首医大临床生物化学实验课件11尿素的测定

二乙酰一肟法测定血清尿素尿素是人体蛋白质代谢的主要终末产物。氨基酸脱氨基产生NH3，和C02，两者在肝脏中合成尿素，每克蛋白质代谢产生尿素0．3g。尿素中氮含量为28／60，几乎达一半。通常肾脏为排泄尿素的主要器官，尿素从肾小球滤过后在各段小管均可重吸收，但肾小管内尿流速越快重吸收越少，也即达到了最大清除率。和血肌酐一样，在肾功能损害早期，血尿素可在正常范围。当肾小球滤过率下降到正常的50％以下时，血尿素的浓度才迅速升高。采用全自动生化分析仪测定清晨空腹血浆尿素，。血尿素可粗略估计肾功能损害程度，但受消化道因素影响较多，不如血肌酐测定准确，仅作为参考。

尿素是体内氨基酸分解代谢的最终产物之一。氨基酸经脱氨基作用生成氨，氨对动物机体具有毒性。肝细胞具有使氨生成尿素的作用，所以尿素的生成是肝脏的解毒功能之一。肝脏合成的尿素通过血液运输至肾脏，由尿液中排出体外。所以血中尿素的来源是肝脏，而去路是通过肾脏的排泄作用。利用血液及尿中尿素氮含量可作为排泄功能的检验。1.掌握测定血清尿素的原理和方法2.理解血中尿素含量变化的生理意义目的要求

本实验采用二乙酰一肟法测定血清尿素氮。二乙酰一肟法系根据双乙酰与尿素形成二嗪衍生物的有色复合物的显色反应。由于双乙酰本身不稳定，故用二乙酰一肟来代替，其反应式如下：

实验原理二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。回收试验试验的目的:

试验的方法:

将被测物标准液加人病人标本中，成为分析标本；原病人标本中加人等量的无被测物的溶剂作基础标本；然后用候选方法测定并得到各自浓度。检测候选方法的比例系统误差。回收:

指候选方法准确测定加入常规分析标本的纯分析物的能力。回收浓度=回收标本测得浓度-基础标本测得浓度（实际测得值）计算:加入浓度=标准液量病人样品量（ml）＋标准液量（ml）

×标准液浓度（理论真实值）回收率（%）=回收浓度加入浓度

×100％（理想值为１００％）注意事项：吸量准确；加入标准液后，其实验样品的被测浓度最好达到医学决定水平；总浓度必须在方法分析范围内；需加入高中低不同浓度回收试验，计算平均回收率；加入标准液的体积一般在10%内；重复2-3次。二乙酰一肟法操作步骤加入物(ml)空白管标准管测定管基础管回收管

血清－－0.02

0.018

0.018尿素标准－0.02

－－0.002(高)去离子水0.02

－－0.002

－二乙酰一肟0.50.5

0.5

0.5

0.5酸性试剂5.05.0

5.0

5.05.0

混匀，置沸水浴加热12min，取出置冷水中冷却5min，以空白管调零，在540nm处读取各管吸光度。回收浓度、加入浓度、回收率血清尿素1.78～7.14mmol/L。实验结果参考范围1．血液尿素浓度增高分生理性和病理性因素两方面。(1)生理因素：高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0.3～0.5mmol/L，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0.63mmol/L。(2)病理因素1)肾前性：最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。临床意义2)肾性：肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等影响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。3)肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液中尿素含量增高，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等。2．血尿素浓度降低除婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者外，常见于肝功能衰竭患者。1．试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，(每小时小于5%)。煮沸显色经冷却后，应及时比色。2．尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。3．尿素浓度以前习惯用尿素氮mg/dl表示，因为一个尿素分子中有2个氮原子，所以1mmol尿素相当于28mg尿素氮(1mmol/L尿素相当于2.8mg/dL尿素氮)；另外还有以尿素氮mmol/L表示，则1mmol/L尿素＝2mmol/L尿素氮。世界卫生组织推荐尿素用mmol/L表示，我国卫生部临检中心也已规定一律使用此表示方法，不再用尿素氮一词。注意事项1．本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。在标本数量多时加热开始难以达到100℃，各管间受热温度也可能不一致，因而本法重复性不佳。若改善加热条件，如采用在水浴锅底部加置高约5mm的网垫，在网垫上加热显色，可使CV由不加网垫时的6.46%降至2.99%。

2．线性上限仅达7.14mmol/L；回收率为96%～102.1%。评价3．二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含氮化合物。很多其它化合物在结构中会有尿素的残基，如瓜