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文档简介

2026届新高考生物冲刺复习动物细胞工程考点一动物细胞培养考点二动物细胞融合考点三动物细胞核移植技术→应用:单克隆抗体→应用:干细胞的培养及其应用→应用:克隆动物动物细胞培养·概念和原理【书本P43】011.概念:是指从动物体中取出相关的

,将它分散成

然后在适宜的培养条件下,让这些细胞

的技术。2.原理:

(分裂方式:

)。3.目的:获得

或者

,不能获得完整动物个体。组织单个细胞生长增殖有丝分裂细胞增殖细胞细胞产物动物细胞培养过程中有没有体现细胞的全能性?思考没有体现细胞的全能性。动物细胞工程的基础动物细胞培养·条件【P319】01合成培养基

:将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基。注:由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚,因此在使用

时,通常需要加入

等一些天然成分。合成培养基营

养细胞在体外培养时,

中应含有细胞所需要的各种营养物质。培养基动物细胞培养的培养基按物理性质分:

;液体培养基(培养液)血清动物细胞培养·条件【P319】01①无菌:需要对培养液和所有培养用具进行

处理

以及在

下进行操作;②无毒:定期更换

,以便

防止

对细胞自身造成危害。无菌、无毒的环境灭菌无菌环境清除代谢物细胞代谢物积累[扩展]可以添加一定量的抗生素,防止微生物污染。培养液动物细胞培养·条件【P319】01温度、pH和渗透压①温度:以

为宜;②pH:以

为宜;③渗透压:

;等渗溶液(36.5±0.5)℃7.2-7.4维持细胞正常形态和功能。动物细胞培养过程中要用等渗溶液的原因是?思考动物细胞培养·条件【P319】01①组成:动物细胞培养所需气体主要有

。②培养容器:通常采用

。③培养仪器:含有

的混合气体

。气体环境细胞代谢所必须维持培养液的pHO2CO2培养皿松盖培养瓶95%空气和5%CO2CO2培养箱动物细胞培养·概念梳理【书本P44】01体外培养动物细胞的类型:①

类:细胞能够悬浮在培养液中生长增殖;②

类:细胞需要贴附于某些基质表面(如培养瓶壁)才能生长增殖;接触抑制悬浮生长贴壁生长细胞贴壁注:大多数细胞属于贴壁生长类。①这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上,这种现象称为

。②当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞通常会停止分裂增殖,这种现象称为

。动物细胞培养·过程【书本P45】01解决取动物组织:

(分化程度低,增殖能力强)分散成单个细胞:成块组织中细胞与细胞靠在一起,彼此限制了

。细胞悬液

培养

培养

生长

生长细胞分裂受阻悬浮细胞贴壁细胞

法收集

处理

分瓶培养动物胚胎或幼龄动物的器官或组织机械法用胰蛋白酶/胶原蛋白酶处理,注:不能用胃蛋白酶。生长和增殖加培养液培养皿/培养瓶原代悬浮贴壁①细胞密度过大②有害代谢物积累③营养物质缺乏等接触抑制分瓶培养传代离心细胞悬浮胰蛋白酶动物细胞培养·过程【书本P44】01如何区分“原代培养”和“传代培养”?思考提示:区分关键是

。①用胰蛋白酶对动物组织进行处理,使其分散成单个细胞后的培养,为

培养;②细胞培养过程中出现接触抑制,用胰蛋白酶处理使其从瓶壁上脱离下来分散成单个细胞,然后再用离心法收集,之后,将收集的细胞制成细胞悬浸,分瓶培养,为

培养。原代传代看用胰蛋白酶处理的对象和是否分瓶→即分瓶前;→即分瓶后;考向

结合动物细胞培养,考查生命观念【P320】011.(2024·黑吉辽)从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养,在传代后的不同时间点检测细胞数目,结果如下图。下列叙述正确的是(

)A.传代培养时,培养皿需密封防止污染

B.选取①的细胞进行传代培养比②更合理C.直接用离心法收集细胞进行传代培养

D.细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关D传代培养时通常采用培养皿或松盖培养瓶,非密封,×;贴壁生长的细胞有接触抑制现象,此时需对细胞进行分瓶培养,选取②更合理,×;贴壁生长的细胞:先用胰蛋白酶等处理,再用离心法收集,×;贴壁生长的细胞,细胞分裂受阻的原因有4个,√;考向

结合动物细胞培养,考查生命观念【P320】012.某动物细胞培养过程中,细胞贴壁生长至接触抑制时,需分装培养,实验操作过程如图。下列叙述错误的是()A.①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离B.②加培养液的目的是促进细胞增殖C.③分装时需调整到合适的细胞密度D.整个过程需要在无菌、无毒条件下进行B贴壁生长细胞分瓶时,需要加消化液(胰蛋白酶)使细胞和瓶壁分离,√;加完培养液以后,要制备细胞悬液,目的是更方便地制造细胞悬液,×;③分装时要调整到合适的细胞密度,便于后续的细胞培养,√;动物细胞培养需要在无菌、无毒条件下进行,√;动物细胞培养·干细胞的培养及其应用【P320】011.概念:动物和人体内仍保留的少数具有分裂和分化能力的细胞。在一定条件下,干细胞可以分化成其他类型的细胞。2.来源:

等多种组织和器官中。3.类型(按来源分类):

干细胞和

干细胞。

早期胚胎骨髓脐带血胚胎成体动物细胞培养·①胚胎干细胞(简称ES细胞)【P320】011.存在:

中,2.作用:具有分化为成年动物体内的

的细胞,

并进一步形成机体的所有

甚至

的潜能。3.局限:胚胎干细胞必须从

中获取,

这涉及

问题,因而限制了它在医学上的应用。4.成果:目前科学家已经分离了兔、牛、猴和人等的ES细胞,

并证明了ES细胞可以在体外分化成心肌细胞、

神经元细胞和造血干细胞等细胞。早期胚胎任何一种类型组织器官个体胚胎电镜下的胚胎干细胞伦理动物细胞培养·②成体干细胞【P320】011.存在:

组织或器官内。2.分类:①骨髓中的

干细胞;

②神经系统中的

干细胞;

③睾丸中的

干细胞等。3.作用:具有

只能分化成

,不具有发育成完整个体的能力。4.成果:①

干细胞:治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的

造血系统、免疫系统功能障碍等疾病。

干细胞:治疗神经组织损失和神经系统退行性疾病。成体造血神经精原组织特异性T淋巴细胞造血干细胞巨噬细胞红细胞

B淋巴细胞血小板肥大粒细胞嗜中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞特定的细胞或组织造血神经动物细胞培养·③诱导多能干细胞【P320】011.概念:通过体外诱导

细胞等,

获得类似

的一种细胞,

被称为诱导多能干细胞(简称iPS细胞)。2.优点:(科学家普遍认为iPS细胞的应用前景优于干细胞)①诱导过程

破坏胚胎(填“需要”或“不需要”);②理论上可以避免

反应;(原因:iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞)3.问题:存在导致

发生的风险。成纤维现已发现,已分化的T细胞、B细胞等也能被诱导为iPS细胞。胚胎干细胞不需要免疫排斥肿瘤动物细胞培养·③诱导多能干细胞【P320】014.制备方法:①借助

导入细胞中;②直接将

导入细胞中;③用

等来诱导。5.应用:①治疗小鼠的镰状细胞贫血;②用iPS细胞治疗阿尔茨海默病、心血管疾病等领域的研究也取得了新进展。载体特定基因特定蛋白小分子化合物iPS细胞用于治疗人类疾病示意图考向

结合干细胞的培养及应用,考查生命观念【P320】013.(2023·海南卷,7)某团队通过多代细胞培养,将小鼠胚胎干细胞的Y染色体去除,获得XO胚胎干细胞,再经过一系列处理,使之转变为有功能的卵母细胞。下列有关叙述错误的是()A.营养供应充足时,传代培养的胚胎干细胞不会发生接触抑制B.获得XO胚胎干细胞的过程发生了染色体数目变异C.XO胚胎干细胞转变为有功能的卵母细胞的过程发生了细胞分化D.若某濒危哺乳动物仅存在雄性个体,可用该法获得有功能的卵母细胞用于繁育A传代培养的胚胎干细胞增殖到贴满瓶壁时会发生接触抑制,×;该过程少了一条Y染色体,发生了染色体数目变异,√;卵母细胞有特定的形态、结构和功能,即发生了细胞分化,√;去除胚胎干细胞的Y染色体等处理可获得有功能的卵母细胞,用于繁殖后代,√;考向

结合干细胞的培养及应用,考查生命观念【P320】014.我国科学家利用人的体细胞制备多能干细胞,再用小分子TH34成功诱导衍生成胰岛B细胞。下列相关叙述错误的是()A.基因选择性表达被诱导改变后,可使体细胞去分化成多能干细胞B.在小分子TH34诱导下,多能干细胞发生基因突变,获得胰岛素基因C.衍生的胰岛B细胞在葡萄糖的诱导下能表达胰岛素,才可用于移植治疗糖尿病D.若衍生的胰岛B细胞中凋亡基因能正常表达,细胞会发生程序性死亡体细胞(高度分化)→多能干细胞(分化程度低),即诱导去分化,√;胰岛素基因在人体所有细胞中都存在,没有发生基因突变,×;通过该操作以确保衍生的胰岛B细胞能够正常表达,才可用于移植治疗糖尿病,√;凋亡基因的正常表达会导致衍生的胰岛B细胞发生程序性死亡(即细胞凋亡),√;B动物细胞融合技术·概念和原理【P321】021.概念:使

动物细胞结合形成

的技术。2.诱导融合的方法:①物理法:

;②化学法:

;③生物法:

。3.原理:细胞膜具有

。4.结果:形成具有原来两个或多个细胞的遗传信息的

细胞,称为

。5.意义:突破

的局限,使

成为可能。两个多个一个细胞电融合法灭活病毒诱导法PEG融合法动物细胞融合特有流动性单核杂交细胞远缘杂交有性杂交①“灭活病毒诱导法”中“灭活”的具体含义是:用物理或化学手段使

,但

。②灭活病毒诱导细胞融合的原理是:病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的

发生作用,使细胞互相凝集,细胞膜上的

分子和

分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生

。【相关信息】灭活病毒诱导法【书本P48】02糖蛋白蛋白质脂质融合病毒或细菌失去感染能力并不破坏它们的抗原结构动物细胞融合技术·单克隆抗体【P321】021.原理:①B淋巴细胞的特点:每个B淋巴细胞只分泌

;②骨髓瘤细胞的特点:能在体外

。③杂交瘤细胞的特点:既能

,又能产生足够数量的

。一种特异性抗体大量增殖大量增殖特定抗体动物细胞融合技术·单克隆抗体【P321】02产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养体内培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞多种杂交细胞未融合细胞①②③④

动物细胞融合

第一次筛选

第二次筛选

动物细胞培养多种B淋巴细胞小鼠注射特定抗原诱导融合选择培养基进行筛选多种杂交瘤细胞获得单克隆抗体克隆化培养抗体检测(可进行多次)优点:

①灵敏度高;②特异性强;③可大量制备;动物细胞融合技术·单克隆抗体【P321】021.第一次筛选:目的:

。方法:用

进行筛选。

根据上述资料可知,应向培养基中加入

。【扩展资料】①细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基蝶呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径,但一般不分裂增殖。③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径,但能不断分裂增殖。

如果它的D途径被阻断的话,它会因不能合成DNA而死亡。筛选出杂交瘤细胞特定的选择培养基氨基蝶呤动物细胞融合技术·单克隆抗体【P321】022.第二次筛选:目的:

。方法:

。筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞克隆化培养和抗体检测抗原和抗体的特异性结合。【多孔细胞培养板】克隆化培养和抗体检测每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞,产生一种抗体[克隆化培养-扩大培养]用特定抗原进行抗体检测[抗体检测-阳性]筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞第二次筛选的原理是?思考动物细胞融合技术·单克隆抗体【P321】02应用①:作为

,用于疾病诊断和病原体鉴定。病毒蛋白的检测依赖抗体【资料1】利用同位素或荧光标记的单克隆抗体在特定组织中成像的技术,可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。【资料2】用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”。在妊娠第8天就可以做出诊断,这比原来的诊断方法提前了10d左右,可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%以上。诊断试剂动物细胞融合技术·单克隆抗体【P321】02【资料3】使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞。但细胞毒素没有特异性,在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害,这限制了它在临床上的应用。抗体-药物偶联物(ADC),将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合,实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。应用②:可以

。运载药物动物细胞融合技术·单克隆抗体【P321】02【思考1】抗体-药物偶联物(ADC)的抗体和药物各具有什么作用?【思考2】抗体-药物偶联物(ADC)在临床上有什么优势?提示:抗体主要发挥

作用,即通过

,将连接的药物输送到

。药物发挥

效应,如杀伤靶细胞。靶向运输特异性结合靶细胞表面的抗原靶细胞治疗提示:ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用,因此它在临床上具有

等优点。靶点清楚毒副作用小动物细胞融合技术·单克隆抗体【P321】02【资料4】单克隆抗体药物已被广泛用于肿瘤、自身免疫病等疾病的治疗,例1:利妥昔单抗被用于治疗复发难治的低分化B细胞淋巴瘤;例2:曲妥珠单抗被用于治疗乳腺癌等。应用③:自身也可用于

;治疗疾病考向

结合单克隆抗体的制备,考查科学思维【P321】021.(2024·福建卷)我国科研团队研制出全球首个以尿液中的抗原为靶标的戊肝诊断试剂盒,该成果属于单克隆抗体在临床上的应用。下列叙述错误的是(

)A.该试剂盒的研制过程应用了动物细胞融合技术B.该试剂盒的检测原理为抗原抗体的特异性结合C.该试剂盒检测前的采样不会对受检者造成创伤D.该试剂盒还可用于其他类型病毒性肝炎的检测单克隆抗体的制备过程需要应用动物细胞融合技术获得杂交瘤细胞,√;该试剂盒利用了单克隆抗体特异性强的优点,其能与特定抗原发生特异性结合,√;该试剂盒以尿液中的抗原为靶标,采样尿液不会对受检者造成创伤,√;单克隆抗体特异性强,所以不可用于其他类型病毒性肝炎的检测,×;D考向

结合单克隆抗体的制备,考查科学思维【P322】022.(2024·海南卷,7)海南龙血树具有药用和观赏价值,可利用植物组织培养技术产生愈伤组织,进而获得该种植株。动物细胞融合技术可将骨髓瘤细胞和产生特定抗体的B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞,进而制备单克隆抗体。下列有关这两种技术的叙述,正确的是()A.利用的原理均是细胞的全能性B.使用的培养基均需添加葡萄糖和血清C.培养时的温度和pH均相同D.产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力动物细胞融合的原理是细胞膜具有流动性,×;植物组织培养技术使用的培养基中添加的是蔗糖,不需添加葡萄糖和血清,×;由于植物细胞和动物细胞生长所需的适宜温度和pH存在差异,均不相同,×;产生的愈伤组织细胞或杂交瘤细胞均具有增殖能力,√;D考向

结合单克隆抗体的制备,考查科学思维【P323】021.(2024·江西卷,16改编)某病毒颗粒表面有一特征性的大分子结构蛋白S(含有多个不同的抗原决定基,每一个抗原决定基能够刺激机体产生一种抗体)。为了建立一种灵敏、高效检测S蛋白的方法,研究人员采用杂交瘤技术制备了抗-S单克隆抗体(如图)。下列说法错误的是()BA.利用胶原蛋白酶处理,可分散贴壁生长的骨髓瘤细胞B.制备的单克隆抗体A和单克隆抗体B是相同的单克隆抗体C.用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养,也可冻存D.单克隆抗体A和单克隆抗体B都能够特异性识别S蛋白酶解法(胰蛋白酶/胶原蛋白酶)分散细胞,√;由于蛋白S含有多个不同的抗原决定基(一种抗原刺激产生一种抗体),故不一定,×;杂交瘤细胞可无限增殖,故可传代培养,也可冻存,√;单克隆抗体A和单克隆抗体B都来自筛选出的杂交瘤细胞,都能够识别S蛋白,√;动物细胞核移植技术·概念和原理【P322】031.概念:将动物的一个细胞的

(供体),

移入

(受体),

使这个重新组合的细胞发育成

继而发育成

的技术。2.原理:

。3.类型:①

核移植:细胞分化程度

,表现全能性相对容易;

核移植:细胞分化程度

,表现全能性十分困难;细胞核去核的卵母细胞新胚胎动物个体动物细胞核的全能性胚胎细胞低体细胞高克隆动物动物细胞核移植技术·克隆动物【P322】03去核的卵母细胞体细胞的细胞核重组细胞早期胚胎将胚胎移植到受体母牛体内生出小牛从牛

采集卵母细胞,在体外培养到

期;从供体高产奶牛上取

,进行培养;将供体细胞注入去核的卵母细胞(

内)通过显微操作将卵母细胞去核卵巢通过

使两细胞融合,形成重构胚将胚胎移入

体内生出克隆牛MII体细胞透明带电融合法受体(代孕)母牛用物理或化学方法,激活重构胚;[补充]去核方法:梯度离心、紫外线短时间照射、化学物质处理等方法。[补充]激活重构胚方法:电刺激、Ca2+载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂。纺锤体-染色体复合物动物细胞核移植技术·克隆动物【P322】03【名师解读】1.采用MII期的去核卵母细胞作为受体细胞的原因:①

;②

;③

;2.克隆动物的性状与供体不完全相同的原因:①细胞核遗传物质来自

细胞质遗传物质来自

;②生物的性状不仅与遗传物质有关,还受

影响;③克隆动物在个体发育过程中有可能发生:

等可遗传变异。细胞体积大,便于操作营养物质丰富含有激发细胞核表达全能性的物质(主要)供体细胞供体细胞和去核卵母细胞环境突变【概念扩展】克隆【资料】克隆是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群,

即具有完全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体。【归纳】克隆包含分子、细胞、个体3个层次,即①分子克隆:

技术可进行DNA分子克隆。②细胞克隆:

技术可进行动物细胞克隆;

技术可进行植物细胞克隆。③个体克隆:

技术可进行动物个体克隆;

技术可进行植物个体克隆。动物细胞核移植植物组织培养PCR(体外复制DNA)动物细胞培养植物细胞培养动物细胞核移植技术·应用前景【P322】03①畜牧生产:加速家畜

进程、促进优良畜群繁育;②医药卫生领域:a.通过建立转基因体细胞系,再利用体细胞核移植技术培育的转基因克隆动物可作为

,生产医用蛋白。b.在治疗人类疾病时,转基因克隆动物的细胞、组织或器官可以用于

。③保护濒危物种:有望增加

的存活数量。遗传改良生物反应器异种移植濒危物种动物细胞核移植技术·存在问题【P322】03①体细胞核移植技术的

非常低。②相对于技术研究,

较为滞后。③绝大多数克隆动物存在健康问题,表现出

缺陷,如:体形过大、异常肥胖、发育困难、脏器缺陷和免疫失调等。成功率理论研究克隆胚胎移植成功率平均不到10%遗传生理1.(2021·辽宁卷)如图是利用体细胞核移植技术克隆优质奶牛的简易流程图,有关叙述正确的是()A.后代丁的遗传性状由甲和丙的遗传物质共同决定B.过程①需要提供95%空气和5%CO2的混合气体C.过程②常使用显微操作去核法对受精卵进行处理D.过程③将激活后的重组细胞培养至原肠胚后移植考向

结合单克隆抗体的制备,考查科学思维【P322】02后代丁的细胞核的遗传物质来自甲,细胞质的遗传物质来自甲和乙,×;动物细胞培养中需要提供95%空气和5%CO2的混合气体,√;过程②常使用显微操作去核法对MII的卵母细胞进行处理,×;过程③将激活后的重组细胞培养至囊胚或桑葚胚后移植,×;B1.(2023·天津卷)多种方法获得的早期胚胎,均需移植给受体才能获得后代。下图列举了几项技术成果。下列叙述正确的是()A.经胚胎移植产生的后代,其遗传特性与受体均保持一致B.①过程需获得MⅡ期的去核卵母细胞C.②能大幅改良动物性状D.③可通过②技术实现扩大化生产,①②可通过③技术实现性状改良考向

结合单克隆抗体的制备,考查科学思维【P323】02胚胎移植的受体只提供胚胎发育的场所,对移入胚胎的遗传特性无任何影响,×;①试管

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