茯苓多糖的药理活性的研究

论文题目茯苓多糖的药理活性的研究标注示例，宋体，小六号：标注示例，宋体，小六号：目录摘要：健茯苓多糖的药理活性研究进展Ⅰ第一章绪论11.1课题研究背景11.2课题研究内容1第二章茯苓多糖及其化学修饰12.1茯苓和茯苓多糖12.2茯苓多糖的化学修饰22.2.1羧甲基茯苓多糖22.2.2硫酸酯化茯苓多糖22.2.3磺酰化茯苓多糖22.2.4乙酰化茯苓多糖32.2.5阿魏酸酯化茯苓多糖32.3茯苓多糖的生物修饰3第三章茯苓多糖抗肿瘤作用的研究进展33.1茯苓多糖的抗肿瘤作用33.2茯苓多糖化学修饰物的抗肿瘤作用43.2.1羧甲基茯苓多糖43.2.2硫酸酯化茯苓多糖43.2.3磺酰化茯苓多糖53.3小结5茯苓多糖其他药理活性的研究进展54.1增强免疫功能54.2抗衰老功能54.3抗炎、抗菌、抗病毒功能64.4保肝功能64.5其他功能7第五章思考与讨论7参考文献9致谢10

摘要综述了茯苓多糖及其化学修饰物抗肿瘤作用的研究进展。茯苓多糖经化学修饰后其分子量、分支度、水溶性、空间结构等都发生了改变，这些改变显著提高了其抗肿瘤活性。还综述了茯苓多糖的增强免疫功能、抗衰老功能、抗炎、抗菌、抗病毒功能、保肝功能等药理活性。通过研究近20年茯苓多糖药理活性的相关文献，认为采用免疫组织化学方法以及组织学方法深入研究茯苓多糖化学修饰物的抗肿瘤机制，详细分析茯苓多糖化学修饰物的分子组成和构效关系，探索茯苓多糖新的修饰方法，将是茯苓多糖及其修饰物抗肿瘤作用需要进一步研究的方向。另外，将化学修饰和生物修饰综合应用是茯苓多糖修饰方法和构效关系研究的新思路。关键词茯苓多糖药性理解第一章绪论1.1课题研究背景茯苓是我国的一种常用中草药，它是多孔菌科卧孔菌属真菌茯苓的干燥菌核，多依赖松树根生成。傍松根而生的为茯苓(又名：玉灵、茯灵、万灵桂)，始载于《本草经》[1]。茯苓一向被人们视为中药“四君八珍”之一，其食用历史可以追溯到两千多年前。中医研究表明，茯苓性甘、淡、平，入心、脾、肾经，具有合胃健脾、安神守心、利尿渗湿，加强机体免疫力等功能。茯苓年产量可达数万吨，其不仅是我国的传统中药，而且近年来的研究发现，茯苓多糖及其修饰物具有很高的生物活性，并在临床上已有应用。以中医基本理论为基础，结合植物多糖的化学修饰理论，研究茯苓多糖及其构效关系，揭示其药效机理，将提升传统中药茯苓的应用范围和价值。1.2课题研究内容本课题主要综述了茯苓多糖及其修饰物抗肿瘤作用的研究进展，综述的茯苓多糖修饰物有羧甲基茯苓多糖、硫酸酯化茯苓多糖、磺酰化茯苓多糖、乙酰化茯苓多糖、阿魏酸酯化茯苓多糖。另外本课题还对茯苓多糖其他药理活性的研究进展进行了综述。通过综述近年来茯苓多糖及其化学修饰物药理活性的研究进展，为其深层次的开发和利用提供理论支持。茯苓多糖及其化学修饰2.1茯苓和茯苓多糖茯苓作为药用保健品已有上千年的历史，一向被人们视为中药“四君八珍”之一。茯苓性甘、淡、平，入心、脾、肾经，具有合胃健脾、安神守心、利尿渗湿，加强机体抵抗力等功能。随着人们对茯苓化学成分、药理作用的研究，认为茯苓中发挥其有效作用的主要成分是茯苓多糖。茯苓中的主要成分就是茯苓多糖，茯苓多糖占整个茯苓菌核干重的84%。茯苓聚糖是一种β-（1→3）-D-葡聚糖，并含有少许β-（1→6）葡聚糖支链，在其主链上每50个葡萄糖单元中就分布着1个β-（1→6）联合的葡萄糖糖苷支链和1到2个β-（1→6）葡萄糖糖苷间隔[2]。茯苓聚糖去掉β-（1→6）葡聚糖支链后变形成茯苓多糖。2.2茯苓多糖的化学修饰虽然大量实验认为，β-D-（1→3，1→6）葡聚糖可以提高机体免疫力，但茯苓聚糖的β-（1→6）分支较少，生理活性偏低[3]。因此只有对茯苓多糖进行化学修饰，结合了其他功能基团，增强了其生理活性和水溶性，才能将它更好的利用。下面介绍一下目前对茯苓多糖进行化学修饰的主要方法。2.2.1羧甲基茯苓多糖羧甲基化是目前对茯苓多糖化学修饰的主要方法之一，将茯苓多糖羧甲基化修饰后可以改变多糖的结构，并提高了其负电性和水溶性，从而增强了茯苓多糖的药理活性。目前比较常用的羧甲基化方法，是将茯苓多糖均匀倒入在异丙酮中，再加入固体氢氧化钠搅匀，最后加入氯乙酸，发生非均相取代反应，反应后便生成羧甲基茯苓多糖。2.2.2硫酸酯化茯苓多糖硫酸酯化也是目前对茯苓多糖进行化学修饰的一个主要方法。硫酸酯化多糖是指多糖大分子链中单糖分子链上的某种羧基被硫酸根所取代而形成新的多糖衍生物。2.2.3磺酰化茯苓多糖多糖的磺酰化是将多糖的羧基上引入磺酰基，磺酰基的引入可以作为多糖上羧基的保护基团。多糖进行磺酰化时所用的磺酰化试剂主要有苯磺酰氯、甲基苯磺酰氯等。2.2.4乙酰化茯苓多糖多糖乙酰化主要是通过修饰多糖分子支链，使多糖分子支链得到伸展而发生结构变化，使得多糖羧基暴露、向外伸展，从而增加多糖在水中的溶解性。乙酰化的茯苓多糖带有乙酰基，提高了其水溶性，进而提高了其生物活性。2.2.5阿魏酸酯化茯苓多糖阿魏酸是植物界比较常见的一种酚酸，具有很强的抗氧化活性，它不仅能调节人体生理机能，而且可以抑制产生自由基的酶甚至消灭自由基，促进产生清除自由基的酶。茯苓多糖经过阿魏酸进行化学修饰后，其化学修饰物的药理活性将会有进一步的提高。2.2茯苓多糖的生物修饰细菌的生物修饰或其多糖的生物修饰主要在其发酵过程中实现，在其发酵时采用酶法引入特定的官能团，改变其原有的结构和性能，制备出新的多糖衍生物。在茯苓多糖的制备过程中，将细菌或真菌细胞内加入其他功能基团，使含有这些功能基团的特定分子作为碳源进入茯苓多糖的代谢途径，最后合成的茯苓多糖就含有了其他的特定官能团，这些新加入的功能基团改变了原来茯苓多糖的化学结构，从而形成了茯苓多糖生物修饰的衍生物。第三章茯苓多糖的抗肿瘤作用研究进展3.1茯苓多糖的抗肿瘤作用随着人们对茯苓化学成分、药理作用的研究，认为茯苓中发挥其主要治疗作用的成分是茯苓多糖。最初的研究表明，茯苓多糖具有明显抑制小鼠体内移植瘤生长和增强小鼠细胞免疫与体液免疫功能，进一步的研究发现茯苓多糖对小鼠肉瘤S180细胞、人白血病细胞体外增殖均有强烈抑制作用。综合大量文献总结得知，茯苓多糖的抗肿瘤作用主要是通过直接抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、增强机体固有免疫功能、增强机体获得性免疫功能等几方面发挥作用。3.2茯苓多糖化学修饰物的抗肿瘤作用研究进展近年来的研究发现，未经过化学处理的茯苓多糖对肿瘤的抑制率较低，且不溶于水，这限制了其临床应用途径。而经结构修饰后的茯苓多糖，如羧甲基茯苓多糖、磷酸化茯苓多糖、磺酰化茯苓多糖，其抗肿瘤活性明显提高。下面就几种化学修饰的茯苓多糖的抗肿瘤效果进行综述。3.2.1羧甲基茯苓多糖陈春霞等[4]采用液相不振荡半合成法制取了羧甲基茯苓多糖，并用其对小鼠肿瘤U-14、小鼠S-180肉瘤、小鼠肝癌H22、昆明种小鼠体内的艾氏腹水癌瘤细胞进行实验。结果表明，羧甲基茯苓多糖注射液对小鼠肿瘤U-14细胞生长的抵制率为75.5%～92.7%，对小鼠S-180肉瘤细胞生长的抵制率为34.8%～61.0%，对小鼠肝癌H22的细胞生长的抵制率为20.1%～36.7%，当羧甲基茯苓多糖的浓度为0.25%和0.50%时，昆明种小鼠体内的艾氏腹水癌瘤细胞死亡率分别为54.7%和61.7%。纪芳等[5]采用选择性氧化茯苓菌发酵液制备羧甲基茯苓多糖，并用其对荷瘤小鼠体内肿瘤进行实验。分组实验结果说明，羧甲基茯苓多糖可以提高荷瘤小鼠的NK细胞杀伤能力和淋巴细胞转化能力，表明其具有抗肿瘤功能，并且羧甲基茯苓多糖在最佳剂量时其抗肿瘤能力最高，低于或超过最佳剂量时其抗肿瘤能力会明显下降。3.2.2硫酸酯化茯苓多糖高贵珍等采取氯磺酸-吡啶法制备硫酸酯化茯苓多糖，用光谱法研究了硫酸酯化茯苓多糖与天青A（AA）的互相作用机理，对硫酸酯化茯苓多糖的分子结构进行了推测，其研究结果对硫酸酯化茯苓多糖抗肿瘤机制的研究提供支持。孟运莲[6]等从茯苓的菌核中提取茯苓多糖，再进行硫酸酯化反应，最终制得硫酸酯化茯苓多糖，并用其进行动物实验，实验认为硫酸酯化茯苓多糖的抗肿瘤效果是通过上调Fas的阳性表达实现的。黄才欢[7]等以肺腺癌795细胞为实验基础，用硫酸酯化茯苓多糖与顺铂对其联合处理，并用MTT法观测其对细胞成长的阻碍效果，实验发现0.5mg.ml-1的硫酸酯化茯苓多糖在体外对肺腺癌795细胞滋长有良好的阻碍作用，并对顺铂有一些增敏作用。3.2.3磺酰化茯苓多糖赵吉福[8]等采用碱提取酸沉淀法制备茯苓多糖，再用Smith降解法制备β（1-3）结合的葡萄糖（新茯苓多糖），最后将新茯苓多糖中的羧基磺化，进而制出磺酰化茯苓多糖。然后对小鼠的肉瘤180细胞进行实验，结果表明50mg.kg-1的磺酰化茯苓多糖有明显的抗肿瘤作用。3.3小结综上大量文献研究发现，茯苓多糖经化学修饰后其分子量、分支度、水溶性、空间结构等都发生了改变，这些改变显著提高了其抗肿瘤活性。深入研究茯苓多糖及其化学修饰物的抗肿瘤机理，将对肿瘤的临床治疗起到重要作用。第四章茯苓多糖其他药理活性的研究进展茯苓多糖除了具有显著的抗肿瘤作用外，还有很多其他药理活性。4.1增强免疫功能茯苓多糖不仅可以增强体液免疫，又可以增强细胞免疫，它还有抗脾脏变大、抗胸腺收缩和抑瘤滋长的功能。文献研究表明：羧甲基茯苓多糖可加强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，加快荷瘤小鼠脾T细胞生长因子的繁殖[9]，显著提高小鼠脾抗体所分泌的细胞数量，显著增加特异的与抗原融合的细胞数量，显著加强小鼠的迟发性超敏反应，这些可能是羧甲基茯苓多糖抗肿瘤作用的主要机制之一。茯苓中所含的茯苓素对PHA,LPS和ConA控制淋巴细胞转变都有抵制作用，当浓度最适当时其抵制作用最显著[10]。4.2抗衰老功能茯苓多糖不仅具有许多中药多糖都有的显著增强免疫与抗肿瘤作用，而且它的还具有抗衰老作用。衰老与自由基密切相关，而自由基的累积水平可以从体内的丙二醛含量反映出来，自由基的清除能力与单胺氧化酶和超氧化物歧化酶活性有关。机体的老化状况还可以从其耐寒和抗疲劳能力上看出。侯安继等[11]以正常昆明小鼠和老龄昆明小鼠为实验动物，实验结果发现茯苓多糖可以不同程度降低小鼠体内丙二醛含量，增加小鼠血清中超氧化物歧化酶活性，并它还可以延缓昆明小鼠在游泳时的死亡时间，这都表明茯苓多糖具有十分显著的抗衰老作用。另一方面的研究发现老年痴呆、老年血管性痴呆形成的主要原因之一，是胞浆内的钙稳态平衡被打破，比这更严重的是如果胞浆内钙离子超标，将致使细胞结构和性能损坏。谷氨酸排泄过量将使神经细胞构造发生变化，严重的将导致神经细胞坏死。实验结果认为，适当浓度的茯苓水提取液可以明显抑制谷氨酸对细胞內钙离子含量的影响。于凌等在实验中发现茯苓水提取液可以提高皮肤中羧脯氨酸的含量，进而达到的抗衰老作用。梁亦龙等通过对果蝇的实验，发现茯苓多糖可以抑制脂质过氧化，提高果蝇的抗氧化能力，增加果蝇寿命。4.3抗炎、抗菌、抗病毒功能侯安继等以茯苓多糖制剂为实验药物，分别实验其对无菌棉球所致大鼠肉芽肿的影响和对二甲苯所致小鼠耳肿胀急性炎症的影响，实验发现一定剂量的茯苓多糖可以明显抑制小鼠耳肿胀，并且对大鼠皮下肉芽肿的生成有抑制作用。从实验可以看出茯苓多糖有抗炎作用，其抗炎作用的形成可能是由于它增强了巨噬细胞的吞噬能力并且也增强了T细胞的活性。孙博光等以100%茯苓浸出液纸片为实验材料，用K-B纸片扩散法观察和测量其抑菌环直径，最后实验研究表明茯苓对许多细菌都有抑制作用。张信岳等采用细胞病变抑制实验法，观察发现一定浓度的羧甲基茯苓多糖(CMP)钠注射液在体外有抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的作用。4.4保肝功能肝硬变是较为常见的病症，临床还缺少有效的治疗药物，尹镭等的实验表明茯苓醇对四氯化碳、饮酒、高脂低蛋白等所致肝损伤有保护作用，可以显著减少谷丙转氨酶活性,阻止肝细胞坏死，这对肝硬变的治疗提供了新的途径。实验对形成肝硬化后的动物用茯苓醇治疗三周,经治疗肝硬化程度明显下降,并且其肝内的胶原蛋白含量也明显减少,这表明茯苓醇可以降低动物肝脏内的胶原蛋白含量,使肝内的纤维组织被重新利用。在逍遥散对肝细胞坏死治疗实验中发现，逍遥散各种成分中,茯苓、当归是抗肝细胞坏死的主要成分。并且只有茯苓具有使肝细胞消肿的功能,还能增加肝脏的重量,加快肝细胞生长速度,起到保肝降酶的效果。在对慢性迁延性肝炎和肝硬化的治疗中，羧甲基茯苓多糖的疗效较好,其中肝功能得到恢复的占百分之九十,对急性黄疸性肝炎的康复率在百分之三十以上,不仅能降低IgM及IgG的含量，还能提高血清补体IgA及C3的含量,4.5其他功能茯苓提取物具有抑制排斥反应的功效，在异位的心脏移植实验中，其对手术后的急性排斥反应有显著的减轻作用。茯苓可减轻卡那霉素导致的中毒性耳损伤。茯苓还可以降低酪氨酸酶的活性，抑制黑色素的滋生，起到增白效果。另外，茯苓还具有利水消肿、宁心安神、益脾和胃、防石消石等作用。4.6小结综上所述，茯苓多糖及其化学修饰物有着广阔的药理活性，并且还会有很多未知的药理活性被发现。进一步研究茯苓及其修饰物的药理活性，对新药的开发和茯苓的应用至关重要。第五章思考与讨论在茯苓多糖及其修饰物众多的生物活性中，其抗肿瘤作用研究的最多，并且也是植物多糖抗肿瘤作用的研究热点之一。目前肿瘤的治疗方法主要是放疗、化疗和手术，但在治疗过程中会损害机体的免疫功能，甚至损伤机体的某些重要器官，对机体造成不良反应。而茯苓多糖及其修饰物对机体的毒副作用较小，经过化学修饰及分子剪裁其抗肿瘤作用明显加强，并且有不少新药已投入临床应用。通过免疫组织化学方法以及组织学方法深入研究茯苓多糖化学修饰物的抗肿瘤机制，详细分析茯苓多糖化学修饰物的分子组成和构效关系，探索茯苓多糖新的修饰方法，将是茯苓多糖及其修饰物抗肿瘤作用需要进一步研究的方向。茯苓多糖除了抗肿瘤作用，还有许多其他药理活性。特别是经分子剪裁和修饰后的茯苓多糖其药理活性更加多样化。本课题主要研究了茯苓多糖的化学修饰物，但是其制备过程能耗大、反应条件剧烈并且成品有化学残留，这限制了其大规模的临床应用。而茯苓多糖生物修饰物的制备过程耗能小、反应条件温和且成品中没有化学残留，相对于茯苓多糖化学修饰物其生产条件控制容易，更适合进行大规模生产。因此，将化学修饰和生物修饰综合应用将是茯苓多糖修饰物的一个研究方向。我国的茯苓资源非常丰富，年产量可达数万吨，以传统中医学为基础，结合现代医学、化学、生物学、更好的开发利用茯苓中的有效成分，研制新药，将为茯苓多糖提供良好的研究价值和临床运用前景。本文只综述了近年来国内对茯苓多糖药理活性的研究，并未涉及国外的相关研究，存在一定的局限性。参考文献[1]中国药科大学.中药辞海[M].北京:中国医药科技出版社