实验诊断学实验指导

实验诊断学实验指导

兰州大学第一医院实验诊断教研室

实习的目的与要求：

一、实习目的通过实习学习有关检验的操作方法，熟悉和了解其基本技术，以便

进一步理解课堂讲授的内容，达到理论联系实际的目的。

二、实验室守则

1.准时参加实习，进实验室时必须穿好白大衣，遵守课堂纪律注意保持实验室的整齐与安

静。

2.实验前，将学习手册加以预习。实习开始，仔细听取讲解，认真观察示范操

作及示教标本，光明了实验原理和操作步骤后再操作。

3.实验过程中要认真操作，仔细观察并联系有关理论进行思考，注意检验

数据的准确性和严谨性。

4.爱护仪器，节约试剂，用前检查，用后清点，损坏时要登记赔偿。

5、注意安全，凡病人标本均应视为有传染性，应防止污染自己及他人每次实

习课后认真洗刷实验用具，并轮流搞好实验室的清洁卫生。

6、认真作好实验记录，正确地书写实验报告并于每次实习后交给辅导教师。实验

成绩共20分（每次实验3分，提问2分），直接加到期末考试成绩中（卷面成绩

满分80分）。

目录

第一单元血液一般检查.................................

第二单元尿及粪便常规检查...............................

第三单元浆膜腔穿刺液与脊髓液检查......................

第四单元检验报告单的阅读及分析.........................

第一单元血液一般检查

一、红细胞计数（redbloodcellcount）

［要求］掌握末梢采血技术，熟悉细胞计数板的结构及用法，进行红细胞计数，并记住参

考值、临床意义。

［原理］一定量的血液，经一定量的等渗性溶液稀释后，充入血细胞计数室中,

于显微镜下计数一定体积内的红细胞，并求得每升血液内的红细胞数。.

［仪器试剂］

1.血细胞计数板，为一特制的长方形硬质玻璃板、中间1/3部分具有“H”形槽

沟，横槽沟上下的平台部分各深0.1mm,成为二个计数台（池），每台有一个计

数区域，分为9个大方格，每一个大方格的面枳为lmm2,四角的每个大方格又

划分为16个中方格，供白细胞计数用。中央的一个大方格用双线划分为25个

中方格，每中方格又划分为16个小方格，共为400个小方格，供红细胞计数

用。计数台之上覆以特制的盖片（厚度0.4mm、表面平直、质地较硬）后构成计

数室。每个大方格的体格是0.1mm3（1mmXhnmXO.lmm）,参阅图1,2及3。

2.容量准确的微量吸管（具有10ul及20ul刻度）

3.红细胞稀释液（Haycm稀释液）

氯化钠1.0g

硫酸钠（Na2s（）4-10H20）5.0g

氯化高汞5.0g

蒸馈水加至200ml过滤后备用

此稀释液为等渗性溶液，比重较大，使红细胞易于悬浮，并有防腐作用。

4.光学显微微

5.消毒、穿刺用具为75%酒精棉球、干棉球、消毒刺血针。

⑵法］

1.准确加红细胞稀释2ml于一中号试管中，塞紧管口，并拭净血细胞计数板

及盖玻片。

2.用75%酒精棉球消毒被检人左手无名指尖侧腹部。

8、高球蛋白血症病人，其血液加稀释液后，迅速出现颗粒状浑浊，高汞将球。

此时可换用生理盐水作稀释液，及时计数。

9、含高效价冷凝集素的病人，当血加入稀释液之后，应事先将红细胞稀释液

管加温后再放入血液或将红细胞悬液管置温箱内待冷凝现象消失后再迅速混匀计

数。

［参考值］

成年男性(4.0~5.5)X1012/L

成年女性(3.5~5.0)X1012/L

初生儿(6.0〜7.0)X1012/L

二、血红蛋白测定(hemoglobindetermination)

［要求］熟练掌握采血技术，能进行血红蛋白测定。并记住参考值和临床意

义。

［原理］血红蛋白被高铁氟化钾氧化为高铁血红蛋白(Hi),再与鼠结合成

稳定的棕红色氟化高铁血红蛋白(HiCH)。在特定波长利光径(比色杯内径)条件下具

有一定的吸光度，仪器据此即可求得血红蛋白浓度(g/L)。

［仪器、试剂］

仪器微量吸管

粗口径清洁试管

消毒采血用具

血红蛋白仪

试剂VanKampen一Zijlstra(文齐氏)液(HiCH转化液)

氟化钾(KCN)0.05g

高铁氟化钾［K3^e(CN)6］0.20g

无水磷酸二氢钾(KH,PO。)0.14g

TritonX-10()(或其它非离子表面活性剂)1.0ml

蒸馀水加到1000ml

上述试剂为淡黄色溶液贮存棕色瓶中室温妥善保存，其中非离子表面活性剂

可加速溶血。缩短转化时间，防止因血浆蛋白改变引起的浑浊。

［方法］

1.取血红蛋白转化液2.5ml于粗口径试管中加血10ul混匀，室温(20℃-25℃)

静置5min。

2.以校正过的(用蒸镭水调零和血红蛋白标准液校准)

由于血红蛋白不是单一品种，各种血红蛋白分子量不完全一致，所以不用IS

制mmol/L表示，而报告质量浓度g/L。

［注意事项1

(1)血红蛋白仪必须经过校准。

(2)若转化浓度浑、变绿即不可再用。

(3)转化液不能偏酸，也不宜用聚乙烯瓶装，否则KCN易分解失效。

(4)丙种球蛋白或白细胞数值明显增高的血液，可出现浑浊，可按15g/L甚

至5Og/L加入氯化钠以防止°

(5)关于转化液中KCN毒性问题由于浓度很低仅50mg/L,故只要分

散处理随时流水冲稀弃去危害性不大，但不可积存处理。

(6)若用叠氮钠、液代十六烷三甲氨法测定血红蛋白时，均需依本法进

行校准。

［参考值］

成年男性120—160g/1

成年女性110—150g/L

初生儿170—200g/L

三、白细胞分类计数(Whitecelldifferentimcount,DC)

［要求］

1.掌握血涂片制作及染色技术。

2.学会辩认外周血中各种白细胞的形态特点及其分类计数的方法。

3.记住参考值和临床意义。

［原理］

Wright一Giemsa(瑞一姬氏)伊红的钠盐有色部分为阴离子，可与带

正电荷的物质结合；氯化美兰有色部分为阳离子，可与带负电荷的物质结合。瑞氏

染料对胞质及中性颗粒的着色性极佳，而姬堪萨染粉对细胞核着色较好。采月瑞-

姬氏复合染液取得更好的染色效果。为使血片每次染色效果好且趋于一致，需配制

PH6.4-6.8的缓冲液，使细胞蛋白质在此恒定的环境中着色。

［仪器、试剂］

1.光学显微镜

2.瑞、姬氏复合染液瑞氏染粉0.5g,姬姆萨染粉2g,碱性美兰5g,混匀后加10ml

甘油在乳钵内研磨，再用甲醇500ml稀释后，室温放置一周备用。

3.磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8)磷酸二氢钾0.3g,磷酸氢二钠0.2g蒸僧水加于

1000ml,备用。

4.香柏油、二甲苯及擦镜头用棉纸。

5、光洁中性无油垢的载玻片及一端平齐稍窄于载玻片的推片，玻璃蜡笔。

［方法］

1.常规消毒皮肤，穿刺后拭去第一滴血，，

2.用载玻片的一端刮驭血液一小滴。

3、将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略向后移使与血液

相接触，血液遂于推片与载玻片的夹角间散开。

4、以约30度的夹角向前均匀地推动即可制成血涂片，其薄厚度要适中，衬以

白纸时应呈淡的红黄色，且有头体尾之分。(图5)

图5血片的制备

5.血涂片干后，于Iftl膜两端用玻璃始笔各划一线，以防染液流失，滴力口瑞-

姬氏复合染液数滴于血涂片上（以盖住血膜为度），静置约Imin,目的在于用染液

的甲醇成分固定血细胞。

6.加相当于染液1.5—2倍量的缓冲液充分混匀。

7,染色约5-l（）min,届时将载有染液的涂片置低倍镜下观察，若见白细胞的核着

色清晰、核浆分明即可用水冲去染液，干燥后镜检。

8。镜检时先用低倍镜选好薄厚适宜、染色良好、细胞分布均匀处，滴加香柏

油一滴，用油浸镜观察。通常计100个白细胞（必要时可增到200或更多），按

图9所示方向移动血涂片，同时将所遇到的各类白细胞分别记录，直到计数100个

白细胞为止，计算每类白细胞的数目，即其百分数值。

分类计数时以画“正”字作如下记录：

中性杆状核下

中性分叶核正正正正正正正正正正正正正

嗜酸粒细胞一

嗜碱粒细胞

淋巴细胞正正正正正

单核细胞正一

［注意事项］

1.作血涂片时勿用伤口第一滴血，以免混有来自受损微血管的内皮细胞。

2.血涂片薄厚适度，过厚时细胞簇集影响形态观察，过薄则白细胞太少不易分

类。影响血涂片薄厚的因素为：①血滴过大、夹角过大、推片速度过快则厚；②

血滴过小、夹角过小、、推片过慢则薄。

3.加瑞-姬氏染液或加缓冲液之后，切勿干枯，否则血涂片中每有残渣，将干

扰镜检。

4.染色时间的长短，视染液性能而定，应以低倍镜观察其染色良好为度。

5.要以流水冲去染液，而不可先弃去染液再冲水，以免留有残渣。

6、分类时一定要用油浸镜观察，以便同时观察白细胞有无质变及红细胞的形

态学。

7、因胞体较大的白细胞如嗜酸性粒细胞，单核细胞、中性粒细胞于涂片的上

下边缘处多见，而胞体较小的臼细胞如淋巴细胞则以涂片中心地带为多，分类计

数时切不可只在某一局部，而应按规定方向推动血涂片来进行观察。

8、分类报告时如红、白细胞有大、小、形态、染色等质的改变应同时描述。

9、白血病病人血涂片因细胞常不易着色，应酌情延长其染色时间。

1()、凡白细胞总数低的病人作分类计数时，切不可以加厚血涂片的方式来解决,

因涂片过厚时，细胞簇集，着色常不理想而影响分类辩认。应多推若干张薄厚适宜

的血涂片来进行分类。

［参考值］

中性杆状核粒细胞1-5%0.01-0.05

中性分叶核粒细胞50-70%0.50-0.70

嗜酸性粒细胞().5-5%().()()5-().()5

嗜碱性粒细胞0-1%0-0.01

淋巴细胞20-40%0.20-0.40

单核细胞3-8%0.03-0.08

四、红细胞沉降率(erythrocytesedimentationrate.ESR)

［要求］

1、了解血沉的操作技术及读取方法。

2.每组选一位同学在无菌操作下采取静脉血作Westergren法血沉。

3.记住参考值及临床意义。

［原理］血液经枸椽酸钠抗凝后，吸于特制的血沉管中，垂直竖立一小时，观

察其红细胞下沉的速度，以所暴露出的血浆段的高度(mm)表示。

［仪器、试剂］

1.静脉穿刺用器材，包括压脉带、垫枕、无菌注射器(2ml)、2.5%碘泗,75%泗

精及消毒棉签等。

2、特制的Westergren血沉管(全长3()()mm,内径2.5mm,具有0—200mm刻度)。

3.Westergren血沉架(图6)

4.106mmol/L枸椽酸钠溶液

⑵法］

1.向有2ml刻度的中号试管中准确地加入I06mmol/L枸椽酸钠0.4ml。

2.作静脉穿刺后，取血约2mL拔去针头注入上述试管内，使血量恰达2ml的

划线处，轻轻混匀。

3、用Westergren血沉管准确地吸此抗凝血至“()”刻度处，擦净管尖，友直坚

立于血沉架上.记时。Ih后读取血浆段的高度，以mm表示。

图6魏氏血沉摘和血沉管

［注意事项］

1.注射器内腔、血沉吸管内腔均须干燥，以防溶血。

2.血量与抗凝剂比例应严格遵守4:1,并充分混匀，如有小凝块则因消耗了纤

维蛋白原而使血沉减慢。

3.血沉吸管必须垂直竖立，如有倾斜可致血沉增快。

4.血沉试验应及时进行，抗凝血于室温中最长不得超过2h,否则水份蒸发，可

使结果减慢。

5、严重贫血病人红细胞大小不均时，于lh后血浆与沉积的红细胞之间未能形

成整齐的界面，此时要读取靠近较紧密沉积的红细胞层的刻度作为血沉数值。

6.中等度以上贫血的病人做血沉测定时，可做贫血校正试验，

即将病人血用枸椽酸钠溶液按9：1比例抗凝，以3()0()「/1］山］速度离心301后11

之后，将上层血浆完全吸出，然后按正常人红细胞比积情况，人为地将血浆与压积

红细胞按各0.50L/L的比例(男性病人)或按压积红细胞为0.40L/L,血浆

为0.60L/L的比例(女性病人)混合后再作ifL沉测定，报告时注明系贫血校正

后血沉数值。

7、血沉测定时室温以18—25℃为宜，温度越高血沉越快，反之减慢，但

有高效价冷凝集素时则相反。必要时需校正温度。

［参考值］

男性0T5mm/h末

女性0-20mm/h末

第二单元尿及粪便常规检查

一、尿液检查

(一)标本的采集

1.标本的种类

(1)随机尿门诊病人常用，但易受各种因素的影响，致使低浓度或临

界浓度的病理性物质和有形成分易被漏检。

(2)晨尿早晨起床后的第一次尿标本。最适于肾病患者尿液的一般检查。

(3)餐后尿通常在餐后2h收集尿标本，此标本对病理性蛋白尿和糖尿的检出更

为敏感

(4)定时尿应从排空尿液开始计算时间，将全时间内各次尿液和到时间后

排空膀胱中的尿液全部送检。定时尿最常应用的是4h,12h,24h尿。主要用于尿中

有形成份和一些化学成份的定量。

2、采集方法将尿标本随时留取于清洁容器内即可。女性应避免月经及阴道

分泌物混入，必要时冲洗外阴后，留中段尿检查。留12h或24h尿时应适当放防腐

剂(如甲苯2ml/lOOml尿液、40%甲醛液().2—().5ml/lOOml尿液、10%盐酸

l()ml/24h尿液)。若作细菌培养，则必须用无菌瓶按无菌操作留取中段尿，必要时

用无菌手术导尿送检。

(二)、尿液物理学与化学检查

1.尿量正常成人每昼夜尿量常在1000—2000ml之间，平均为1500mlo

尿量增多见于糖尿病、尿崩症、慢性肾炎（尿液缩功能障碍）等。尿量减少见于急

性肾炎、高热、水肿、休克及各种原因所致的急性肾功能不全。无尿见于严重急

性肾功能不全。

2.颜色正常为淡黄色。病理性可见乳糜尿、血尿、血红蛋白尿及胆红素尿等。

3、透明度正常新鲜尿液多透明，放置后可出现微量絮状沉淀。若新鲜尿明

显混浊可见以下情况：①尿酸盐沉淀，以粉红色结晶析出多见于酸性尿液冷却后。

加热或加碱后混浊消失；②磷酸盐和碳酸盐沉淀，淡灰白色结晶析出，多见于碱性

或中性尿液。加酸后混浊消失若为碳酸盐可产生气泡磷酸盐则无气泡产生；③脓

尿和菌尿呈云絮状沉淀，加热加酸其混浊均不消矢。

4.比密测定

（1）将尿混匀后沿管第:慢慢倒入尿量筒内，避免发生气泡，如有气泡可用毛细

吸管或吸水纸吸去。

（2）将比密计（上有1.000—1.060刻度）轻轻放于尿液内，使其悬浮于中央,

勿触及筒壁或筒底。

（3）等比密计停稳后，读取与尿液凹面相切的刻度，即为被测尿液的比密。

（4）结果判断：正常人比密为1.015—1.025之间。急性肾炎尿量少比密高；而

慢性肾炎尿量多，比密低；糖尿病病人，尿量虽多，但尿内含有糖，故比密高。尿

崩症、慢性肾功能不全，尿比密常在1.010左右形成低比密尿。

（5）注意事项：①尿量太少，不足以浮起比密计划时，可用蒸储水将尿液稀释一

倍后，再行测定。其结果应将读数末尾两位数字乘2,即得原尿液比密。②尿比密

计应保持清洁，特别是比密计的球部不能附着蛋白质，不用时放置在干净水中泡

洗后保存。③测比密时若尿液的温度（室温）与比密计上所注明温度不一致时,

每高3℃测得结果则应增加（）.（X）l；每低3℃时贝ij应减去（）.（）（）1。④蛋白尿和糖

尿按每增加l（）g/L,从尿比密中分别减去（）.005（对蛋白质而言）或（）.00乙（对

糖而言）。

5、酸碱反应（pH试纸法）：用广范围pH试纸（pHl—14）中立即取出观察颜

色变化。与标准色板比色，读取PH值。

6.尿蛋白测定一一尿蛋臼定性试验

(1)加热乙酸法

［原理］加热煮沸使蛋白质变性凝固，加酸使pH下降约达到蛋白质的等点

(pH5左右)，可促进蛋白质的沉淀，并可使加热析出的磷酸盐、碳酸盐溶解。

［方法］取15X150mm试管1只，加入清晰尿液至管的2/3高度。用试管夹

持试管下端，将试管上部斜置在火焰上加热，煮沸即止。轻轻直立试管，在黑色背

景下观察煮沸部分有无混浊。滴入5%乙酸溶液3一4滴，再煮沸后立即观察，如无

混浊出现即为阴性，如有混浊即为阳性，按下表判断结果。

加热醋酸法结果判断表

结果符号约含蛋白质(g/L)

仍清晰——0

黑色背景下轻微混浊+-<0.1

白色混浊，无颗粒及架片沉淀+().1-0.5

明显白色颗粒状混蚀，但无絮片沉淀-H-0.5-2.0

大量絮片状混浊，无凝固块+++2.0-5.0

出现凝固块并有大量絮片状沉淀++++>5.0

［注意事项］①尿液标本要新鲜，陈旧尿液因大量细菌生长可引起假阳性。标

本内含有其它分泌物(如女性生殖及泌尿道分泌物)也能出现假阳性。②尿登白含

量很少量，加酸后始出现混浊。因此操作时必须遵照加热、加酸、再加热的程序。

加入乙酸量也要适当。过多或过少均可使阳性反应程度减弱。③限盐病人因尿液

电解质含量减少，可致假阴性。因此，试验时先滴加饱和氧化钠1—2滴于尿液中,

再进行操作。

(1)磺基水杨酸法

［原理］磺基水杨酸亦称磺柳酸，为生物碱试剂，在略低于等电点的酸性环境

下，其阴离子(酸根)与蛋白质的氨基端阳离子结合，成为不溶的蛋白盐而沉淀。

〔方法］取试管2只，各加入弱酸性清新尿1ml,

于一管中加20g/L磺基水杨酸溶液2滴，轻轻混匀，另一管不加试剂做空白

对照，1分钟内立即观察结果，结果判断如下表：

磺基水杨酸法结果判断

符号结果

（一）:尿液外观仍清晰透明

极微量：仅在黑色背景前可见极轻微混浊

微量：不需要黑色背影即可见到轻度混浊

(+):明显的白色混浊但无颗粒出现

(++):明显混浊并出现颗粒

(+++):严重混浊并有大凝块下沉

(++++):更明显混浊并有絮状沉淀。

(++++):更明显混浊并有絮状沉淀。

［注意事项］①混浊尿应离心后取上清液做试验；②本法非常敏感，判断结果时

间应严格控制在15秒内；③尿液碱性较强时，滴加试剂后局部出现白色混浊，但

轻摇即消失，应于尿液内加入冰乙酸数滴，酸化尿液到pH5再作试验;④尿中含高

浓度尿酸或尿酸盐时正呈假阳性反应，特点为滴加试剂15秒后，尿液逐渐呈蛛丝

状混浊，其后慢慢扩散，薄薄覆盖于尿液表面，加热或加碱可迅速消失。

（3）试带法

［原理］试带上的酸磴指示剂浸酚蓝的pH范围是3.0〜4.6,在pH3.0的拘椽酸

缓冲系统中浸酚蓝指示剂的阴离子，与尿液中的蛋白质（白蛋白）作用，产生黄绿

色颜色变化再与标准色板比色，测得蛋白质含量。呈色深浅与蛋白质含量成正比。

［方法］将试带浸于尿液中，立即取出，在溶器边缘除去多余尿液，15秒后与

标准色板比色。结果判断如下表。

溟酚蓝试带法结果判断表

反应颜色符号约蛋白质量g/L

淡黄色—<0.1

淡黄绿色+-().1-0.3

黄绿色+0.3-1.0

绿色++1.0-3.0

绿灰色+++3.0-8.0

蓝灰色++++>8.0

［注意事项］①尿标本要新鲜；②试带应存放于阴凉干燥处，避免沾污酸碱及

与手接触，有效期一般为一年；③此试带检测的主要是白蛋白，对球蛋白几乎不反

应故不适用于非选择性蛋白尿标本（肾炎患者）此时应改用200g/L磺基水杨酸

法测定。④尿液pH{3或）8时，超过了试带的缓冲能力，可出现假阴性或假阳性结

果，故可用氢氧化钠或稀乙酸校正尿液pH至5—7再作测定；⑤尿液中盐类较多,

特别是磷酸盐较多时，可出现假阳性，加稀乙酸调节pH后可以纠正。康液中如含

有大量红、白细胞，应离心后取上清尿液测定蛋白。⑥黄疸尿、血尿、浓缩的深色

尿都影响结果判断，应加以纠正。

7、尿糖测定

（1）葡萄糖氧化酶试带法

［原理］见血糖测定

［方法］将试带浸入尿中，1秒钟后取出与标准比色板比较并报告。

［参考值］空腹尿糖（一）

2.尿葡萄糖定量测定（葡萄糖氧化酶法）

［原理］见血糖测定

［方法］先做尿糖定性试验，大概可估计出尿糖量，然后用蒸储水稀释尿液在

含糖量约“+”范围。其余操作同血糖，结果乘以稀释倍数。

［参考值］0.5—1.0mmol/L

当血糖＞8.88retool/L,超过肾阈时可出现尿糖。

［注意事项］

葡萄糖氧化酶法只对尿中葡萄糖产生特异性反应，而与尿中其他糖类和还原

性物质不起反应，故特异性较高。如尿中含有比受体对氧亲和力更强的物质时，则

可产生假阴性。如维生素C.左旋多巴代谢物等。试验前患者应停用维生素C24h

以上。

（三）尿液自动化分析仪检查

［原理］尿液自动化分析仪是用球面积分仪和双波长法测定试剂带上各种试

剂垫和尿液接触后出现的不同颜色变化，并分别在数码管上显示，并打印出报告。

试带上另有一个试剂垫补偿区，作为尿液本底颜色，以对有色尿液及仪器变化等

因素产生的误差进行补偿。目前试带最多可测十一项，均系一般化学反应。原理

如下：

1.臼细胞（LEU）中性粒细胞中存在特异性酯醇，可分解呵噪酚酯，释放出阻

口朵酚，呼I噪酚与重氮盐发生反应而呈紫色，依其显色之深浅而换算为白细胞数。此

法只能测中性粒细胞而不与单核，淋巴细胞起反应。

2、亚硝酸盐(NIT)引起泌尿道感染的某些细菌可使硝酸盐还原为亚硝酸盐,

将膜块中对氨基苯神酸重氮化生成重氮盐，再与N-1一蔡乙二胺二盐酸化物偶联

使膜块产生粉红色。

3.pH试剂垫上含有甲基红(pH阈值4.6—6.2)和滨麝香草酚兰，(pH阈值6.7

-7.5),二者适量配合可反映尿液pH5—9的变异范围。在酸性尿中为橙红色到黄

色，碱性尿中为绿色到蓝色。

4、蛋白质(PRO)采用指示剂蛋白质误差的原量，对尿中的白蛋白特别敏感,

球蛋白的敏感性仅是白蛋白的1/100-1/5(),原理见尿蛋白试带法。

5.葡萄糖(GLU)葡萄糖氧化酶催化葡萄糖形成葡萄糖酸和过氧化氢过氧化

物酶再催化过氧化氢和碘化钾色原反应呈现黄绿色至棕色。

6.酮体(KET)膜块中的亚硝基铁氟化钠可与尿中的乙酰乙酸，丙酮产生紫色

反应，对乙酰乙酸的敏感性为50—100mg/L,对丙铜仅为400—700mg/L,不与”

B一羟丁酸起反应。故对酮症的早期诊断或治疗监测不够敏感。

7、尿胆原(UBG)尿胆原在酸性条件下与对二甲氨基苯甲醛作用，生.成

樱红色化合物。

8、胆红素(BIL)结合胆红素在强酸介质中与2,4一二氯苯胺重氮盐起偶

联反应，呈紫红色。-,

9、血红蛋白或红细胞(潜血)尿中红细胞内的或其破坏释放的血红蛋白均含有

血红素成分(BLD),它具有类似过氧化物的样活性，使过氧化氢茴香素分解巴新生

态氧，氧化色素原邻联甲苯胺而呈色。

10、尿比重(SG)：试纸条中的多聚(甲基酸)马来酎的PKa值与离子浓度相

关，尿标本中离子浓度越高。其酸性基团(氢离子)解离越多，使膜块pH改变，并通

过澳麝香草酚兰的颜色变化显示出来，低离子浓度为蓝绿色，离子深度升高转为

黄绿色，进而换算成尿比重，该方法比重跨度大，只适于粗筛，为尿自动检查中最

不敏感的指标，尤其不适于浓缩稀释试验使用。

11、维生素C：膜块中含一定量的嚷嗪和恶嗪化合物，它们在氧化状态时显

颜色，被维生素C还原时退色。

［仪器、试剂］

1.尿液自动化分析

2.标准试带和测定试带

3.阴性与阳性质控液

⑵法］

1.开机预热。

2.取标准试带，同时取测定试带二条分别于|月性、阳性质控液中浸泡(浸泡时

间按仪器厂家要求)，取出并在质控液瓶壁刮去多余尿液，立即依次将标准试带,

阴性、，阳性质控测定试带放入比色槽，按“运行”键，仪器即自动打印出各种结

果。如结果在允许范围内，即可进行正式检测。标准试带是各种成分定值的颜色,

不能浸质控液，用后立即收回保存供永久使用。

3、将测定试带浸于待测新鲜而且混匀的尿液中一定时间(按仪器说明)取出刮

去多余尿液，放入比色槽，按运行键，即可获得打印报告。

［参考值］

蛋白质(PRO)neg(<25/ul)

亚硝酸盐(NIT)neg(阴性)

PH4.6—7.4

蛋白质(PRO)neg(<().3g/L,30mg/dl)

葡萄糖(GLU)norm(<2.8mmol/L,50mg/dl)

酮体(KET)neg(<0.86mmol/L,5mg/dl)

尿胆原(UBG)norm(<17umol/L,Img/dl)

胆红素(BIL)neg(<8.55umol/L,0.5rug/dl)

红细胞(Ery)或潜血(BLD)neg(<10/ul)

比重(SG)随HL尿1.0()5-1.030,晨尿1.015-1.025

维生素C(VTC)<0.6mmol/L(1Omg/dl)

*neg(阴性)norm:正常

［注意事项］

I.尿液自动化分析仪所需尿量少，出结果快，具有半定量的性质，特别适用于

大批尿标本的常检查。但对试带测定结果异常，或有明确肾脏疾患的病人还需采用

精典的常规加镜检的方法。

2.自动化测定的不足之处是：尿十一项中有三项（pH、比密、蛋白）是通这pH

变化反映的，故各种影响pH的因素都可使比密与蛋白测定影响。因此只有在测定

时的pH的正常范围内，后二者的结果才可信。白细胞数值可因蛋白质浓度增高

（>5g/L）或用大剂量先锋IV、庆大霉素而假性减低，有人认为隐血试剂过于敏感而

引起红细胞假性增高，实际上有可能是由于红细胞的破坏而造成自动化分析与镜

检不符。此外自动化分析对尿中脓细胞、管型等有形成份不能查出。大剂量维生

素C对隐血、尿红细胞、尿糖、亚硝酸盐等检查都可致假阴性，此时尿中维生素C

的浓度分别是大于50mg/dl（尿糖检查）,大于40mg/dl（潜血检查），大于25rug

/dl（胆红素和亚硝酸盐检查）。

3、测定试带有一定保存期，因此要注意做好质控。

（四）显微镜检查

1.尿沉渣制片可用离心或不离心法。离心标本较不离心标本浓缩约50倍，可

提高检验质量。

I方法］:离心法是将新鲜尿混匀，取10ml放入试管中，以500G离心机半径

20cm时转速1500r/min血）。离心5min后弃去上清液，使沉渣和残留液量为

0.2ml,轻轻摇动试管，用吸管吸取混合液滴入载玻片上。用18mmX8mm的盖玻

片覆盖尿沉渣后镜检。不离心法是将新鲜尿液混匀后，取I滴于载玻片上覆盖盖玻

片，立即镜检。镜检时先用低倍镜（lowpowerfield,LPF,100倍）进行全视野观察尿

沉渣分布状态，再换高倍镜（highpowerfield,HPF,400倍）观察10个高倍视野，以

所见最低与最高值报告之。

2,尿沉渣中镜检物及期形态（定量）

1）细胞

（1）红细胞为浅黄色双凹圆盘形，类似丁外周血不染色涂片上的红细胞形

态。在浓缩尿中红细胞常皱缩成表面带刺，颜色较深的球形。在低渗尿或尿素作用

下，红细胞吸水胀大，血红蛋白从红细胞中脱了，成为一个无色的圆圈，称为红细

胞淡影。正常人离心尿中红细胞为0—偶见/HPF。如1—2/HPF为增多,>3/HPF

为镜下血尿。

⑵白细胞新鲜尿中臼细胞外形完整，无明显的退行性变，胞质内颗粒清晰

可见，胞核清楚，常分散存在。炎症时，死亡的中性粒细胞，外形多不规则，结构模

糊，胞质内充满粗大颗粒，核不清楚，细胞常连成团，细胞间界限不明显，此时可

称为脓细胞。正常人离心尿中自细胞应＜5个/HPF。

（3）上皮细胞

鳞状上皮细胞形态扁平而大，似鱼鳞样，不规则，核小，呈圆或卵圆形。正

常尿中，常见少量此类细胞。妇女尿中较多出现，临床意义不大。

移行上皮细胞有表层移行上皮细胞，多呈不规则圆形，核较小常居中央；中层移

行上皮细胞，常呈梨形、纺锤形，故又称尾形上反细胞，核稍大，呈圆或椭圆形；

底层移形上皮细胞，体积较小，形态较圆，反光性强，如尿中较多出现，且常有红

细胞、脓细胞同时出现时，则可能为泌尿道炎症。

肾小管上皮细胞为中性粒细胞的1一1.5倍大小，常呈多角形，具有大核，核膜厚

而易见，胞质内可见脂肪滴或小空泡-正常尿中不见，于急进性肾小球肾炎、肾小

管损伤、急性肾上管坏死利尿期、肾移植术排异反应时易见。

2）管型

透明管型表面光滑，两端钝圆、管型内清晰透明。正常人晨尿中可偶然见到。

颗粒管型管型内有多数颗粒、有大而粗，亦有小而细者，称为粗或细颗粒管

型。正常尿中见不到。

细胞管型管型如含有许多肾小管上皮细胞称为上皮细胞管型；含有许多红

细胞者称为红细胞管型；有许多白细胞（脓细胞）者称为白（脓）细胞管型。正常尿中

见不到。

蜡样管型光滑钝端有高度的折光性，无色或黄色，外形有时弯曲或有切迹。

见于慢性肾功能不全。

目前在欧美国家已开始推出尿沉渣酌定量分析，以期使尿沉渣镜检标准化,

并与尿液干化学自动分析问有更好的可比性。具体方法是：采用专为尿沉渣分析

设计的10ml尿液离心管，离心条件同前；离心后弃上清，可保证留下的尿沉渣为

0o25ml,将尿沉渣混匀后取一滴冲入尿沉渣定量分析板，然后计数分析板上固定

体积（lul）计算区内有形成份的数量，并以每微升数报告之。

3）盐类与结晶

（1）碱性尿内注意三联磷酸盐、尿酸镂、磷酸钙、碳酸钙、无定形磷酸盐类（图

12及下表)

(2)酸性尿内注意尿酸、草酸钙、非晶形尿酸盐及其他盐类结晶，如凫氨酸、酪

氨酸、胱氨酸、胆固醉、胆红素结晶

3.报告方式

(1)红细胞、白细胞和上皮细胞，以高倍镜视野表示最低和最高值。如红细

胞0—3/HPFo

(2)管型用低倍镜视野表示最低和最高值。如透明管型0—5/LPF。

(3)结晶数量用高倍镜视野以“+”表示，按每占据视野1/4区为“+”，不

必计数。

二、粪便检查

粪便检查(fecesexamination)是诊断消化道炎症、出血、寄生虫病必不可少的

化验项目.隐血试验有助于消化道出血病因的鉴别及恶性肿瘤的普查，故粪便检查

在临床上广泛应用。

［要求］

1.掌握粪便常规检查的具体步骤。

2.学会辩认粪便中常见的细胞成分、寄生虫及虫卵和脂肪小滴肌肉纤维等食物

残渣。

3.掌握隐血试验的原理、操作、结果判断及临床应用等。

(一)一般性状及显微镜检查

［仪器、试剂］

I.光学显微镜

2.载玻片、盖玻片、小竹签。

3.生理盐水。

⑵法］

1.首先对粪便标本进行肉眼观察，包括颜色如何，是否成形，有无粘液，脓血

成分及肉眼可见的寄生虫等。并于报告结果时加以描述。

2.将粪便涂片后进行显微镜检查。

(1)于光洁的载玻片中心部位加一小滴生理盐水。

(2)用小竹签挑取少许待检粪便，如有粘液、脓血等病理部分则挑取之。如无

病理成分可自标本不同部位及粪端各挑取少许，置生理盐水中轻轻研碎后，覆以

18mmX18mm盖片.镜检。

(3)先用低倍镜浏览，注意有无虫卵(图14)、原虫或不消化食物残渣(图15)o

(4)转高倍镜后镜检，至少观察10个视野。如见有红、白细胞等应作粗略计数,

即记录其10个高倍视野中所见的最低至最高值，如白细胞0—8/HPF,红细胞5

—10/HPF,肠粘膜上皮细胞5—15/HPF等。

(5)粪便中的白细胞多为中性粒细胞，为灰白较薄的圆球形，无折光性，不见

其核，胞质中充满细小颗粒。人体酵母菌有的与白细胞形态颇相似，可借破坏试验

来鉴别，即于载玻片上滴加蒸储水一滴，涂粪便后覆以盖片，迅速镜检，凡人体酵

母菌遇水破坏而消失，白细胞则因不易破坏而仍可察见。粪便中的新鲜红细胞为淡

黄色有轻度折光性的圆形细胞，较白细胞为小。肠粘膜上皮细胞为灰色规则或不规

则的矮柱状上皮，两端呈钝圆形，胞核辩以察见.

图14常见人体寄生虫卵

(6)未消化的食物残渣，如脂肪小滴、肌肉纤维及淀粉颗粒等在胰腺功能不全

时较易见到应加以描述。

图15粪便的显微镜所见

［注意事项］

1.粪便标本不可太少，否则不易发现异常成份。标本应及时检验，否则其细胞

成份可因变性破坏而消失。

2.涂片时生理盐水用量不可过多，否则粪汁将溢于盖片之外而导致污染。

3、涂片厚度应适宜，以涂片制成后，隔着涂片隐约看清字体为度。过厚时每

致内含物簇集难以辨认，过薄时可因取材过少而易漏检。

4、如遇稀汁样粪便，可不必滴加生理盐水而直接驭滴覆以盖片后镜检。

［参考值］

正常成人的粪便多为黄褐色成形无粘液或脓血，镜检时不见细胞或虫卵。

(二)粪便隐血(occultblood,0B)检查

［原理］血红蛋白中的血红素成分与过氧化物酶的结构相似(但其结合的

蛋白质不同)而具有弱过氧化物酶活性，也能催化过氧化氢放出新生态氧。而氧

化受体，使之呈色。故可借以识别微量血液。加冰乙酸是为了加速其反应。常见

的受体试剂有邻联甲苯眩、联苯胺、还原酚酚、无色孔雀绿匹拉米洞、愈创木酯

等。现介绍常用的匹拉米洞法。

［试剂］

1.50g/L匹拉米洞酒精液

匹拉米洞5g

95%酒精100ml

2.3.0%双氧水

3.冰乙酸

［方法］

1.取消毒洁白棉签一支于旋转过程中滴加50g/L匹拉米洞酒精液，直至全部

浸温为止°再旋转滴加等量的3%双氧水及一滴冰乙酸02.立即用小竹签挑取

少许粪便反复涂抹于上述棉签，如出现紫蓝色为阳性反应，其弱阳性呈萝紫蓝色,

如涂抹粪便后3min仍不显色时，为阴性反应。

［注意事项］

1.3%双氧水如已矢效则将导致假阴性反应，可通过血膜发泡试验来进行鉴定,

即将双氧水1小滴置于末染色血膜上，如渐发生多数小气泡表示有效，否则应更

新。

2.试验用具不得沾染血迹或脓液，否则均可导致假阳性反应。在新制的消毒棉

签上来作试验，既可避免脓血成分的干扰，又因背地洁白而易于识别弱阳性反应。

3.为准确判断隐血试验的结果，应请受试者素食3天（不吃肉类及含血食品）后

留驭粪便标本。如粪便中脓液很多可呈假阳性反应，因中性粒细胞中富含氧化物酶,

此时可将少许粪便用生理盐水于试管中研成糊状后，用酒精灯火焰煮沸2分钟，以

破坏白细胞中的氧化物酶（或其它易热性触陶），冷却后加一滴冰乙酸，再沼管壁徐

徐加入反应液（3%双氧水及50g/L匹拉米洞各等量）后，观察其接触环，如仍

出现紫蓝色为确有隐血存在。如不再出现，说明前次的结果为假阳性反应。

4.铁剂能干扰试验的结果，故试验前3天应停服。

5、疑有消化道出血特别是消化道恶性肿瘤时，一次隐血试验阴性不能否定诊

断，应至少连续检查3天，每次从粪便不同部位驭材二次来作试验，.如均为阴性

时，有利排除该诊断。

二隐血免疫学检查法：

［原理］:胶体金标记的Hb单克隆抗体与粪便中的Hb形成金标抗原抗体复合

物，该复合物在通过包被有另一株抗Hb单克隆抗体的反应区带时，与此Hb单抗

结合而出现紫红色的阳性区带。同时有一无关的金标小鼠IgG和羊抗鼠IgG区带

做为阴性及质控对照，对检查试带是否有效。

［试剂］便隐血一步检验法拭剂盒(万华普曼生物工程有限公司

⑵法］

1.打开采便容器的盖子，取出连在盖上的采便棒，以此棒在粪便标本的6个不

同部分取便，要求达到所驭的粪便全部覆盖采便棒远端螺旋状槽沟。

2.将白盖连同含粪便标本的采便棒放回采便容器内，将白盖标拧紧，然后摇动

采便容器，使粪便溶于采便容器内的缓冲液呈均匀悬液状.

3、将采便容器尖折断，然后滴4滴悬液于反应板的样品孔中，孔下为吸附有

胶体金标记的Hb单抗和胶体金标记的鼠IgG(阴性对照)的纤维素膜，待溶液向反

应区渗透，于5分钟内判读结果。

［结果分析］

1.在测试线(C)的反应线(T)同时出现紫红色带为便隐血阳性(测试线含有抗鼠

IgG,反应线含抗Hb单抗)。

2.仅在测试线出现紫红区带为便隐血阴性。

3、整个反应区均无色带出现，说明试剂失效。

［注意事项］

1.双抗体夹心法测定便隐血的敏感性为当血红蛋白的浓度超过0.2mg/L或

0.03mg/g粪便时，就可得到阳性结果。该法特异性很好，各种动物血红蛋白达

50()n里/L时对试验无干扰，辣根过氧化物酶浓度达2g/L时亦无干扰。

2.由于方法敏感度高，而正常人肠道每天约有0.6ml的生理性失血，特别是当

服用对胃肠道有刺激的药物时，在少数正常人也可能造成阳性结果，故要注意结

合临床考虑。

3.间断性出血或样品驭材不当时可造成结果阴性。

4、免疫法便隐血试验目前被认为是对大肠癌普查最适用的试验因免疫学隐血

试验主要检测下消化道出血，故有部分上消化道已血不能检出。其原因是血红蛋白

或红细B包经过消化酶降解变性或消化殆尽已不具有原来的免疫原性。

第三单元浆膜腔穿刺液与脊髓液检查

一、浆膜腔穿刺液检查

学习要求：了解浆膜腔穿刺液常规检查的内容和检查方法，掌握漏出液和渗

出液的性质及鉴别要点。

(一)一般性状检查

1.颜色常为深浅不同的黄色，漏出液色浅淡，渗出液色较黄。其他颜色：①

红色见于结核病变、肿瘤或穿刺损伤；②乳酪色见于脓性渗出液，色黄而浑浊，含

大量坏死的脓细胞、脂肪滴、脂肪结晶、胆固静结晶，甚至出现Charcot-Leyden

结晶体，见于结核、外伤、内脏穿孔、细菌感染，由化脓性细胞所引起者，液体浓

稠、色深、新鲜者可在涂片中找到细胞；结核多为稀薄，有流动性，混有干酪样物

质，部分标本在涂片中可找到结核杆菌；放线菌病所致的脓性渗出液，也很浓稠,

呈黄色或黄绿色，常有恶臭，可找到特有的菌块。③乳白色见于胸导管或乳糜管破

裂，呈乳汁样，浑浊，日极细小的脂肪球构成,SudaniII染色阳性。见于因外伤、恶

性肿瘤，丝虫病所致的浆膜腔积液。④绿色见于铜绿假单胞菌感染。

2、透明度漏出液多为透明清澈之液体；渗出液透明度降低，呈不同程度的

浑浊，视其中有形物体之多少而定。透明度按清晰、微混、浑浊等加以报告。

3.比密

［仪器］小比密计,100mL量筒，温度计。

［方法］应于穿刺后即刻测定，方法与尿液比密检查法相同。

［注意事项］

(1)穿刺液冷却至20℃以下时，即可析出纤维蛋白而凝固，影响结果的正确性,

故应及时检查。

（2）标本温度影响比密，故在检查比密前应先测标本温度，按15℃时，每高3℃

增加比密0001；低于15℃时,每低3℃减少比密0.001。

［结果］漏出液比密在1.018以下，渗出液比密多在L018以上。

4.凝固漏出液不易凝固；渗出液中含纤维蛋白原、凝血因子III等故易凝固。

（二）化学检查

1.Rivalta试验

［原理］渗出液中浆膜粘蛋白增多，该蛋白属于酸性糖蛋白，其等电点在

pH3—5之间，在酸性溶液中可形成白色沉淀。

［仪器和试剂］200mL量筒、滴管、冰乙酸。:

［方法］在200mL量筒中加蒸储水200mL,加冰乙酸3—4滴，混匀静置数分

钟。用滴管吸取穿刺液靠近液面轻轻滴入试剂中，在黑色背景下观察沉淀生成和

下沉情况。此试验可按比例缩减试剂用量，在试管中进行.

［结果判断］

阳性：穿刺液滴入后产生明显的白色沉淀，•沉淀物下沉速度较快白色混浊物

的长度在20cm以上或到达量筒底部。

阴性：穿刺；夜滴入后无沉淀生成；或产生微量沉淀且未沉到筒底即消失者

为阴性反应。

［临床意义］渗出液多呈阳性反应；漏出液多为阴性反应。

［注意事项］本试验的特异性不高，一些处于吸收期的漏出液也可呈阳性反

应。肝硬化所致的腹水因球蛋白增多也呈阳性，但此种液体直接滴在蒸储水中即

出沉淀，可资鉴别。

2.蛋白定量（同血浆蛋白定量）

［临床意义］漏出液25—30g/L；渗出淮＞30/L

（三）显微镜检查

1.细胞计数方法与脑脊髓液同。因穿刺液易于凝固，故应在标本抽出后即刻

检杳。如不能立即检查应加抗凝剂防凝（50mL穿刺液加106mmol/L枸椽酸钠

3mL）o漏出液细胞较少,常＜100X106/L（100/ul）。渗出液细胞数较多常＞500X

106/Lo

2.细胞分类将抗凝的穿刺液混匀，取10mL置离心管中，以1.500—2.000r/

min速率离心沉淀5min,取沉淀物涂片,Wright法染色后镜检。除对血细胞分类外,

还应区分组织细胞、间皮细胞和癌细胞；对于肿瘤细胞还应作巴氏染色检查。

3、细菌涂片检查将标本离心后以沉淀物制成涂片，作Gram染色或抗酸染

色后镜检。临床常见的细菌为大肠埃希氏菌、链球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、

铜绿假单胞菌、放线菌、厌氧菌和炭疽杆菌等。

［注意事项］以上鉴别点并非是绝对的，即使是漏出液，因机械刺激（反复穿

刺）或毒性刺激也可使之呈渗出性特点；或者是渗出液病因，如病人处于恶液质状

态，也可呈漏出液性状。癌症所致的积液，其特点更接近于渗出液。

二、脑脊髓液检查

［要求］脑脊髓液检查（examinationo