内切核酸酶

29.（5分）已知vfg基因启动子长度约为1000碱基对，为了找到E蛋白在启动子上的结合

位点，请运用本题研究成果提出设计思路并阐述基本操作步骤。

四、转基因斑马鱼（19分）

24.（2分）②③

25.（3分）B（选D得2分，选A得1分）

26.（4分）①②③

27.（3分）AD

28.（2分）A

29.（5分）用限制酶将启动子切割成多个长度的DNA片段，将酶切片段分别与Luc基因载

体连接，连接位点在Luc基因的上游（或。ri与P2A序列之间），形成多种重组载体。将每

种重组载体分别导入斑马鱼受精卵，待发育成熟后添加雌激素和荧光素后进行检测，能发出

荧光的说明导入的酶切片段中含有能与E蛋白结合的序列。将该片段继续切割成多个长度，

重复上述操作，可进一步缩小该特定序列的位点区域。

一、（2025静安一模）转基因水稻（21分）

培育抗虫耐除草剂转基因水稻是应对病虫草害导致水稻减产的一种防治方式，Cry1Ab

蛋白和Vip3Af2蛋白分别对水稻螟蛾科害虫和夜蛾科害虫有较强的杀伤效果，科研人员构

建了空/Ab-v力3姐抗虫融合基因（简称c-v基因），并从某种细菌中分离得到了对常用除草

剂草甘瞬有高度耐受能力的cp4基因，培育了一种新型抗虫耐除草剂转基因水稻。

以下为主要研究过程：

I:利用工具酶、目的基因等构建表达载体；

II:将构建的表达载体导入农杆菌，将此农杆菌接种到1号培养基；

III:从1号培养基选取合适的单菌落接种到2号培养基扩大培养；

IV：将利用水稻种子形成的愈伤组织与第III步获得的菌种共同培养；

V：将第IV步获得的愈伤组织转移到3号培养基促进愈伤组织的生长；

VI：将第V步获得的愈伤组织转移到4号培养基，诱导芽的形成；

VD：将第VI步获得的幼体转移培养，获得第1代转基因水稻（T1）,经筛选获得两株抗

虫耐除草剂转基因水稻s6和s8;

VDI:s6和s8分别自交，分别收集种子，萌发培养后获得第2代转基因水稻（T2）,重复

该过程获得第3代转基因水稻（T3）。

1.（3分）第I步构建的表达载体中，包含的基因或序列有o（多选）

A.c-v基因B.标记基因

C.c04基因D.启动子

2.（3分）下列对1号和2号培养基的分析中，正确的是。（多选）

A.1号培养基一般使用选择培养基

B.2号培养基一般使用天然培养基

C.1号培养基一般采用稀释涂布法接种

D.2号培养基一般采用平板划线法接种

3.（2分）下列关于3号和4号培养基区别的分析中，正确的是。（单选）

A.琼脂的浓度不同B.生长素和细胞分裂素的浓度不同

C.抗生素的种类不同D.赤霉素和细胞分裂素的浓度不同

目的基因进入受体细胞后，有的可以整

合到水稻基因组中（图5a）,有的不会发生

整合（图5b）,只有整合到水稻基因组中的

目的基因才能随染色体遗传到下一代。

为评估c-v基因是否稳定整合到水稻基

图5

因组中，科研人员设计了特异性引物，利用

PCR对s6和s8株系T1~T3的所有个体进行检测分析，结果见表2。

表2

株系s6s8

世代检测到c-v基因未检）则到c-v基因检测到c-v基因未检测到C-V基因

T1100%0100%0

T275%25%1%99%

T362.5%37.5%0100%

4.（2分）利用PCR检测c-v基因需要合适的引物，根据图6可知需要选择引物.

和引物O

引物1引物2引物3引物4

飒螂

匚-13,

5'crylAbvip3Af2

「二5'

3'-

引物5引物6引物7引物8

图6

5.（4分）在s6的T2中，有25%没有检测到c-v基因，而s8的T2中，有99%没有检

测到c-v基因，产生该结果的原因可能是：s6中，c-v基因;s8中，c-v基因

。（编号选填）

①没有整合到基因组中

②整合到一条染色体中

③整合到一对同源染色体中

国家口岸常需快速检测进出口产品是否为转基因产品。为检测出含耐草甘瞬基因的转基

因产品，科研人员利用图7所示的流程制备了单克隆抗体。甲表示细胞，a~e表示过程。

甲

图7

6.（2分）图7中过程a注入小鼠体内的是o（单选）

A.c-v基因B.cp4基因

C.CrylAb蛋白和Vip3Af2蛋白D.cp4蛋白

7.（2分）图7中细胞甲一般选用_____o（单选）

A.人骨髓瘤细胞B.水稻体细胞原生质体

C.小鼠骨髓瘤细胞D.水稻愈伤组织原生质体

8.（3分）下列关于图7中过程b~e的分析中，正确的是______。（多选）

A.过程b表示细胞融合B.过程c是筛选抗体分泌阳性的细胞

C.过程d是筛选杂合细胞D.过程e必须在严格无菌环境下进行

1.ABCD

2.AC

3.B

4.45

5.②（2分）①（2分）

6.D

7.C

8.AD

五、（2025黄浦区一模）噬菌体展示技术（21分）

2018年诺贝尔化学奖授予在噬菌体展示技术领域作出卓越贡献的科学家。这项技

术的主要原理是：将外源基因整合到噬菌体基因组中，表达“展示蛋白”并在噬

菌体表面展示，最终快速发现与其特异性结合的多肽。图10为大肠杆菌噬菌体，

罗马数字代表编码外壳蛋白的基因，例如基因〃/负责编码pill蛋白。

噬菌体展示

10.图10

30.（3分）外源基因表达出“展示蛋白”需要大肠杆菌提供--（编号选填）

①核糖体②细菌DNA③转运RNA④核糖核昔三磷酸

⑤氨基酸⑥ATP⑦脱氧核糖核甘三磷酸

31.（2分）图11为基因///的结构，编码的信号肽引导pill蛋白转移至噬菌体的

组装部位，在组装过程中会被宿主的蛋白酶切除，CT结构负责将pill蛋白锚定于

噬菌体上。据此可知，欲得到图10展示结果，应将外源基因插入到图11所示①〜

④中的____处。（单选）

信号肽编码序列CT编码序列

:::L

♦♦♦♦♦♦・♦♦♦♦♦♦♦♦♦

①②③④

11.图11

A.①B.②C.③D.@

32.（1分）欲将“展示蛋白”展示在图10噬