大肠菌群检测知识及MPN法检测的注意要点

大肠菌群检测知识及MPN法检测的注意要点

一、大肠菌群的定义：

1、指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、

产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆

菌。

2、该菌群主要来源于人畜粪便，作为粪便污染指

标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌

污染的可能。

3、大肠菌群不是细菌学上分类命名，而是一组

与粪便污染有关的细菌。这群细菌包括：大肠埃

希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠

杆菌。

4、生化特征及血清学反应并非完全一致。

5、典型大肠杆菌的IMVIC与硫化氢试验结果：

++-一

二、分布:

1、广泛分布于自然环境。

2、来源于人和温血动物的粪便。

三、卫生学意义：

1、大肠菌群作为粪便污染的指标菌评价样品中

是否受到粪便的污染。

2、大肠菌群计数的高低，直接反映了样品受粪

便污染的程度。

3、表示对人体健康是否具有潜在的危险性。

大肠菌群是理想的粪便污染的指标菌

4、是人类和温血动物肠道菌群，在数量上占优

势。

5、随粪便排出体外后，在外界环境影响下，其

存活时间应与肠道致病菌大致相似或稍长。

6、检验方法简便，易于检出与计数。

7、对消毒剂的抵抗力应不低于肠道致病菌。

四、大肠菌群在不同培养基上的形态：

1、大场菌群在LST培养基里阳性结果

2、大场菌群在BGLB培养基里阳性结果

3、大场菌群在结晶紫中性红胆盐琼脂VRBA上

的菌落特征

4、大场菌群在去氧胆酸钠盐琼脂上的菌落特征

5、大场菌群在伊红美蓝琼脂上的菌落特征

6、大场菌聚在显色培养基上的菌落特征

五、大肠菌群检验MPN法接种量剖析：

接种量问题，GB4789.3.2016中7.2初发酵试

验规定“选择3个适宜的连续稀释度的样品匀

液，每个稀释度接种3管LST肉汤，每管接种

1mL（如超过1mL,则用双料LST）这里所

说的接种量1mL并非1mL样品接种量（即

MPN检索表中的1mL样品接种量），而是接种

的稀释液的体积V=lmL（为了区分，本文中用

V表示），那么实际的接种量m（为了区分，本

文中用m来表示）为mxp（p为稀释液浓度）。

那么括号中的接种量超过1mL就是要V>

1mL,而MPN检索表中的实际接种量都为10-n

系列数，所以V也只可能是10mL（100mL在实

际中不可能），也就是说接种体积V=lmL,用

单料，V=10mL用双料。

例如：25g样品+225mL缓冲液一1：10稀释液

1：10稀释液+9mL缓冲液一1：100稀释液

若：1：10稀释液接种10mL至双料LST,接种

量为：10mLx0.lg/mL=lg

1：10稀释液接种1mL至单料LST,接种

量为：1mLxQ.1g/mL=0.1g

1：100稀释液接种1mL至单料LST,接

种量为：1mLxO.1g/mL=0.01g

培养基装量在GB4789.3-2016中没有作任何说

明，所以各人的理解更是不一，可能有的人单双

料都用10mL,有的人用9mL,有的更多或更

少。那么到底培养基装量有没有什么规则，是不

是怎样都行？

其实不是，GB/T5750.12—2006中总大肠菌群

检测方法中2.1.5.L1中使用的是单料双料都是

10mL,这实际上是为了使得接种稀释液后所有

的发酵管培养基浓度达到培养基本身的使用浓

度。双料10mL,再接种10mL稀释液后浓度降

低一倍就还原了培养基本身的使用浓度，而单料

它本身就是培养基的使用浓度，那么接种1mL

稀释液后为了使培养基的浓度不至降低太多，就

耍让培养基装量尽可能的多，但是试管的装量也

是有限度的，所以选择装量在10mL左右比较合

适。

五、大肠菌群检验MPN法注意事项及要点:

1、MPN法注意事项：

•全过程不得超过15mino

•样品匀液的pH值应在6.5-7.5之间，

•（如接种量需要超过1mL,则用双料LST肉

汤）

•以48h±2h为最终观察结果时限。结果也以此

时为最终结果。

2、MPN法培养基：LST、BGLB：

（1）月桂基磺酸盐胰蛋白豚（LST）

月桂基磺酸钠能抑制革兰氏阳性菌的生长，同

时比胆盐的选择性和稳定性好。由于胆盐与酸

产生沉淀，沉淀有时候会使对产气情况的观察

变得有些困难；

♦乳糖是大肠菌群可利用发醉的糖类。有利于

大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和

肠道致病菌；

•胰蛋白陈提供基本的营养成分；

•LST肉汤是国际上通用的培养基，与乳糖胆

盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越

性。

•发酵试验判定原则：产气为阳性。

•检测步骤减少（不必分离培养），检测时间

缩短24ho

■注：如接种量超过1mL,则应用双料LST肉

汤

（2）煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）

胆盐可抑制革兰氏阳性菌。

•煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌

的抑制作用。

・乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于

大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和

肠道致病菌。

•发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方

里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解。

・乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由

原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有

沉淀。

3、MPN检索表的应用：

MPN（最可能数mostprobablenumber）是表

示样品中活菌密度的估测。因此MPN值只是

活菌密度的估算值，并不是样品中活菌数的真

值。

4、使用MPN检索表的注意点：

•这个MPN检索表是ISO、FDA、AOAC>

USDA/FSIS、北欧等标准通用的。

•表里的数字是有小数点的。

•报告单位不同。现报告单位为g/ml,而原报

告单位是lOOg/mL

•原标准MPN表有64个组合，而现标准MPN

表只有40个组合。

当实验结果在MPN表中无法查找到MPN值

时，如