复方磺胺甲噁唑片双组分含量检测的设计

目录TOC\o"1-4"\h\u1引言 51.1复方磺胺甲噁唑片及重要组分的介绍 51.1.1复方磺胺甲噁唑片的介绍 51.1.2磺胺甲噁唑的介绍 51.1.3甲氧苄啶的介绍 61.2复方磺胺甲噁唑片的功能及用法用量 61.2.1复方磺胺甲噁唑片的功能 61.2.2复方磺胺甲噁唑片的用法用量[5] 7成人用法用量 7未成年人用法用量 7其他症状用量 71.3磺胺类药物未来发展 71.4项目研究及内容 82材料和方法 82.1实验仪器与材料 82.1.1实验仪器 82.1.2实验材料 92.2实验方法研究及选择 92.2.1检验方法分类及特点 9HPLC法 9双波长薄层扫描法 9高效毛细管电泳法 10一阶导数光谱法 10紫外分光光度法 102.2.2试验方法的选择 11紫外分光光度法的介绍 11实验原理 112.3实验方案设计 122.3.1溶液配制 12配制稀释介质溶液 12配制标准溶液 12配制样品溶液 122.3.2最佳测定波长的选择[18] 12SMZ测定波长的确定 12TMP测定波长的确定 122.3.3绘制标准系列溶液光谱曲线 12绘制SMZ标准系列溶液光谱曲线 13绘制TMP标准系列溶液光谱曲线 132.3.4样品组分含量测定 13样品中SMZ组分含量的测定 13样品中TMP组分含量的测定 132.4实验条件选择 132.4.1溶液介质的选择 132.4.2稀释介质溶液浓度的选择 13SMZ稀释介质溶液浓度的选择 13TMP稀释介质溶液浓度的选择 132.4.3双组分标液含量浓度比例的选择 142.4.4标线组分溶液浓度[19]的选择 142.4.5溶液稳定性实验 142.4.6测定波长的选择 142.5实验条件的优化 142.5.1溶液介质的选择 142.5.2稀释介质溶液浓度的选择 14SMZ稀释介质溶液浓度的选择 14TMP稀释介质溶液浓度的选择 152.5.3双组分标液含量浓度比例的选择 162.5.4标线组分溶液浓度的选择 162.5.5溶液稳定性实验 172.5.6测定波长的选择 173实验结果与分析 173.1溶液配制 173.1.1配制稀释介质溶液 173.1.2配制标准工作溶液 173.1.3配制标准系列溶液 173.1.4配制样品溶液 183.2最佳测定波长的选择 183.2.1SMZ测定波长的确定 183.2.2TMP测定波长的确定 193.3绘制标准系列溶液光谱曲线 203.3.1绘制SMZ标准系列溶液光谱曲线 203.3.2绘制TMP标准系列溶液光谱曲线 203.4样品组分含量测定 213.5数据处理 213.5.1标准工作溶液浓度计算 213.5.2标准系列溶液浓度计算 213.5.3样品浓度计算 224结论 234.1复方磺胺甲噁唑片的药物组分含量分析 234.1.1SMZ组分分析 234.1.2TMP组分分析 234.2最佳实验条件确定 234.3最佳实验步骤确定 24致谢 24参考文献 25复方磺胺甲噁唑片双组分含量检测的设计摘要：复方磺胺甲噁唑片是人们最经常用的抗菌药物，主要是由甲氧苄啶（TMP）以及磺胺甲噁唑（SMZ）组分。次药物的含量测定方法不多，本文的主要内容为寻找比较简单、方便的检测方法，以及寻找最优化的检验路线。本法采用双波长紫外分光光度法对药物的两个主要成分进行检测分析，通过单因素实验选择了六个直接影响的因素：配制溶液介质、配制介质浓度、双组份标液浓度比例、标液浓度的选择、测定波长选择、溶液稳定性。后进行正交试验，选取了适合实验的最佳条件，结果如下：1.用乙醇来配制稀释浓度比例为3:2的0.09g/LSMZ和0.06g/LTMP标准工作溶液；2.用0.4%氢氧化钠来做为SMZ标准系列溶液的稀释溶液介质；用（0.625mL浓盐酸+KCl6.9g）/L来作为TMP标准系列溶液的稀释溶液介质。3.溶液稳定性良好，最佳吸收波长选择根据当天配制的溶液来确定比较合适。关键词：磺胺甲噁唑，甲氧苄啶，双波长，多组分测定Designoftwo-componentcontentdetectionofcompoundsulfamethoxazoletabletsAbstract:Compoundsulfamethoxazoletabletisourcommonlyuseddrug,mainlycomposedofsulfamethoxazole(SMZ),trimethoprim(TMP)components.Therearenotmanymethodstodeterminethecontentofcompoundsulfamethoxazoletablets,andthemaincontentofthispaperistofindarelativelysimpleandconvenienttestmethods,andtofindtheoptimaltestroute.Thetwo-wavelengthultravioletspectrophotometryisusedtodetectandanalyzethetwomaincomponentsofthedrug,andsixfactorsaredirectlyselectedthroughone-factorexperiment:preparationsolutionmedium,preparationmediumconcentration,concentrationratiooftwo-componentstandardsolution,selectionofstandardsolutionconcentration,determinationwavelengthselectionandsolutionstability.Thentheorthogonaltestwasperformedtoselectthebestconditionssuitablefortheexperiment.Theresultsareasfollows:Standardworkingsolutionof0.09g/LSMZand0.06g/LTMP;2.Use0.4%sodiumhydroxideasdilutionsolutionmediumofSMZstandardseriessolution;use(0.625mLconcentratedhydrochloricacid+KCl6.9g)/LasdilutionsolutionmediumofTMPstandardseriessolution.3.Thesolutionstabilityisgood,andthebestabsorptionwavelengthisdeterminedaccordingtothechoiceofthesolutionpreparedonthesameday.Keywords:sulfamethoxazole,trimethoprim,double-wavelength,multicomponentdetermination；1引言1.1复方磺胺甲噁唑片及重要组分的介绍1.1.1复方磺胺甲噁唑片的介绍复方磺胺甲噁唑片[1],磺胺类抗菌药，是磺胺甲噁唑(SMZ)与甲氧苄啶(TMP)[2]的复方制剂，具有良好抗菌作用。比较磺胺甲噁唑单药特别是对大肠埃希菌、流感嗜血杆菌以及金黄色葡萄球菌的抗菌效果明显增强，也具有较好的抗微生物活性。药品作用原理为:SMZ作用于干扰叶酸的第一步合成，TMP作用于代谢第二步合成出的叶酸。随机抑制二氢叶酸还原酶的使用，二者一起用可以一起阻断细菌的叶酸代谢。本药品的协同抗菌作用与单药相比有所增强，耐药性细菌株有所减少。然而近年来细菌对本品的耐药性亦呈增高趋势[3]。1.1.2磺胺甲噁唑的介绍磺胺甲噁唑，简称SMZ，化学式为C10H11N3O3S，分子量为253.278，分子结构式如图1-1所示。\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"有机化合物，为白色\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"结晶性粉末。本品在H2O中几乎不溶；在NaOH\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"试液、稀HCI或NH3试液中\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"易溶。SMZ临床上作为\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"抗菌剂使用，\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"抗菌谱广、作用强，对\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"葡萄球菌、\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"大肠杆菌特别有效[4]。主要用于治疗\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"禽霍乱\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"抗感染药，用于\t"/item/%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91/_blank"尿路感染、肠道感染、小儿急性中耳炎等。图1-1磺胺甲噁唑分子结构式1.1.3甲氧苄啶的介绍甲氧苄啶（Trimethoprim），简称TMP，分子量为290.318，是一种有机化合物，化学式为C14H18N4O3，分子结构式如图1-2所示，它为淡黄或白色结晶性粉末，在CH3COOH、HCI-KCI混合溶液中易溶、在三氯甲烷中略溶、在CH3CH2OH或C3H6O中微溶、在H2O中几乎不溶。甲氧苄啶为合成的广谱抗菌剂，单独用于呼吸道、泌尿道、肠道等感染病症，可用于治疗敏感菌所致的脑膜炎、伤寒、志贺菌病（菌痢）等[2]。图1-2甲氧苄啶分子结构式1.2复方磺胺甲噁唑片的功能及用法用量1.2.1复方磺胺甲噁唑片的功能复方磺胺甲噁唑片主要用于治疗肠炎，心内膜炎，急性支气管炎，淋病，骨髓炎，败血症等疾病。1.2.2复方磺胺甲噁唑片的用法用量[5]成人用法用量成年人常用量：医治细菌性感染每次TMP0.16g和SMZ0.8g，一天早晚各一次。医治卡氏肺孢子虫肺炎每次SMZ3.75～5mg/kg，磺胺甲唑18.75～25mg/kg，一天四次。成年人预防疾病用药：第一次吃每次TMP0.16g和SMZ0.8g，一天早晚各一次，后面用一样的剂量一天吃一次。未成年人用法用量2月以下婴儿禁止用药。医治细菌感染，2个月以上体重在40kg以下的婴幼儿根据体重口服，每次TMP4～6mg/kg以及SMZ20～30mg/kg及，一天早晚各一次;体重在40kg及以上的小孩用药剂量同成年人相同。其他症状用量医治慢性支气管炎急性发作的需要最少10天～两周;医治儿童急性中耳炎需要最少10天;医治卡氏肺孢子虫肺炎的需要两周～21日三周，或一周服3次。不良反应及禁忌复方磺胺甲噁唑片所致的严重不良反应较少见，但常累及各器官并可致命，如剥脱性皮炎、暴发性肝坏死、再生障碍性贫血等\t"/item/%E5%A4%8D%E6%96%B9%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91%E7%89%87/_blank"血液系统异常[6]。艾滋病患者的上述不良反应较非艾滋病患者为多见。对SMZ和TMP其中有药物过敏史的不能用；\t"/item/%E5%A4%8D%E6%96%B9%E7%A3%BA%E8%83%BA%E7%94%B2%E6%81%B6%E5%94%91%E7%89%87/_blank"孕妇及哺乳期妇女禁用该品[7]。1.3磺胺类药物未来发展磺胺类药物[3]临床应用已有几十年的历史，磺胺类药物是人工合成的化学类药品。它具有抗菌广谱、性质稳定、价格便宜、使用方便、吸收较迅速等优点。所以是现在抗生素略逊色的一大类药物，特别是更优良的新型磺胺和抗菌增效剂合成以后，使磺胺类药物有了更加广阔的前途。1.4项目研究及内容复方磺胺甲噁唑片的含量测定方法比较少。本文的主要内容为寻找比较简单、方便的检测方法，寻找最优化的检验路线。本法采用双波长紫外分光光度法对药物的两个主要成分进行检测分析，通过单因素实验选择了六个直接影响的因素：配制溶液介质、配制介质浓度、双组份标液浓度比例、标液浓度的选择、测定波长选择、溶液稳定性。后进行正交试验[8]，选取了适合实验的最佳条件。2材料和方法2.1实验仪器与材料2.1.1实验仪器表2-1实验仪器表序号仪器名称规格数量1分析天平ES224DS-BA-RSB1台2分析天平ES602DS-02S-RSB1台3紫外可见分光光度计M600-DS1台4封闭电炉可调控温1台5超声波清洗器1台7单标线吸量管各种规格若干9容量瓶各种规格若干10吸收池1cm1套13无色试剂瓶125、250、5004、1、2个14无色小口试剂瓶2500mL2个15棕色试剂瓶500mL4个16烧杯100、500mL28、16个17量筒100mL4个18称量瓶25*403个19玻璃棒5mm*20cm、8mm*30cm24、2根20称量纸10*10cm1盒21洗瓶500mL2个22洗耳球60mL1个23药匙18个24一次性滴管3mL若干25移液管架1个26滴定管架1套27擦镜纸若干28个人安全防护用品1套29白色塑料筐50×38×14、37×29×11cm各1个30滤纸定性、定量3.0×7.0cm各1盒31实验室用抹布30×30cm两块32实验室用毛刷中号1个33洗涤剂250mL1瓶34带把塑料刻度计量烧杯1000、500mL各1个2.1.2实验材料表2-2实验材料表序号药品、试剂名称规格1磺胺甲噁唑（SMZ）GR2甲氧苄啶（TMP）GR3碘化钾AR4无水乙醇AR5盐酸AR6氢氧化钠AR7氯化钾AR8去离子水或蒸馏水4.5L复方磺胺甲恶唑片（国药准字H44023640）特一药业集团股份有限公司产2.2实验方法研究及选择2.2.1检验方法分类及特点复方磺胺甲噁唑片含量的测定方法[9]有：HPLC法[10]、双波长薄层扫描法[11]、高效毛细管电泳法[12]、一阶导数光谱法[13]、双波长光分光光度法[14]。HPLC法优点为检测速度快、高效率、准确性好，在识别和量化化学成分方面用途广泛。缺点为有局限性、成本高，而且分析过程较为复杂。HPLC对某些化合物的灵敏度较低，有些化合物由于不可逆吸附而无法检测到。双波长薄层扫描法优点为操作方便、检测速度快、设备简单、显色容易等特点；混合物易分离，可以使用有强腐蚀性的显色剂。缺点是对分离生物高分子效果不好。高效毛细管电泳法优点是高效塔板数目在105-106片/m间，当采用CGE时毛细管电泳色谱图，踏板数可达107片/m以上；可以进行nL级微量进样，并可多模式使用，比较经济。缺点为制备能力差；灵敏度比较低。一阶导数光谱法优点是方法简便、快速、准确。缺点是对复杂组分可不经分离而直接测定。紫外分光光度法优点是灵敏度较高，一般为10-7次方到10-4次方g/mL；准确度较好，相对误差一般在0.5%；仪器设备简单，操作方便，分析速度较快；缺点是在实际仪器中，波长选择器并不完美，来自宽波长范围的少量光仍可能从光源传输，这可能会导致严重的测量错误。杂散光也可能来自环境或仪器中安装松散的隔间；光散射通常是由液体样品中的悬浮固体引起的，这可能会导致严重的测量误差。比色皿或样品中存在的气泡会散射光，导致无法重现的结果；仪器组件如果有没有对准位置的，特别是测定样品的比色皿，会影响测样。所以比色皿摆放位置要尽可能一样，所以一般建议进行一些基本的操作培训，以避免误差。2.2.2试验方法的选择检验复方磺胺甲噁唑片中双组分含量选用双组分紫外-分光光度法来测定。双组分紫外-分光光度法对比其他几种方法，操作更加简单，仪器更加常见，成本更低。紫外分光光度法的介绍紫外-可见分光光度法[15]是在190～800nm\t"/item/%E7%B4%AB%E5%A4%96-%E5%8F%AF%E8%A7%81%E5%88%86%E5%85%89%E5%85%89%E5%BA%A6%E6%B3%95/_blank"波长范围内测定物质的\t"/item/%E7%B4%AB%E5%A4%96-%E5%8F%AF%E8%A7%81%E5%88%86%E5%85%89%E5%85%89%E5%BA%A6%E6%B3%95/_blank"吸光度，用于鉴别、杂质检查和多组分定量测定[16]的方法。利用溶液里的待测物质在一定测定波长下发生对光的特定吸收效应，符合Lambert-Beer定律，被测吸光度与被测溶液浓度成正比，进行比较或采用吸收\t"/item/%E7%B4%AB%E5%A4%96-%E5%8F%AF%E8%A7%81%E5%88%86%E5%85%89%E5%85%89%E5%BA%A6%E6%B3%95/_blank"系数法求算出被测样品溶液的浓度。实验原理分光光度双波长法测定双组分[17]。一般选择待测组分的较大吸收波长为测量波长，用作图法找到干扰组分等吸点波长作为参比波长，在待测组分的测量波长和参比波长处测定，得到吸光度差值∆A，以∆A与被测组分浓度建立工作曲线，分析待测组分含量。2.3实验方案设计2.3.1溶液配制配制稀释介质溶液查找资料，寻找能溶解SMZ以及TMP的试剂，配制合适浓度的稀释介质溶液。配制标准溶液按药物比例进行配制标准工作溶液，准确称取适量的磺胺甲恶唑和甲氧苄啶分别用合适的溶剂配制成贮备液。分别移取适量的上述标准工作溶液，再分别加合适的稀释介质溶液稀释至合适的浓度，单取适量的乙醇，按照同样的步骤配制空白溶液。配制样品溶液称取适量的样品配制成待测液，分别移取适量的待测液，分别加合适的稀释介质溶液稀释至适量浓度。2.3.2最佳测定波长的选择[18]SMZ测定波长的确定按照分光光度法，在适合的波长范围内扫描，得到光谱图，从图里选SMZ的较大波长为测定点设为λSMZ1，过λSMZ1作垂直于波长轴的直线，直线交TMP的吸收光谱上的某一点，在过这个交点作波长轴的并行线，并行线在TMP的吸收光谱上得到一个交点，则该交点对应的波长设为参比波长λSMZ2,用△A=AλSMZ2-AλSMZ1做吸光线性，从而测定算出SMZ的含量。TMP测定波长的确定按照分光光度法，在适合的波长范围内扫描，移取适量的TMP标准工作溶液，分别加另一种稀释介质溶液稀释至适量浓度。在适合的波长范围内扫描，得紫外光谱图，从图里选TMP的较大吸收峰波长为测定点λTMP2，过λTMP2作垂直于波长轴的直线，直线交SMZ的吸收光谱上的某一点，在过这个交点作波长轴的并行线，并行线在SMZ的吸收光谱上得到一个交点，则该交点对应的波长设为参比波长λTMP1,在这两个波长处，待测组分TMP的吸光度差值ΔATMP足够大,用△A=AλTMP1-AλTMP2做吸光线性，从而测定算出TMP的含量。2.3.3绘制标准系列溶液光谱曲线绘制SMZ标准系列溶液光谱曲线磺胺甲噁唑：准确移取适量的磺胺甲噁唑标准工作溶液，用稀释介质溶液分别稀释成适量浓度的溶液，分别在λsmz1和λsmz2波长处测定吸收度，求出ΔSMZAA=λSMZ2-AλSMZ1，计算线性回归方程。绘制TMP标准系列溶液光谱曲线甲氧苄啶：准确移取适量的甲氧苄啶标准工作溶液，用稀释介质溶液分别稀释成适量浓度的溶液，分别在λTMP1和λTMP2波长处测定吸收度，求出ΔTMPA=AλTMP1-AλTMP2，计算线性回归方程。2.3.4样品组分含量测定样品中SMZ组分含量的测定SMZ的测定：在SMZ的测定波长和参比波长下测定样品溶液的吸光度，用样品的△SMZ代入标准曲线的ΔSMZAA=λSMZ2-AλSMZ1回归方程，计算出样品中SMZ的含量结果。样品中TMP组分含量的测定TMP的测定：在TMP的测定波长下测定样品溶液的吸光度，用样品的△TMP代入标准曲线的ΔTMPA=AλTMP1-AλTMP2回归方程，计算出样品中TMP的含量结果。2.4实验条件选择2.4.1溶液介质的选择磺胺甲噁唑：由于几乎不溶于水，易溶于丙酮，溶于稀氢氧化钠溶液和稀酸。微溶于乙醇（96%）。所以溶解磺胺甲噁唑在丙酮、氢氧化钠、稀酸以及乙醇中选择。甲氧苄胺嘧啶：在CH3COOH、HCI-KCI混合溶液中易溶、在三氯甲烷中略溶、在CH3CH2OH或C3H6O中微溶、在H2O中几乎不溶。因此，溶解甲氧苄胺在CH3COOH、HCI-KCI混合溶液、CH3CH2OH以及C3H6O中选择。2.4.2稀释介质溶液浓度的选择SMZ稀释介质溶液浓度的选择分别配制0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%的氢氧化钠溶液，分别用来稀释相同浓度的SMZ溶液，测定溶液的吸光度进行对比。TMP稀释介质溶液浓度的选择分别配制取（0.25mL浓盐酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（0.375mL浓盐酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（0.5mL浓盐酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（0.625mL浓盐酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（0.75mL浓盐酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（0.875mL浓盐酸+KCl6.9g）/L混合溶液、（1.00mL浓盐酸+KCl6.9g）/L混和溶液，用来稀释相同浓度TMP溶液，测定溶液的吸光度进行对比。2.4.3双组分标液含量浓度比例的选择分别配制5:1、4:1、3:2、3:1、2:1、1:1SMZ和TMP的比例的标准工作溶液，准确移取1.00至10.00mL加适合的稀释溶液稀释至50.00mL配制成系列溶液，在适合的测定波长下测定出标准曲线。2.4.4标线组分溶液浓度的选择分别配制SMZ以及TMP：0.3g/L、0.25g/L、0.2g/L、0.15g/L、0.1g/L、0.05g/L、0.01g/L标准储备液，准确移取5mL加适合的稀释溶液稀释至50.00mL。在紫外分光光度计光谱扫描中描吸收光谱[19]。2.4.5溶液稳定性实验对照品与样品的稀释液放置0.5、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0小时后分别测定，所有测定结果进行对照比对。2.4.6测定波长的选择配制适量浓度的SMZ和TMP标准工作溶液进行扫描吸收光谱，寻找合适的测定吸收波长以及参比波长。2.5实验条件的优化2.5.1溶液介质的选择因为乙醇、和稀酸能溶解SMZ和TMP，但是用稀酸来做SMZ的稀释介质溶液做出来的吸光度比较低，所以用乙醇来配制稀释SMZ和TMP标准工作溶液。用氢氧化钠来作为SMZ标准系列溶液的稀释溶液介质。用盐酸-氯化钾来作为TMP标准系列溶液的稀释溶液介质。2.5.2稀释介质溶液浓度的选择SMZ稀释介质溶液浓度的选择按实验步骤操作，实验证明选用0.4%的氢氧化钠溶液作为SMZ标准系列溶液的稀释溶液介质。氢氧化钠溶液浓度百分比与吸光度关系见表2-3、图2-1。表2-3氢氧化钠溶液浓度与吸光度的关系溶液浓度（%）0.7吸光度A0.3900.3950.3980.4000.4000.4000.401图2-1氢氧化钠溶液浓度与吸光度的关系TMP稀释介质溶液浓度的选择按实验步骤操作，实验证明选用用（0.625mL浓盐酸+KCl6.9g）/L来作为TMP标准系列溶液的稀释溶液介质最为合适。浓盐酸+KCI混合溶液与吸光度关系见表2-4、图2-2。表2-4浓盐酸+KCI混合溶液溶液浓度与吸光度的关系溶液浓度（%）0250mL浓盐酸+KCl6.90.375mL浓盐酸+KCl6.90.5mL浓盐酸+KCl6.90.625mL浓盐酸+KCl6.90.750mL浓盐酸+KCl6.90.875mL浓盐酸+KCl6.91.00mL浓盐酸+KCl6.9吸光度A0.1350.1400.1440.1470.1470.1470.148图2-2浓盐酸+KCI混合溶液溶液浓度与吸光度的关系2.5.3双组分标液含量浓度比例的选择按2.4.3实验步骤操作，实验证明选用3:2SMZ和TMP浓度比例的标准工作溶液做出来的吸收光谱图比例比较合适。具体数据见图2-3所示。图2-3标液浓度比例图2.5.4标线组分溶液浓度的选择按2.4.4实验步骤操作，因为紫外分光光度法标准曲线吸光度最大一般不超过1，实验证明选用0.09g/LSMZ标准工作溶液和0.06g/LTMP标准工作溶液比较合适。具体数据见表2-5、表2-6所示。SMZ:标线组分溶液浓度的选择表2-5SMZ不同浓度的吸光度浓度g/L50.01吸光度A2.9562.7562.3051.5080.9200.4550.091TMP:标线组分溶液浓度的选择表2-6TMP不同浓度的吸光度浓度g/L50.01吸光度A5.6884.5603.5692.5471.6500.8200.4122.5.5溶液稳定性实验按2.4.5实验步骤操作，对照品与样品的稀释液放置0.5、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0小时后分别进行吸光度测定，实验测定结果显示吸光度变化不大。实验证明该溶液在2.0小时内吸光度比较稳定。具体数据见表2-6所示。表2-6溶液不同实验的吸光度稳定时间（h）0.51.01.52.04.06.0吸光度（A）0.1500.1500.1510.1520.1550.1602.5.6测定波长的选择按2.4.5和2.4.6实验步骤操作，实验证明由于仪器和溶液等待时间问题最佳吸收波长选择根据当天配制不超过4小时溶液来确定比较合适。3实验结果与分析3.1溶液配制3.1.1配制稀释介质溶液称取8.0gNaOH溶解稀释至2L。移取1.25mL浓HCI+和13.8gKCl溶解稀释至2L。3.1.2配制标准工作溶液SMZ标准工作溶液：称取0.0225gSMZ加适量的乙醇溶解，（如果不好溶解可以用微波消解仪进行辅助溶解）,完全溶解后转移至250.00mL容量瓶中，加乙醇稀释定容。TMP标准工作溶液：称取0.0150gTMP加适量的乙醇溶解，（如果不好溶解可以用微波消解仪进行辅助溶解）,完全溶解转移至250.00mL容量瓶中，加乙醇稀释定容。3.1.3配制标准系列溶液SMZ：分别移取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mLSMZ标准工作溶液于6个50.00mL容量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液稀释定容。移取体积及对应浓度见表3-1。表3-1SMZ标准系列溶液的配制移取体积/mL0.001.002.003.004.005.006.00SMZ浓度/(mg/L)0.0001.8003.6005.4007.2009.00010.80TMP：分别移取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mLSMZ标准工作溶液于6个50.00mL容量瓶中，加浓HCI和KCl混合溶液稀释定容。移取体积及对应浓度见表3-2。表3-2TMP标准系列溶液的配制移取体积/mL0.001.002.003.004.005.006.00TMP浓度/(mg/L)0.0001.2402.4803.7204.9606.2007.4403.1.4配制样品溶液称取1片复方磺胺甲恶唑片用乙醇溶解稀释至1000mL配制成样品液。SMZ：分别准确移取待测样品液1.50mL于100.0mL容量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液稀释定容摇匀。平行制样两份。TMP：分别准确移取样品液3.00mL于100.0mL容量瓶中，加盐酸-氯化钾混合溶液稀释并定容摇匀。平行制样两份。样品溶液的移取体积和稀释倍数见表3-3。表3-3样品溶液的配制移取体积/mL定容后体积/mL稀释倍数SMZ1.50100.0200TMP3.00100.01003.2最佳测定波长的选择3.2.1SMZ测定波长的确定SMZ：分别准确移取30.00mLSMZ、10.00mLTMP标准工作溶液于100.0mL烧杯中，加0.4%氢氧化钠溶液稀释至100mL。在200.0～350.0纳米波长范围中扫描吸收光谱，确定SMZ的最大吸收波长为测量波长λsmz1，确定SMZ与TMP等吸点波长为参比波长λsmz2。SMZ：图3-1SMZ测定波长选择如图3-1所示，测定SMZ含量时，以SMZ吸收曲线的最大吸收波长257.0nm为测量波长，干扰组分TMP在此波长下的吸光度为0.058，干扰组分TMP吸收曲线的等吸点波长为303.3nm，以303.3nm为SMZ测定的参比波长。3.2.2TMP测定波长的确定TMP：分别准确移取20mLSMZ、20mLTMP标准工作溶液于100mL烧杯中，加HCI-KCI混合溶液稀释至100mL。在200.0～350.0纳米波长范围中扫描吸收光谱，确定TMP的较大吸收波长为测量波长λTMP1，确定TMP与SMZ等吸点波长为参比波长λTMP2。TMP：图3-2TMP测定波长选择如图3-2所示，测定TMP含量时，以TMP吸收曲线的较大吸收波长238.0nm为测量波长，干扰组分SMZ在此波长下的吸光度为0.230，干扰组分SMZ吸收曲线的等吸点波长为297.4nm，以297.4nm为TMP测定的参比波长。表3-4测定波长的选择测量波长/nm参比波长/nmSMZ257.0303.3TMP238.0297.43.3绘制标准系列溶液光谱曲线3.3.1绘制SMZ标准系列溶液光谱曲线根据实验方案进行绘制标准工作曲线，实验结果如下表3-5所示：SMZ：实验数据线性回归方程为A=0.06629ρ+0.00133，R为0.999993。表3-5SMZ标准系列溶液测定结果浓度A257.0mmA303.3mm△A0.0000.0000.0000.0001.8000.1280.0050.1233.6000.2520.0090.2435.4000.3770.0130.3647.2000.5000.0150.4849.0000.6270.0210.60610.800.7500.0250.7253.3.2绘制TMP标准系列溶液光谱曲线根据实验方案进行绘制标准工作曲线，实验结果如下表3-6所示：TMP：实验数据线性回归方程为A=0.05348ρ-0.00025，R为0.999995。表3-6TMP标准系列溶液测定结果浓度A238.0mmA297.4mm△A0.0000.0000.0000.0001.2400.0470.0030.0442.4800.0950.0070.0883.7200.1420.0100.1324.9600.1890.0130.1766.2000.2350.0140.2217.4400.2860.0200.2853.4样品组分含量测定根据SMZ、TMP标准工作曲线进行了样品的测定，结果如下表3-7：表3-7样品测定结果表浓度/(mg/L)ΔASMZ6.0020.3996.0020.399TMP2.3940.1282.3940.1283.5数据处理3.5.1标准工作溶液浓度计算ρρ3.5.2标准系列溶液浓度计算SMZ:ρρρρρρρTMP:ρρρρρρρ3.5.3样品浓度计算ρρρρρρAA准确度准确度4结论4.1复方磺胺甲噁唑片的药物组分含量分析本次实验数据为第五次，数据分析如下：4.1.1SMZ组分分析SMZ标准工作曲线的方程为A=0.06629ρ+0.00133，R为0.999993。样品中SMZ的含量为0.4001g/L，相对相差为0.00%，准确度为0.02%。4.1.2TMP组分分析TMP标准工作曲线的方程为A=0.05348ρ-0.00025，R为0.999995。样品中TMP的含量为0.07980g/L，相对相差为0.00%，准确度为0.25%。取不同批次样品5批，按照本法测定，数据对比如下表4-1：表4-15批次样品测定结果SMZTMP批次含量/（g/L）相对相差/（%）准确度/（%）含量/（g/L）相对相差/（%）准确度/（%）010.40000.000.000.079860.000.18020.40020.000.050.079900.000.12030.39970.000.080.080150.000.19040.40040.000.100.079880.000.15050.40010.000.020.079800.000.254.2最佳实验条件确定用乙醇来配制稀释0.09g/LSMZ和0.06g/LTMP标准工作溶液；用0.4%氢氧化钠来作为SMZ标准系列溶液的稀释溶液介质；用（0.625mL浓盐酸+KCl6.9g）/L来作为TMP标准系列溶液的稀释溶液介质。最佳吸收波长选择根据当天配制的溶液来确定比较合适。4.3最佳实验步骤确定SMZ：使用乙醇来稀释配制0.09g/L的SMZ标准工作溶液，在分别准确移取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mLSMZ的标准工作溶液，样品准确移取待测样品液1.50mL，用0.4%氢氧化钠溶液稀释。TMP:使用乙醇来稀释配制0.06g/L的TMP标准工作溶液，在分别准确移取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mLTMP的标准工作溶液，样品准确移取待测样品液3.00mL，用盐酸-氯化钾溶液稀释。测定波长选定SMZ：分别取30.00mLSMZ、10.00mLTMP标准工作溶液于100.0mL烧杯中，加0.4%氢氧化钠溶液稀释至100mL。在200纳米～3500纳米波长范围中扫描绘制吸收光谱图，以SMZ的最大吸收波长为测量波长，确定SMZ与TMP等吸点波长为参比波长。TMP：分别取20mLSMZ、20mLT