《 芒小果普瘿蚊检疫鉴定规程》标准文本

ICS65.020.01

CCSB05

□B46

海南省地方标准

DBXX/TXXXX-XXXX

芒小果普癖蚊检疫鉴定规程

DetectionandIdentificationofProcontariniafructiculi

（征求意见稿）

在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

海南省市场监督管理局发布

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芒小果普瘴蚊检疫鉴定规程

1范围

本文件确立了植物检疫中芒小果普瘦蚊的检疫鉴定方法。

本文件适用于芒小果普瘦蚊的检疫鉴定.

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

SN/T2122-2015《进出境植物及植物产品检疫抽样方法》

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4基本信息

中文名：芒小果普瘦蚊

学名：ProcontariniafructiculiJiao,Wang,Bu&Kolesi

分类地位：隶属双翅目Diptera瘦蚊科Cecidomyiidae普瘦蚊属Procontarinia。

芒小果普瘦蚊的生物学特性参见附录A。

5方法原理

本标准以形态特征为主要判定依据。

芒小果普瘦蚊（卵或幼虫或蛹或成虫）经过提取总基因组总DNA后，利用线粒体细胞色素氧化酶亚

基I基因（C0I）片段的DNA提取、于增和测序，判定猿蚊标本的种类是否是芒小果普瘦蚊。

6器材用具和试剂

6.1器材用具

扩增仪，电泳仪，紫外分光光度计，凝胶成像系统，冰箱，低温冰箱，制冰机，水浴锅，离心机,

电子天平，微量加样器，体视显微镜：放大镜、小毛笔、镶子、剪刀、白瓷盘、解剖针、指形管、标签

等。

6.2试剂

本文件所使用试剂参见附录B.L

2

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7现场检查

对芒果植株或苗木进行现场检查时，重点检查幼果、花序和花畜是否有成虫产卵，或者幼虫孵化后

蛀食幼果形成的为害蛀孔，是否有活虫或死虫，是否有老熟幼虫出果的虫孔。对现场检疫发现的各种虫

态用镣子或毛笔收集，以指形管保存，加贴标签。现场检查抽样参照SN/T2122进行。

8室内检验检测

e.1镜检

将现场采集的可疑幼虫、蛹和成虫送到实验室，在体视显微镜下进行形态特征的鉴定。

8.2PCR法分子检测

对廛蚊类昆虫进行PCR检测，险测方法详见附录B.2。

9芒小果普接蚊鉴定特征

9.1普瘦蚊属的形态特征

头部：具后头峰，下颗须3节〜4节。雌雄触角均具12个鞭小节，第1和第2鞭小节融合。雄虫触

角鞭小节呈双结状，端结和基结形状大小接近，其上分别具一圈发达的大环状环丝，其颈部相对较长；

雌虫触角鞭小节除少数种类呈与柞虫相似的双结状外，大多呈单结状，结部具带状环丝，其颈部相对雄

虫较短。

胸部：翅透明。R脉在翅基部1/2靠前处与C脉汇合；R；脉较直且在翅端处或翅端稍靠前处与C脉

汇合：Cu脉分叉。跑节爪具基齿或不具齿。

雄虫生殖节：尾须通常宽大愈合且其端缘中央略微凹陷，少数种类明显分2瓣；肛下板端缘中央略

微凹陷，但不明显分滤：抱器基节通常具中基瓣，少数种类中基瓣不明显：阳茎显著突出，端部锥状或

较为平钝，其上着生一定数量且较小的无毛感觉孔。

雌虫生殖节；部分种类产卯器具有一定的伸缩性，另一部分种类产卵器不可伸缩；尾须整体愈合或

部分分离；肛下板宽圆但不分瓣。

9.2芒小果普接蚊的形态特征

芒小果普瘦蚊为害图及芒小果普度蚊雄成虫的特征图参见附录:。

9.2.1卵

长椭圆形,半透明,体长0.15mm〜0.25mm。

9.2.2幼虫

幼虫共4个龄期。黄色至橘黄包。长1.8mm〜2.2nun,宽0.5nrn〜0.6mm。触角锥形，长约为基部

宽的L6倍〜L8倍。胸叉具2个齿突，齿突基部隆起，2个齿突由一个U形浅凹分开：与胸叉相近的2组侧

瘤突有3个为1组和I个为1组，均无毛。末节端部圆钝，具8个瘤突，1对较大的瘤突角锥状，其余3对较

小，在中央的1对小瘤突有微毛。较大的瘤突中间部分颜色略深。

9.2.3蛹

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橘褐色。雄性体长1.0mm,雌性I.4mm〜1.5mm。触角基具微角突；头部的毛短而细。前胸气门不

明显，长而粗壮，向前部渐窄，端部略弯曲，气管伸达前端。

9.2.4成虫

雄虫。体色：头及胸棕褐色，腹部浅褐色。翅长1.1mm〜1.2mm,宽0.5mm〜0.6mm。头:头顶复

眼桥长6〜7个小眼直径。下颗须4节，向端部逐节渐长。单眼突微隆起。触角具12节，第1节与第2

节融合：梗节亚球形，略微比柄节长；鞭节为双亚节，每个亚节具一圈环毛；第3鞭节中部的无毛区约

为基亚节长度的0.6〜0.7倍，颈部长约为端亚节长的1.0〜1.1倍：基亚节的环毛伸至端亚节中部，端

叱节环毛伸达颈部末端。胸部:翅膜质，被稀毓细鳞片，R1脉和C脉在翅前缘的近中部融合：K5脉和C

脉交会于翅端部，Rs脉细缩呈R5脉上的一个隆起，Cu脉又状。各足密被细鳞和稀疏短毛；前跑节齿状:

爪间突与前附节近等长；爪垫几不可见。腹部:第1节至第6节背板矩形，表面散布鳞片，各节后缘具

单排长毛，侧缘及中部散布短毛，前缘具成对毛状感器：第7背板似第6背板，稍窄：第8背板似第7

背板，但明显窄小；第2节至第7节腹板矩形，具不规则长毛，侧缘及中部短毛较背板密，前缘具一对

紧邻的毛状感器；第7腹板稍窄于第6腹板；第8腹板明显较第7腹板短小。末节：生殖基节伸长：生

迫基节基突圆钝，强烈骨化，密生毛列；生殖突粗壮，向端部齿突逐渐细缩，基部三分之一密被微毛，

其余部分具稀疏短毛：尾突短宽，几近完全愈合，端缘中部微凹入，端缘具长毛；肛下板窄，略与尾突

等长，端部微凹入，端部具若干短毛；阳茎细长，明显长于生殖基节，向端部逐渐变细，末端背侧1/3

具无毛点状感器，腹侧1/4较稀疏地散布梢大的感器。

雌虫。翅长1.2mm〜1.8mm,宽().6mm〜0.7mm。头具单眼突，微隆起。触角鞭节柱状，第3节

中部略缢缩，颈部约为小节长的1/3：环毛紧贴表面，由2条水平方向和2条垂直方向的环带交联而成。

腹部。背板第1节至第7节，腹板第2节至第7节与雄性相近，但毛及鳞片略多：第8节背板及腹板未

骨化，后缘稀疏散布一排短毛。产卵器较伸长，伸出时约为腹部其他部分的0.55〜0.65倍：第9节腹

面密布短毛，背面无毛被；尾突从端部1/5处分开，密被短毛，背部具若干稀疏长毛，端部具若T•中等

长度的刚毛：肛下板约为尾突长的1/5,腹面观端部宽圆，后缘具一对毛。其他部分与雄性相近。

10结果判定

以成虫的形态特征为主要依据，蛹和幼虫的形态特征作参考，符合9.2描述的可鉴定为芒小果普瘦

蚊。

分子检测结果判定见附录B.2.4。

11标本保存

芒小果普燃蚊制作成三角纸片标本长期保存。

4

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附录A

（资料性）

芒小果普瘦蚊的生物学特性

A.1寄主

仅见报道为害芒果

R.2地理分布

菲律宾吕宋岛，广西百色

A.3为害特点

该虫主要在土表以蛹越冬。在12月中旬至翌年4月下旬，成虫羽化，在芒果初花至幼果形成初期，

成虫在嫩梢、花梗、花蕾和幼果上产卵，幼虫孵化后即蛀食幼果，造成落果。初期受害幼果在下部果皮

上的产卵点象炭疽病发生.初期症状，在放大镜下，受害幼果可见清喝的为害蛀孔，剖开米粒大小的幼果，

可见长2mm左右的浅黄色幼虫，有些幼果有多个蛀孔，多条幼虫。老熟幼虫掉入土中化蛹，蛹羽化成卜•

一代成虫，形成再次为害。在芒果初花期至幼果形成期内，该害虫可发生数代。

A.4传播途经

芒小果普度蚊成虫飞行能力较弱，不具备远距离扩散能力。主要以幼虫随寄主果实、蛹随寄主附着

的土壤，以及卵随寄主的花或子房进行远距离传播。

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附录B

(资料性)

芒小果普掇蚊的分子检测鉴定

E.1试剂

TE缓冲液pH8.0,Tris-盐酸，EDTA,氯化钠，蛋白酶K,氯仿/异戊醇(v：v=24：1),无水乙

惇，75%乙醇,Taq聚合酶,琼脂糖，DNA提取试剂盒、PCR反应试剂盒。

E.2检测方法

E.2.1样本前处理

用于分子生物学试验的麴蚊样本在提取DNA之前均要作前处理，卵、若虫、拟蛹、成虫或部分组织

等瘦蚊样本要用无菌水冲洗数遍，晾干：干标本、乙醇或福尔马林浸泡的标本先用缓冲液(TEpH8.0)

浸泡处理1h〜2h。

E.2.2瘗蚊基因组总核酸提取

E.2.2.1试剂盒法

将整蚊样本移入1.5mL离心管或碾钵中,捣碎或加入液氮碾磨,之后实验步骤根据DNA提取试剂盒的

操作说明书操作。瘦蚊基因组DNA溶液置于-20C冷冻保存。

E.2.2.2提取液法

将单头疼蚊置于滴有20P(50mmol/LTris-HCk1mmol/LEDTAs1%SDS>20mmol/L

MCI,pH8.0)的Parafilm膜上，以0.2mL的PCR管底部作为匀浆器充分研磨，50nL缓冲液清洗匀浆器4

次、合并混匀；然后以微量移液器移入L5mL离心管，加入5nL蛋白施K(20mg/mL),充分混匀后于

C0C水浴1h(中途混匀1次)：然后沸水浴5min,加入220uL氯仿/异戊醇(v：v=24：1)抽提液，轻

渠混匀数十次后，冰上放置十min,10000r/min离心10min,取上清液,加入440HL预冷的无水乙醒,

轻轻混匀，待出现少量絮状沉淀后于-20C放置30min,4℃12000r/min离心15min,小心弃去上清

淮。加入400uL预冷的75%乙醇洗涤，12000r/min离心15min,小心弃去上清液，然后将离心管倒

扣于洁净滤纸上，自然干燥20min每管加入30uL超纯水，充分溶解后于-20℃保存备用。

E.2.3PCR扩增

提取得到的基因组DNA作为模板于PCR仪上进行扩增。PCR体系为：DNA模板1u1,lOXExTaq

Buffer(Mg2,Plus)2.5n1,TaKaRaExTaq0.25u1(1.25U),dNTP0.5y1(100nmol•L'1),

引物正向：5'-GGATCACCTGATATAGCATTCCC-3'(COIS)和反向：5'-CCCGGTAAAATTAMATATAAACTTC-3f

各0.25u1(250pmol-L1),加ddH,0补足至25u1。反应条件为：94*C4min,进入循环：94C

30s,50eC45s,72c45s,共35个循环，最后延伸10min。取10u1〜15pl扩增产物进行1.

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就琼脂糖电泳。然后凝胶成像系统观察分析结果。

B.2.4结果判定

琼脂糖凝胶电泳结果待测样品与阳性对照扩增出一•条大小为4