病原免疫学实验：细菌分离培养与生化鉴定

加户9祟实验报告

课程名称：一病原与免疫学实验_________指导老师：成绩：

实验名称：.细菌分离培养与生化鉴定-实验类型:_观察与操作—

一、实验目的

1、了解细菌生长条件，细菌在液体、固体斜面、半固体、平板的生长状态。

2、掌握细菌生化鉴定反应（培养基、原理、结果）。

3、熟悉掌握细菌的分离接种方法，分区划线法。

二、实验材料与方法

1、实验材料：普通琼脂平板2块，咽拭子、血平板，接种环，酒精灯，培养有相应细菌的各培养基

2、实验方法：参见教材第15-21页

三、实验结果

图1：细菌在液体培养基上的生长状态

左一是谷草芽抱杆菌，为专性需氧菌，一般呈表面生长，形成菌膜，但是由于拿试管时有震荡改变了

表面张力，菌膜便沉至试管底部，但依旧可见菌膜。

左二是乙型链球菌，试管底部有沉淀，细菌呈现沉淀生长

右一是大肠杆菌，均匀混浊生长

图2.细菌在半固体培养基上的生长状态

半固体培养基接种法一一穿刺接种法。在半固体培养基中，有鞭毛菌能运动，而无鞭毛菌则不能运动

A：大肠杆菌半固体培养基浑浊，细菌接种线消失，此培养基接种有菌毛菌即大肠杆菌具有鞭毛

B：痢疾杆菌半固体培养基仅有穿刺线变粗，周围培养基仍为原来透明度，此培养基接种无鞭毛菌即

痢疾杆菌无菌毛

图3平板分离划线接种法（白色葡萄球菌）

注意观察平板表面单个菌落生长情况（菌落呈白色，较大，圆形，较密）

图4糖发酵试验（指示剂：滨甲酚紫指示剂，变色pH范围5.2〜6.8,颜色由黄变紫）

A：培养基变黄说明产酸，里面小管中有气泡说明产气，所以大肠杆菌分解葡萄糖产酸产气。

B:培养基变黄说明产酸，里面小管中无气泡说明不产气，故伤寒沙门菌分解葡萄糖产酸不产气。

C：培养基不变黄且无气泡产生，故产碱杆菌不能分解葡萄糖。

图5时喙试验

右试管：液面表面形成了红色的玫瑰呵噪，为叫I噪试验阳性。说明大肠杆菌具有色氨酸酶，能分解蛋白陈

水中的色氨酸生成物色的呼I喙与哼I跺试剂形成红色的玫瑰叫味

左试管：培养基无任何明显变化，为写I躲试验阴性，说明肖式沙门菌中没有色氨酸酶。

图6硫化氢试验

左试管：培养基穿刺部位变黑，硫化氢试验为阳性，说明变形杆菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫

化氢，硫化氢遇铅盐或铁盐形成黑褐色的硫化铅或者硫化亚铁沉淀物

右试管：培养基不变色仅变浑浊，硫化氢试验为阴性。说明大肠杆菌无法分解培养基中的含硫氨基酸。

图7尿素分解试验（酚红指示剂，遇碱变红色）

右试管：培养基颜色变为红色，呈阳性，说明培养基呈碱性，则变形杆菌具有尿素分解酶，能分解尿素产

生大量的氨，使培养基呈碱性。

左试管：培养基不变色，为尿素分解试验阴性，说明志贺菌不具有尿素分解酶

图8空气中的细菌培养（将普通培养基放在实验桌上的玻璃器皿上方暴露在空气中】Om：n,适宜环境中

培养1天）

培养基中的菌落较小且数目较少，呈白色。说明实验室的空气中细菌较少，较干净。

图9手指皮肤的细菌检测（试验者：组员颜承曦）

A洗手前：菌落大小不一，数目多且较密集，呈白色。

B用蓝月亮洗手液洗手后：菌落数目明显减少，但是仍较多，菌落大小比A中大，呈白色。

实验结果说明使用蓝月亮洗手液洗手减少，但细菌仍有残留，可能原因：1、洗手时没有搓洗干净，没有

按洗手步骤搓洗手；2、洗手液的并不能完全除去手指表面细菌；3、洗完手后按培养基前不慎又触碰到表

面有菌的物品。

图10健康人咽喉部细菌的分离（分区划线分离法）

分离后大致可看出至少3种菌落：其一显示浅黄色菌落，菌落较大，圆形（黄色徜头所指）；其二为白色

菌落，菌落较大，圆形（白色箭头所指），其三为草绿色溶血环，较小，不是很明显（绿色箭头所指）背

景颜色加深，发生a溶血。

四、分析讨论

1、划线分离时，使接种环环面与平板表面约成30°,以腕力在平板表面行轻快的滑移动作，注意勿使

培养基表面划破。划线前须烧灼接种环以杀死环上剩余细菌，冷却后再划线2区，划毕，再通过

火焰