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B40DB32TechnicalregulationsfordetectionofCaprineparainfluenzavirus3江苏省市场监督管理局发布本标准主要起草人：李文良、毛立、李基棕、郝飞、刘茂军、杨蕾蕾、1山羊副流感病毒3型检测技术规程本标准规定了山羊副流感病毒3型（Caprineparaifluenzavirus3本标准适用于山羊副流感病毒3型及其感染情况凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订单）GB/T6682分析实验室用水规格NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范采集羊的鼻拭子、气管拭子或肺脏（样品的采集、保存和运输应符合NY/T5μL待检样品液至无菌无RNA酶的EP管中，使用TRIzol试剂、RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等方RT-PCR反应使用20μL体系：10μL2×一步法RT-PCR反应缓冲液、引物MF/MR各0.5μL（10取PCR产物10μL，在1.2%琼脂糖凝胶中进行电泳，在凝胶成像系统中观察结果。样品PCR检测产物电泳后有大小为346bp的片段判断为山羊副流感病毒3型核酸阳性，无条带判断为阴性。每次试验应设置阴阳性对照，阴阳性对照应不出现或出现相应大小的23.4荧光定量反转录-聚合酶链式反应（荧光定量RT-PCR）录酶，0.4μLDNA聚合酶，引物qM），阳性对照扩增曲线呈标准的S曲线，且Ct值＜30。阴性4血清学检测——血凝抑制（HI）试验4.2仪器设备4.3病毒血凝效价测定——在反应板一排各孔中加25μL生——每孔加25μL1%豚鼠红细胞液，37℃孵育40min；未被凝集时，反应板倾斜片刻，可见沉淀的红细胞向下滑动，形成流线。HA效价为全部红细——每孔中加25μL4个HA单位的病毒抗原——每孔加25μL1%豚鼠红细胞液，37℃孵育40min。4.5结果判定抗体滴度大于等于16为阳性，小于等于8为阴性。若检测发病后双份血清（第一份血清应在临床症表A.1用于RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测4去离子水加至100mL，121℃高压灭菌15min，冷却后保存于2℃~8℃冰箱中备用。加入生理盐水洗涤3次，每次以20

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