空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准

空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准

1、目的：

检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备

的微生物指标，生产区域环境之中病原微生物的监控，达到规定标准，以

控制食品成品的质量。

2、参照标准：

中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979

—1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气

微生物检验方法细菌总数测定》GB/T18204.1-2000.中华人民共和国进

出口商晶检验行业标准SN0169-92/SN0172-92/SN0170-92、出入境检

验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产

厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。

3、采样与检测方法：

3.1空气的采样与测试方法

3.1.1样品采集：

⑴取样频率：

a）车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫

生清扫消毒情况。

b）全厂统一放长假后，车间生产前"进行采样。

c）产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格

点，整改后再进行采样检验。

d）实验性新产品，按客户规定频率采样检验。

e）正常生产状态的采样，每周一次。

（2）采样方法

在动态下进行，室内面积不超过30m2,在对角线上设里、中、外三

点，里、外点位置距墙1m；室内面积超过30m2,设东、西、南、北、

中五点，周围4点距墙1m°采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板（直

径9cm）置采样点（约桌面高度），并避开空调、门窗等空气流通处，打开

平皿盖，使平板在空气中暴露5mine采样后必须尽快对样品进行相应指

标的检测，送检时间不得超过6h,若样品保存于0、4℃条件时，送检时

间不得超过24ho

3.1.2菌落培养：

（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24

h,取出检套有无污染，将污染培养基剔除。

（2）将已采集样品的培养基在6h内送实验室，细菌总数于37c±1'C培

养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。

（3）菌落计算:

a）记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或

者在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，不可遗漏。

b）若培养皿上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或者

2个以上菌落计数。

3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法：

3.2.1样品泯集：

⑴取样频率：

a）车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车

间卫生清扫消毒情况。

b）全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。

c）产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验

不合格点，整改后再进行擦拭检验。

d）实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。

e）对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。

f）正常生产状态的擦拭，每周一次。

（2）采样方法：

a）工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取

与食品直接接触或者有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内

涂抹

10次，然后剪去手接触部份棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的

采样管内送检。

b)工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指

尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部份棉棒，将棉签放入含10mL

灭菌生理盐水的采样管内送检。

(3)采样注意事项：

擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每一个擦拭点应详细记

录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间

3.2.2细菌•大肠菌群的检测培养：

样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。此液为1：10稀释液。如污

染严重，可十倍递增稀释，吸取1血1：10样液加9ml无菌生理盐水中，

混匀，此液为1：100稀释液。

3.2.2.1细菌总数：

(1)以无菌操作，选择广2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，

每一个稀释度做两个平皿(平行样)，将己融化冷至45℃摆布的平板计

数琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml,充分混合。

(2)待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48h后计数。

(3)结果报告：报告每25cm2食品接触面中或者每只手的菌落数

3.2.2.2大肠菌群：

(1)平板法：

a)以无菌操作，选择广2个稀释度各取1nli样液分别注入到无菌平皿内，

每一个稀释度做两个平皿(平行样)，将已融化冷至45℃摆布的去氧胆

酸盐琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml,充分混合。待琼脂凝固后，

再覆盖一层培养基，约3-5mlo

b)待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养24h后计数。

c)结果计算：以平板上浮现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得出。

d)结果报告：报告每25cm2食品接触面中或者每只手的菌落数

(2)试管法:

a)以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到BGLB肉汤培养

基中，每一个稀释度接种三管。

生物时，应该对环境中的相似点加大检测频率；在把所有的预定点检测完

后，应该对环境中的病原微生物的存在状况进行全面评估，在下一次环境

检测循环过程中加强检测容易浮现病原体的环境点，达到持续改进的目的。

检测频率:每月两次，每次每一个区域至少选取5个检测点，分别进行检测。

3.3.1环境李斯特菌的检测方法(3M&Petrifilm环境李斯特菌的测试

片)

3.3.1.1用涂抹棒，海绵或者其他采样设备采集环境样本。

3.3.1.2将采集的样本添加10亳升灭菌的缓冲蛋白陈水，将样木与缓冲蛋

白月东混合1分钟，将样品置于室温(20-30℃)1小时，最久不超过1.5小

时，以修复损伤的李斯特菌。

3.3.1.3将测试片放在平整处，掀起上层膜。

3.3.1.4用移液器垂直滴加3毫升样品到下层膜中央，将上层膜缓慢盖下，

以免产生气泡。

3.3.1.5轻轻将塑料压板放在位于接种区上层膜上，不要压，扭转或者滑

动压板。提起压板等至少十分钟，以使胶体凝固。

3.3.1.6将测试片透明面朝上，可叠放至十片，在37c±1℃培养26-30

小时，可以用标准菌落记数器或者其他光学放大器判读，不要记数圆

形轮廓上的菌落，因为他们不受选择性培养基的影响。

3.3.1.7对于定性检测，根据紫红色菌落是否存在，结果记为检出或者未

检出。

3.3.2环境中沙门氏菌的检测方法

3.3.2.1采样地点：选取采样点时因尽量选取微生物容易滋生的地方

冷冻车间FD车间

传递窗口表面、排水沟、墙壁、墙角、地面、天花板、

东区初加工卸料间

排水沟出口、墙壁、地面物料车表面

地面、墙壁、墙角、排水沟、

东区精加工暂存间墙壁、地面、天花板、墙角、墙缝

排水沟出口、速动机链条、天花板

西区初传递窗口表面、地面、墙壁、

挑选间墙壁、地面、天花板、墙角、垫板

加工排水沟、排水沟出口

地面、喑壁、墙角、排水沟、排水墙壁、地面、天花板、金探传送带表

西区精加工包装室

沟出口、速动机链条、天花板面、落地料存放处

3.3.2.2操作步骤

3.3.2.2.1采样应在生产开始后进行，用已浸润过的棉拭在选定的被测表面

旋转涂抹约100cm2的面积，然后将棉拭放回涂抹试管并盖紧。

3.3.2.2.2将样品带回实验室，每5个点混合成一个样品，登记编号，按照

SN0170-92标准及时检测，若有阳性结果浮现，应逐步对所混合的每

个点分别检测。

物体表面涂抹菌落总数计算方式：物体表面细菌总数(cfu/c肝)=平皿上菌落的平均数*采样

液稀释倍数/采样面积(cm2)

根桶GB15979-2002《一次性卫生用品卫生标准》的标准，生产环境卫生指标

1装配与包装车间空气中细菌菌落总数应W2500cfu/m3o

2工作台表面细菌菌落总数应W20cfu/cm2。

3.工人手表面细菌菌落总数应W300cfu/只手，并不得检出致病菌。

人员和环境卫生检测方法

一、空气采样及检验方法

1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制

2采样（空气沉降法）

2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取

一点：面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。

2.2采样高席：与地而垂由高官80-150厘米。

2.3采样方法：用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。

3培养：于37'C培养24小时。

4检测频率：每周

空气质量标准：

生车间、熟车间、成品车间：低于100个

半成品库、成品库：低于10个

二、设备的采样与检验方法

根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。

1采样方法

1.1涂抹法（合用于表面平整的设备和工器具产品接触面）

取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位匕用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭

铝片中间方框部份，擦完后立即将棉球投入盛有10型升无菌生理盐水的试管中，此液每型升代表5平方厘

米。

1.2贴纸法（合用于表面不平整的设备和工器具接处面）

将无菌规格纸（5X5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部份分别贴上两张，两张纸面

积共50平方厘米，然后取下放入盛有10亳升无菌生理盐水的试管中，此液每型升代表5平方厘米。

2检验方法

2.1细菌总数的检验

将.上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注

培养，培养基用普通营养琼脂，每一个稀释度作2个平皿，每一个平皿注入1型升样液，于37C培养24

小时后计菌落数。

结果计算

表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数X样液稀择倍数/30X2

2.2致病菌的检验

沙门氏菌，参照GB4789.4进行

金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行

4.检验合格标准:细菌总数10-100个/cm2,

5.关键点：细菌总数W10个/cm2

普通区域:细菌总数W100个/cm2

三、人员手表面细菌污染情况的检验

1.采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭了•涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦

的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部份剪去，将棉拭子放入装有10名升无菌生理盐水的试管

内送检培养。

2.检验方法：同工器具表面细菌总数检验方法。

3.结果计算：每只手表面的细菌总数(cfu/只手)=平皿上菌落的平均数X样液稀粒倍数

四、消毒液药效的微生物学鉴定法

1采样对象：正常使用的消毒液，和已知配制好备用的消毒液

2采样及检验方法

在无菌条件下，用无菌吸管吸取1毫升样液，加入9亳升稀释液中混匀，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液

用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂，需在肉汤口加入0.1%硫代硫酸钠，对洗必泰、季钱

盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%(W/V)士温80和0.3%卵磷脂;对醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘

我酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入(W/V)土温80,以中和被检样液中的残

效作用，

将注入了样液的稀杼液充分摇匀，取1毫升注入平皿，随之倒入普通营养琼脂，待琼脂凝固后，翻转平皿，

将平皿于37c条件下培养24小时后计平板上生长的菌落数。

3结果分析

平板上有菌生长，衣明被检样液中有残存活菌，若每•个平板菌落数在10个以下，仍可用于消毒，若