化妆品安全性实验（鱼胚实验）实验方法

团体标准

标准编号：

化妆品安全性实验（鱼胚实验）实验方法

xxxx-xx-xx发布xxxx-xx-xx实施

XXXX发布

前言

本标准按照GB/T1.1-2020给出规则起草。

本标准提出和归口：

本标准起草单位：

本标准主要起草人：

化妆品安全性实验（鱼胚实验）实验方法

1.范围

本标准规定了化妆品安全性检测斑马鱼鱼胚实验的实验原理、实验准备、

实验方法、实验结果和实验报告。

本标准适用于评价液态水基类、膏霜乳液、凝胶类、可溶性粉剂化妆品原

料及其产品安全性毒理检测。

2.定义

hourspost-fertilization（hpf）：受精后小时数

3.规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅

注日期的版本适用于本文件，凡不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所

有的修改单）适用于本文件。

化妆品安全技术规范（2015版）

GB/T6678化工产品采样总则

GB/T6679固体化工产品采样通则

4.检测原理

受试样品配置成溶液孵育鱼胚至72h，于0、24、48和72h时在体式显微

镜下观察鱼胚的发育、畸形、死亡情况，统计鱼胚的孵化率、畸形率和死亡率

数据。

5.实验材料与试剂

5.1.材料

5.1.1.斑马鱼交配盒

5.1.2.鱼胚收集器

5.1.3.细胞培养板：6孔细胞培养板

5.2.试剂

5.2.1.二甲基亚砜

5.2.2.二甲基亚砜标准储备液（1%）：量取二甲基亚砜标准品1.0mL（精确至

0.1mL），用斑马鱼系统养殖水稀释并定容至100mL容量瓶，于28℃保

存。

5.3.对照品

5.3.1.3,4-二氯苯胺标准品，纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的

标准物

5.3.2.3,4-二氯苯胺标准储备溶液（4mg/mL）：称取3,4-二氯苯胺标准品100mg

（精确至0.01mg），用斑马鱼系统养殖水溶解并定容至25mL容量瓶，

于4℃保存。

6.实验仪器与设备

6.1.斑马鱼养殖系统

6.2.连续变倍体式显微镜（带拍照功能）

6.3.恒温培养箱

6.4.天平：精密度0.00001g

6.5.软件：SPSS统计分析软件

7.实验步骤

7.1.实验准备

7.1.1.鱼胚品系：野生型AB系斑马鱼自然交配的胚胎；

7.1.2.鱼胚要求：以斑马鱼开始交配受精为0hpf，选用2~3hpf健康、无畸形、

正常发育的鱼胚用于实验；

7.1.2.1.胚胎畸形表现形式为：脊柱弯曲，心胞水肿，尾部弯曲，血管堵塞等。

7.1.2.2.胚胎死亡表现形式：胚胎的凝固，体节形成缺失，尾未分化和心跳缺失

等。

7.1.3.鱼胚孵育温度：28±1℃；

7.2.样品处理

7.2.1.水溶性样品：使用斑马鱼系统养殖水将受试样品稀释成0.01、0.1、1、

10、100mg/mL实验浓度，混匀，放置4℃保存备用。

7.2.2.非水溶性样品：使用二甲基亚砜标准储备液（1%）将受试样品稀释成

0.01、0.1、1、10、100mg/mL实验浓度，混匀，放置4℃保存备用。

7.3.对照组溶液

7.3.1.空白对照组：斑马鱼系统养殖水

7.3.2.溶剂对照组：二甲基亚砜标准储备液（1%）

7.3.3.阳性对照组：3,4-二氯苯胺标准储备溶液（4mg/mL）

7.4.实验方法

随机挑选2~3hpf健康、无畸形、正常发育的鱼胚用于实验。使用6孔细

胞培养板为实验载体，每孔加入鱼胚20枚，实验溶液5mL。另设空白对照、

溶剂对照和阳性对照组，每个浓度设置3个平行组。

加入实验溶液后，置于恒温培养箱28℃孵育。于24、48和72h时，在体

式显微镜下观察，并记录鱼胚的孵化、畸形和死亡数量。

8.结果计算

8.1.统计并计算24、48和72h时鱼胚的孵化率、畸形率和死亡率。

孵化率%=孵化胚胎数/存活胚胎数*100

畸形率%=（死亡胚胎数+畸形胚胎数）/鱼胚总数*100

死亡率%=死亡胚胎数/鱼胚总数*100

其中：存活率%=100%-死亡率%

8.2.使用SPSS统计分析软件进行统计分析。

9.质量控制

9.1.基本原则：测试中设置的对照检测应符合以下情况，如出现非下述标准，

则视为质控不合格。

9.2.根据计算结果，空白对照组和溶剂对照组鱼胚存活率应≥90%，孵化率

≥80%，阳性对照组死亡率应＞30%，说明实验结果有效。

目次

前言........................................................3

化妆品安全性实验（鱼胚实验）实验方法.......................4

1.范围.....................................................4

2.定义.....................................................4

3.规范性引用文件...........................................4

4.检测原理.................................................4

5.实验材料与试剂...........................................4

5.1.材料.................................................4

5.2.试剂.................................................4

5.3.对照品...............................................5

6.实验仪器与设备...........................................5

7.实验步骤.................................................5

7.1.实验准备.............................................5

7.2.样品处理.............................................5

7.3.对照组溶液...........................................6

7.4.实验方法.............................................6

8.结果计算.................................................6

9.质量控制.................................................6

化妆品安全性实验（鱼胚实验）实验方法

1.范围

本标准规定了化妆品安全性检测斑马鱼鱼胚实验的实验原理、实验准备、

实验方法、实验结果和实验报告。

本标准适用于评价液态水基类、膏霜乳液、凝胶类、可溶性粉剂化妆品原

料及其产品安全性毒理检测。

2.定义

hourspost-fertilization（hpf）：受精后小时数

3.规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅

注日期的版本适用于本文件，凡不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所

有的修改单）适用于本文件。

化妆品安全技术规范（2015版）

GB/T6678化工产品采样总则

GB/T6679固体化工产品采样通则

4.检测原理

受试样品配置成溶液孵育鱼胚至72h，于0、24、48和72h时在体式显微

镜下观察鱼胚的发育、畸形、死亡情况，统计鱼胚的孵化率、畸形率和死亡率

数据。

5.实验材料与试剂

5.1.材料

5.1.1.斑马鱼交配盒

5.1.2.鱼胚收集器

5.1.3.细胞培养板：6孔细胞培养板

5.2.试剂

5.2.1.二甲基亚砜

5.2.2.二甲基亚砜标准储备液（1%）：量取二甲基亚砜标准品1.0mL（精确至

0.1mL），用斑马鱼系统养殖水稀释并定容至100mL容量瓶，于28℃保

存。

5.3.对照品

5.3.1.3,4-二氯苯胺标准品，纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的

标准物

5.3.2.3,4-二氯苯胺标准储备溶液（4mg/mL）：称取3,4-二氯苯胺标准品100mg

（精确至0.01mg），用斑马鱼系统养殖水溶解并定容至25mL容量瓶，

于4℃保存。

6.实验仪器与设备

6.1.斑马鱼养殖系统

6.2.连续变倍体式显微镜（带拍照功能）

6.3.恒温培养箱

6.4.天平：精密度0.00001g

6.5.软件：SPSS