T∕HNSBSXH 07-2025 8种罗汉果皂苷的含量测定液相色谱-串联质谱法

ICS11.120.10CCSC23

HNSBSXH海南省博士协会团体标准T/HNSBSXH07-20258Determinationof8Mogrosides——highperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometry(HPLC-MS/MS)2025-12-15发布 2025-12-31实施海省博协会 发布T/HNSBSXH07-2025T/HNSBSXH07-2025版权保护文件件，或发布在互联网及内部网络等。使用许可可于发布机构获取。T/HNSBSXH07-2025T/HNSBSXH07-2025PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANIII目 次前 言 II引 言 III范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1罗汉果皂苷Mogrosides 1符号 错误！未定义书签。原理 1试剂和材料 1试剂 1试剂配制 2标准品 2标准溶液配制 2仪器设备 2试样制备 3试样制备 3试样提取 3测定 3超高效液相色谱参考条件 3质谱参考条件 3供试样品的测定 4定性测量 4定量测量 4结果计算 4精密度 4重复性 5再现性 5附录A 6附录B 7参考文献 9前 言GB/T1本文件由广西壮族自治区农业科学院提出。本文件由海南省博士协会归口。引 言罗汉果为葫芦科植物罗汉果(Swingle)C.JeffreyexA.M.LuetZ.Y.Zhang罗汉果皂苷是以罗汉果醇为母核经糖基化修饰后形成的一系列葫芦烷型四环三萜皂苷90300eV、异罗汉果皂苷Ⅴ、11-O-罗汉果皂苷当前，高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法是罗汉果皂苷分析的主要方法，但由于8T/HNSBSXH07-2025T/HNSBSXH07-2025PAGEPAGE18液相色谱-串联质谱法范围本文件规定了罗汉果中8种罗汉果皂苷含量的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于罗汉果中罗汉果皂苷Ⅱea、11-O8规范性引用文件（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法术语和定义下列术语和定义适用于本文件。Mogrosides罗汉果皂苷是以罗汉果醇为母核经糖基化修饰后形成的一系列葫芦烷型四环三萜皂苷化合物，包括罗汉果皂苷Ⅱe、罗汉果皂苷Ⅲ、罗汉果皂苷Ⅳ、罗汉果皂苷Ⅳa、赛门苷Ⅰ、罗汉果皂苷Ⅴ、异罗汉果皂苷Ⅴ和11-O-罗汉果皂苷Ⅴ等。液相色谱-串联质谱法HPLC-MS/MS原理罗汉果样品中的罗汉果皂苷类化合物用甲醇水溶液超声提取,采用高效液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量。试剂和材料除非另有规定,所有试剂均为分析纯。试剂水:GB/T6682,一级。甲醇(CH4O):色谱纯。乙腈(C₂H₃N):色谱纯。甲酸(CH2O2):色谱纯。试剂配制80%甲醇溶液:80mL甲醇,100mL,混匀。标准品1,98%。1中文名称英文名称分子量CAS号1罗汉果皂苷IIeMogrosideIIe801.0188901-38-62罗汉果皂苷IIIMogrosideIII963.15130567-83-83赛门苷ISiamenosideI1125.30126105-12-24罗汉果皂苷IVMogrosideIV1125.3089590-95-45罗汉果皂苷IVaMogrosideIVa1125.3088901-41-16罗汉果皂苷VMogrosideV1287.4388901-36-4711-O-罗汉果皂苷V11-oxo-mogrosideV1285.42126105-11-18异罗汉果皂苷VIsomogrosideV1287.431126032-65-25.4标准溶液配制罗汉果皂苷类化合物标准储备:8种(1)待测物质的标准品各10.0mg80%100mL,0.1mg/mL2~4℃下保存,备用。罗汉果皂苷类化合物混合标准溶液:用80%甲醇溶液对0.1mg/mL的单标储备液稀释10、5、2、1、0.5、0.2μg/mL的系列混合标准溶液用于绘制标准曲线。混合标准溶液应现用现配。仪器设备超高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。50℃~3303.1kW。300W。7500r/min。50~3001.4kW。6.6 0.001g0.0001g。6.7 微量移液器：10μL~100μL100μL~1000μL。试样制备试样制备0.5kg20试样提取0.5g0.0001g50mL25mL80%甲醇溶30min7500r/min5min100mL805min,合并上清液,80%甲醇溶液100mL0.22μm测定超高效液相色谱参考条件色谱柱AgilentPoroshell120SBC18(100mm×2.1mm,2.7μm)或性能相当者。8.1.2 A:0.1%甲酸水溶液,0.1mL甲酸(5.1.3)加水(5.1.1)100mL,混匀。B:乙腈。柱温:室温。流速:0.2mL/min。进样量:2μL。流动相:2。表2流动相及梯度洗脱程序步骤 运行时间/min 流动相水相/% 流动相乙腈0 0.0 80 201 3.0 77 232 5.0 77 233 18.0 60 404 18.1 80 205 22.0 80 20质谱参考条件扫描方式:负离子扫描:离子化电压:4500V。离子源温度:550℃。气帘气:氮气(97%以上),20psi。雾化气:氮气(97%以上),55psi。辅助气:氮气(97%以上),45psi。检测方式:多反应监测(MRM)。A。供试样品的测定在仪器的最佳条件下,分别取罗汉果皂苷类化合物混合标准溶液与罗汉果样品上机测8B。定性测量在相同试验条件下测定试样和混合标准溶液,若样品溶液中检出色谱峰的保留时间与基质标准溶液中目标物色谱峰的保留时间一致(变化范围在±2.5%),且样品溶液的质谱离子对相对丰度与浓度相当基质标准溶液的质谱离子对相对丰度相比较,相对离子丰度的相对偏差3B。表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许误差相对离子丰度，%允许的相对偏差，%>50±20>20~50±25>10~20±30≤10±508.5 定量测量以不同浓度混合标准溶液的浓度为横坐标,色谱峰面积(响应值)为纵坐标,绘制标准曲0.9930%。8.6 结果计算用液相色谱-质谱数据处理软件或者按照公式计算试样中检测目标物量，按公式(1)计算。(1)式中:W—试样中罗汉果皂苷类化合物的含量的数值,单位为毫克每千克(mg/kg);A—样品中罗汉果皂苷类化合物的峰面积;ρi—标准溶液浓度的数值,单位为毫克每升(mg/L);V—定容体积的数值,单位为毫升(mL);f—稀释倍数;Ai—标样中罗汉果皂苷类化合物的峰面积;m—最终溶液所代表的试样质量的数值,单位为克(g)。注:计算结果应扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。精密度重复性在重复性条件下获得的2次独立的测定结果的绝对差值不大于这2个测定值的算术平均值的15%。再现性在再现性条件下获得的2次独立的测试结果的绝对差值不大于2个测定值的算术平均值的15%。附 录 A(资料性附录罗汉果皂苷类化合物保留时间、监测离子对信息罗汉果皂苷类化合物保留时间和监测离子对信息见表A.1.表A.1罗汉果皂苷类化合物保留时间和监测离子对信息保留时间前体离子 去簇电压 碰撞电压中文名称minm/z碎片离子m/z(V)(eV)罗汉果皂苷IIe13.86799.5637.6475.5－170－65罗汉果皂苷III12.04961.6799.4637.3－170－70赛门苷I10.171123.6961.6799.2－220－75罗汉果皂苷IV11.221123.6961.6799.2－220－75罗汉果皂苷IVa10.641123.6961.6799.2－220－75罗汉果皂苷V8.431285.81123.7961.7－220－9011-O-罗汉果皂苷V6.321283.71121.6959.5－220－85异罗汉果皂苷V9.511285.81123.7961.7－220－90注：q为定量离子。附 录 B（规范性附录）8种罗汉果皂苷类化合物总离子流图和各组分离子色谱图88B.2。8图B.1混合标准溶液中8种罗汉果皂苷类化合物总离子色谱图8图B.2混合标准溶液中8种罗汉果皂苷类化合物提取离子色谱图参考文献（第一部212．LeeC.IntnseswetenrfromLoHanKuoa)[J.Exprietia,1975,31(5):533-534.KasaiR,MatsumotoK,NieRL,etal.GlycosidesfromChinesemedicinalplant,Hemsleyapanacis-scandens,andstructure-tasterelationshipofcucurbitanglycoside[J].Chemical&pharmaceuticalbulletin,1988,36(1):234-243.MurataY,YoshikawaS,SuzukiYA.SweetnesscharacteristicsofthetriterpeneglycosidesinNipponShokuhinKagakuKogakuKaishi,2006,53(10):527-533.JiaZH,YangX.Aminor,sweetcucurbitaneglycosidefromNaturalProductCommunications,2009,4(6):769-772.刘婷，王旭华，李春，等．罗汉果皂苷Ⅴ的镇咳、祛痰及解痉作用研究[J]．中国药物学杂志，2004220153-156．LuoZ,ShiH,Zhan