2025年大学大四（生物技术）分子生物学实验技术测试题及答案

2025年大学大四（生物技术）分子生物学实验技术测试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题共40分）答题要求：每题只有一个正确答案，请将正确答案的序号填在括号内。(总共20题，每题2分，每题给出的选项中，只有一项符合题目要求)1.以下哪种技术常用于分离和纯化蛋白质？（）A.聚合酶链式反应B.凝胶过滤层析C.限制性内切酶酶切D.荧光定量PCR2.在DNA提取过程中，常用的蛋白酶K的作用是（）A.水解RNAB.水解蛋白质C.沉淀DNAD.促进DNA溶解3.用于检测DNA片段大小的技术是（）A.核酸分子杂交B.聚丙烯酰胺凝胶电泳C.蛋白质印迹法D.免疫荧光技术4.以下哪种酶可用于构建重组DNA分子？（）A.DNA连接酶B.碱性磷酸酶C.逆转录酶D.端粒酶5.基因克隆中，常用的载体不包括（）A.质粒B.噬菌体C.人工染色体D.核糖体6.蛋白质表达系统中，原核表达系统的优点不包括（）A.表达量高B.遗传背景清楚C.可进行翻译后修饰D.操作简单7.检测mRNA表达水平的常用方法是（）A.Northern杂交B.WesternblotC.ELISAD.免疫组化8.以下关于PCR技术的说法错误的是（）A.需要引物B.以DNA为模板C.反应体系中需要dNTPD.只能扩增特定长度的DNA片段9.用于蛋白质定量的方法是（）A.Bradford法B.双缩脲法C.考马斯亮蓝染色法D.以上都是10.基因敲除技术常用于研究（）A.基因功能B.基因表达调控C.蛋白质相互作用D.细胞信号转导11.以下哪种技术可用于检测蛋白质与DNA的相互作用？（）A.凝胶迁移实验B.酵母双杂交C.Co-IPD.GSTpull-down12.在分子生物学实验中，常用的缓冲液pH值一般为（）A.4-6B.6-8C.8-10D.10-1213.以下哪种方法可用于DNA测序？（）A.Sanger测序法B.454测序技术C.Illumina测序技术D.以上都是14.蛋白质印迹法中，用于检测蛋白质的显色剂是（）A.溴酚蓝B.考马斯亮蓝C.二抗与酶标记物结合后显色D.银染15.构建cDNA文库时，首先要提取（）A.基因组DNAB.mRNAC.tRNAD.rRNA16.以下关于RNA干扰技术的说法正确的是（）A.通过双链RNA介导基因沉默B.只能作用于mRNAC.具有特异性D.以上都是17.用于细胞转染的方法不包括（）A.脂质体转染B.电穿孔转染C.氯化钙法D.病毒介导转染18.检测细胞内蛋白质定位的技术是（）A.免疫荧光技术B.原位杂交C.流式细胞术D.蛋白质芯片技术19.在分子生物学实验中，常用的核酸染料是（）A.溴化乙锭B.SYBRGreenC.吖啶橙D.以上都是20.以下哪种技术可用于分析基因的甲基化状态？（）A.甲基化特异性PCRB.亚硫酸氢盐测序C.限制性内切酶酶切分析D.以上都是第II卷（非选择题共60分）（一）填空题（每题2分，共10分）1.分子生物学实验中常用的核酸提取方法有______和______。2.PCR反应的三个基本步骤是______、______和______。3.蛋白质的分离纯化方法主要有______、______、______等。4.基因表达载体通常包含______、______、______等元件。5.检测蛋白质相互作用的技术有______、______、______等。（二）简答题（每题10分，共20分）1.简述DNA提取的基本步骤及原理。2.请说明蛋白质印迹法的基本原理和操作流程。（三）实验设计题（20分）设计一个实验，从细胞中提取总RNA，并检测某一特定基因的mRNA表达水平。请详细说明实验步骤、所需试剂和仪器以及预期结果。（四）材料分析题（10分）材料：在研究某基因功能时，构建了该基因的过表达载体，并将其转染到细胞中。通过蛋白质印迹法检测转染后细胞中该基因编码蛋白的表达水平，结果发现转染组蛋白表达量明显高于未转染组。问题：请分析该实验结果，并说明蛋白质印迹法在该实验中的作用。（五）综合论述题（10分）请论述分子生物学实验技术在生物技术领域的应用及发展前景。答案：1.B2.B3.B4.A5.D6.C7.A8.D9.D10.A11.A12.B13.D14.C15.B16.D17.C18.A19.D20.D填空题答案：1.酚氯仿抽提法、试剂盒法2.变性、退火、延伸3.凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析4.启动子、多克隆位点、终止子5.酵母双杂交、Co-IP、GSTpull-down简答题答案：1.DNA提取基本步骤：首先破碎细胞释放DNA，然后去除蛋白质、RNA等杂质，最后沉淀DNA。原理：利用细胞裂解液破坏细胞膜，释放DNA；通过酚氯仿抽提去除蛋白质，用乙醇沉淀DNA。2.蛋白质印迹法原理：通过电泳分离蛋白质，然后将其转移到固相膜上，用特异性抗体检测目的蛋白。操作流程：样品制备、电泳、转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育、显色。实验设计题答案：实验步骤：细胞收集、裂解、提取总RNA、反转录成cDNA、PCR扩增目的基因、琼脂糖凝胶电泳检测。试剂：Trizol、反转录试剂盒、PCR试剂盒等。仪器：离心机、PCR仪、电泳仪等。预期结果：能检测到目的基因的扩增条带，且条带大小符合预期。材料分析题答案：实验结果表明过表达载体成功转染细胞并使目的蛋白表达量升高。蛋白质印迹法在该实验中用于准确检测转染前后细胞中目的蛋白的表达水平变化，直观反映基因过表达对蛋白表达的影响。