第八章微生物的遗传变异和育种

第八章微生物的遗传变异和育种

遗传变异的物质基础

质粒结构及类型

8.3DNA的突变和诱变育种

4基因重组

微生物细胞融合育种

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8.1遗传变异的物质基础

8.L1遗传变异的物质基础

-格里菲斯经典的转化实验（遗传信息存在于

细胞的实验）

•利用两种类型的肺炎双球菌：

-s型，菌体包有多糖类荚膜，菌落光滑

（smooth）,有毒性，可以使人患肺炎或使

小鼠患败血症

-R型，不具荚膜，菌落粗糙（rough）,无

毒性，不致病

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8.1遗传变异的物质基础(补)

粗糙型(R)菌株光滑型⑸的株高温加热杀死的粗糙型(R)菌株和

格

(无毒性)(有毒性)光滑型⑸前株高温加热杀死的

光滑型(S)菌株混合

里

菲

斯

经

典

的

转

化

实

验

*1928年

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8.1遗传变异的物质基础（补）

埃弗里等人的转

化补充实验（遗

传信息存在于细

胞DNA的实

验），1935年

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组中的赫尔希-切斯在Little32Pinsupernata

做噬菌体实验时，出

乎意料地发现DNA是

Breakbacterialcellsaway32P-labeled

fromanyviralmaterialDNAin

remainingoutsidethemprogenyphi

Mostinsupernc

35$-|DNA淡-

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8.1遗传变异的物质基础（补）

破标记噬菌体磷标记

在1952年，噬菌体小组的蛋白的DNA

质衣壳

中的赫尔希-切斯在做噬

菌体实验时，出乎意料1、感染

地发现DNA是遗传物质

一3侵入

t3、离心

细胞中没章检测铝破细胞中检蟠磷

二、在最液中+

在悬液中没pg

,检测到磕有检幽磷一

赫尔希切斯试验

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8.1.2DNA的结构与复制

20世纪50年代初，X射线衍射分析表明

DNA由两条链组成，它们相互盘绕成厂

个双螺旋结构；

DNA结构的Watson-Crick模型，使得

DNA复制和信息编码的潜能明显起来'

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8.1.2DNA的结构与复制（续）

•Watson—Crick

模型是右手螺

旋，碱基的平面

对DNA分子的中

轴是垂直的

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(1)DNA的结构

一个DNA分子由两条多聚核甘酸链组

成，每条链包含4种核甘酸亚基。

链之间通过碱基基团之间的氢键作用链

接在一^起。

核甘酸由一个五碳糖结合一个或多个磷

酸基团以及一个含有氮原子的碱基组成。

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(1)DNA的结构(续)

脱氧核昔酸的种类

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(1)DNA的结构(续)

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(1)DNA的结构(续)

D燕

•DNA是一条多核甘酸链T、A、G、C分

别和另一条多核甘酸链的A、T；C、G

相配对，两条多核甘酸链是彼此互补并.

排列方向相反的，以右手旋转的方式围

绕同一根主轴而互相盘旋形成的，具有

一定空间距离的双螺旋结构O

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O

(1)DNAH

的结构C

(续):O

・

6

--

0.34iun

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(1)DNA的结构(续)

DNA具有特殊的空间结构(双螺旋结构)：

(1)DNA分子是由两条平行的脱氧核苗酸长链盘旋而成

的;

(2)DNA分子中的脱氧核糖和磷酸交替联结，排列在外

侧，构成了基本骨架；碱基在内侧；------导致了

DNA分子结构的不对称性，所以DNA分子是有极性的，

即两条链反向平行排列。

(3)内侧：两条链上的碱基通过氢键联结起来，形成碱基

对——维持双螺旋结构稳定

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(1)DNA的结构(续)

DNA的存在形式

-真核生物的DNA

•和组蛋白等组成丝状染色体

・染色体由核膜包裹成一个细胞核

•其负电荷被碱性蛋白质如组蛋白和鱼精蛋白中和

-原核微生物的DNA

•与很少量的蛋白质结合

•环状的染色体

•其负电荷被Mg2+和有机碱如精胺、亚精胺和腐］

胺中和

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(1)DNA的结构(续)

•基因(gene)―遗传因子

基因：是一切生物体内储存遗传信息的、有自我复制能力的遗

传功能单位。

是DNA分子上具有遗传信息的特定核苜酸序列的总称］按功能

分：

-结构基因：编码酶蛋白、血红蛋白、胶原蛋白或晶体蛋白等

蛋白质的基因都称为结构基因；

-操纵区：操纵结构基因的表达|

-调节基因:编码阻遏或激活结构基因转录为蛋白质的基因都

称为调节基因

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(2)DNA的复制

指以DNA分子的任何一条链作为产生新的互补

链的模板，使细胞在将其基因传递给后代前将

基因拷贝。

•DNA复制就是从原来的一个DNA双螺旋分子

产生两个同样的DNA双螺旋分子，每个新的

DNA螺旋在碱基序列上与亲代DNA双螺旋一

样。

DNA分子的这种复制方式被称为DNA的半保—

留复制。

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(2)DNA的复制(续)

厂

「

§厂§

(

舅

弱

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①DNA复制的起始

DNA最初被打开的位点称

为复制起始位点，通常是

一些特殊的核甘酸序列。

起始蛋白质（含解旋酶）撬

开双螺旋的一小段DNA双

链，使碱基间的氢键断

开，从而导致一小段DNA

双链分离以露出未配对的

碱基。

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②DNA复制的延伸

DNA分子上的《Y»形交叉点称

为复制叉.

在复制叉处，复制机构沿着

DNA链移动，打开双螺旋的两

条链并以它们为模板合成新的

子链.

在细菌中复制叉以大约1000个

碱基对每秒的速度移动。

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③DNA复制的终止

细菌DNA复制起始于起点，然后两个复制叉

沿环状染色体以相反方向移动，在终止区相

遇并终止复制；

终止区域含有多个位点，这些位点可结合专

一性的终止蛋白，引起复制叉制动。多个位

点组成一个复制叉陷阱，使复制叉进入终止

区域不能离开。

每个终止区域只对一个方向的复制叉有作用。

这样，复制叉陷阱阻止了每个复制叉在到达

其专一的终止位点后的过量复制o

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8.1.3DNA的变性、复性与杂交

•(1)、DNA的变性(denaturation)

•当天然双链DNA受热或其他因素的作用下，两条

链之间的结合力被破坏而分开成单链DNA,称为

双链DNA■DNADNA

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(1)DNA的变性

DNA双链变性后碱

基的充分暴露而增

加了其在紫外区的

光吸收，即溶液的

光密度值增加，这

个现象称为增色效

0607080n90100.

应。温度，匕

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(1)DNA的变性(续)

DNA的光密度值随

着温度变化的曲线,

叫DNA的熔解曲

线，表示光吸收值的

变化；

DNA的双螺旋结构

失去一半时的温度称7080n90

为该DNA的熔点或温度，匕

熔解温度，用Tm表

7Ko

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(1)DNA的变性(续)

在适宜的生理条件下，Tin值一般在80.85C之间;

Tin与DNA的碱基组成和变性环境有关：

-DNA的均一性越高，Tm的温度范围越小；

-GC含量越高，Tm值越高；

-离子强度较低的介质中，DNA的Tin较低，Tm

的范围也较窄，而在较高离子强度的介质中，

情况则相反.

-DNA制品应保存在较高浓度的溶液中，如常在

Imol/LNaCl中保存.

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(2)DNA的复性(renaturation)与

杂交(hybridization)

变性DNA在适当条件下，两条彼此分开的链又可重新结合成为双

螺旋结构，这个过程叫复性或退火(aimealing)。经过两个阶段

-首先在溶液中DNA的单链以随机发生相遇，如果它们的序列可

以互补，两条链就通过碱基配对形成一个短的双螺旋区域；

-然后这个碱基配对的区域延伸至整个分子，形成一个长的双螺

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(2)DNA的复性与杂交(续)

不同来源的两个互补核酸序列通过相互退火形成双螺旋

结构的反应称为杂交.

-一条链来源于DNA与一条链来源于RNA的互补核酸序列的杂

交，称为DNA-RNA杂交。

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(2)DNA的复性与杂交(续)

•影响DNA复性的因素：

-DNA分子序列越简单，复性越快；

-同一种DNA浓度高时,复性速度也快；

-DNA片段越小，复性速度越快；

-复性温度不能过低，一般比熔点低5。＜3左右是最佳温度；

-溶液的离子强度也影响复性速度。

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8.1.4转录(transcription)

在DNA的指导下合成RNA的过程称为转录。

•开始于局部DNA双螺旋的打开、解旋、碱基暴露。

DNA双螺旋的一条链作为RNA合成的模板，按照碱基互补配原

则决定RNA链上的核首酸序列。U-A配对；

新合成的RNA链不与模板DNA链以氢键结合，在核糖核酸掺入

的后部区域，DNA螺旋重新形成，从而取代了RNA链，转录形

成的RNA分子是单链的；

只有局部的DNA转录成为RNA,因而RNA链远远短于DNA链。

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8.1.4转录（续）

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8.1.4转录（续）

一个DNA分子可以同时结合许多RNA聚

合酶;

•在较短时间内，若干RNA聚合酶可同时

在一段DNA上转录，结果，大量的RNA

几乎同时产生。

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8.1.5翻译（translation）

翻译：根据遗传密码的中心法则，将成熟的信使RNA分子（由

DNA通过转录而生成）中碱基的排列顺序（核昔酸序列）解码，

并生成对应的特定氨基酸序列的过程。

•RNA

-mRNA：信使RNA,作为多聚核昔酸的一级结构，翻译氨基酸，具

传递遗传性的功能——模板

-tKNA：转移RNA,能识别氨基酸及识别mRNA上的密华子，在

tRNA-氨基酸合成的的作用下传递氨基酸一携带氨基酸

-rRNA：核蛋白体RNA,和蛋白质结合成的核糖体，为合成蛋白质

的场所—构成核雌

-反义RNA：起调节作用，决定mRAN翻译合成速度

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8.1.5翻译（续）

⑴mRNA是蛋白质合成的模板

遗传密码规则的内容

-mRNA分子内的核首酸序列以三个一组被连续阅读；RNA4

种核昔酸，三个一组有43种组合。

-RNA内每组三个连续的核苦

酸称为密码子，每种密码子

只能编码一种氨基酸。

-氨基酸由不只一种密码子所

决定。

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(1)mRNA是蛋白质合成的模板

氮基・宜购子表

UCAG

革丙氨SS丝露跳KflK半胱氨酸U

不丙氨眼丝氨盛脆雌半胱氨魅C

U

克氨酸丝氯雌终止号终止号A

克氨M丝算酸终止号色氨酸G

壳氨酷脑氨酸相礴U

分氨酸脑氨酸沮雌精冢酸C

C

交冢的脑冢联谷氯黛胺精氨联A

壳氨酸脑氨酸谷篓物胺G

界光氨眠天丝氯膝U

界充氨眼天I、连鬣氯线氯KC

A

异亮氨酸苏氨酸赖雎精氯做A

甲碗氯酸那K鞋赖雎精氤酸G

嫩氨酸丙氨酸天皿0甘氨霰U

嫌氨胺丙氨胺天「咚氨K甘氨般C

G

城冢联丙氨酸甘家豳A

领氨酸丙氨鼓谷瓮遂甘氨鼓G

每个氨基酸的密码子为从左、上、右方排列.例如第一个“量丙氨胺”蓄码子即为

UU.“丝氨酸”为UCU……“甘冢猿”为GGU、GGC、GGA、GGG・

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(2)tRNA转运活化的氨基酸至

mRNA模板上

tRNA分子识别并在其表面的不同位点上结合密码子和

氨基酸.

长约80个核昔酸，形成三维结构：

-像一片三叶草；

一“三叶草,,结构经历了进一步的折叠，形成一种紧凑

的L型结构，这种结构由分子不同区间的其他氢键

所维系。

位于tRNA的L型分子两端的未配对核苗酸序列W

-一端形成反密码子，由三个连续的核苗酸组成，它

们能与mRNA上的互补密码子配对；

-另一端是与密码子相匹配的氨基酸在tRNA上的结1

合部位°

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(2)tRNA转运活化的氨基酸至

mRNA模板上、(续)

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8.2质粒结构及类型

821质粒的分子结构

-均为双链环状DNA,也有少量的线形质粒°

-大小一般从Ikb至lOOOkb以上。

-常以游离状态稳定地处于细胞染色体外，但

在一定条件下又会可逆地整合到宿主染色体

上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞

分裂传递到后代。1

-在细胞中质粒是以一种致密的形式存在，从

细胞中分离出的大多数质粒为超螺旋构型。

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8.2.1质粒的分子结构

•若在一条链上有一个

断裂点（称为切口），

超螺旋则会变为开环

形式，如在两条链的

同一处断开，则形成

双链线形分子0

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8.2,2质粒的主要类型

(1)致育因子(致育质粒)，简称F因子，是最先发现的；一类通过

细胞间接触而引起自身DNA转移的接合性质粒，某些大肠杆菌具

有该因子。

(2)抗性质粒，能使宿主微生物对抗生素、化学药物或重金属离子

等杀菌剂表现出抗性。

•(3)产生细菌素的质粒

-细菌素(bacteriocin)是细菌产生的一种能够抑制或杀死密切相

关种类或者同一种的不同菌株的特殊多肽类代谢产物。

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822质粒的主要类型(续)

•(4)产生细菌毒素的质粒

•⑸降解性质粒

•(6)Ti质粒

-引起植物形成肿瘤——冠缨瘤的质粒称为诱

导肿瘤的质粒(tumorinducingplasmid),简称

Ti质粒。

(7)共生固氮质粒

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8.3DNA的突变和诱变育种

8.3.1DNA的突变(mutation)

-微生物的DNA被某种因素引起碱基的缺失、置换

或插入，改变了基因内部原有的碱基排列顺序,

从而引起其后代表现型的

改变。当后代表现出和亲

代显然不同，能遗传的性

状时，就发生了突变.

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8.3.1DNA的突变（mutation）

(1)碱基置换：指DNA中核苗酸的一个碱基被另一个碱

基所取代。

-转换：即一个喋吟被另一个喋吟所取代等;

-颠换，即一个噤吟被另一个喀哧等;

■三联体密码子发生突变蛋白随正常异常

导致蛋白质中原来的氨基I

谷氨酸增氨酸

酸被另一种氨基酸取代，

称为错义突变；RNAGAAGA

■当氨基酸密码子变为终

CTT突变CT

止密码子时，称为无义突DNA

GAAGTA

变，它使的翻译提

U1RNA镰刀型细胞贫血做因的图解

前终止，而常使产物失活。

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8.3.1DNA的突变（续）

⑵移码突变

-在DNA分子的编码区插入或缺失一个或多个非三整

数倍的核苗酸对，而使编码区位点后的三联体密码

子阅读框架发生改变，从而导致后面的核苗酸都发

生错误，通常该基因产物会完全失活，如出现终止

密码子则使翻译提前终止。

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8.3.2诱变与育种

832.1诱变剂及其作用

(1)碱基类似物

一某些化学物质的结构类似于正常的含氮碱基，在

DNA合成过程中有时会替代正常碱基而掺入DNA分

子中，但其不同于正常碱基的配对能力，从而导致

DNA复制过程中其对应位置上插入不正确的碱基。

-5.漠尿喀咤是胸腺喀碇的类似物，它具有酮式和烯

醇式互变异构现象，大多以酮式存在，与腺喋吟配

对；有时以烯醇式存在，与鸟喋吟配对。胸腺嗑咤

也有酮式和烯醇式互变异构现象，但其烯醇式发生

率很低。1

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8.3.2诱变与育种(续)

(2)碱基的修饰剂

-通过对DNA碱基的修饰作用而改变其配对性质，这

类化学物质称碱基的修饰剂；

-烷化剂，包括氮芥、硫芥、乙基甲烷磺酸(EMS)、

乙基乙烷磺酸(EES)和亚硝基胭等。9

-使DNA的碱基发生烷化作用。■

-如EMS能使鸟瞟吟N位置上带有乙基，成为7•乙基

鸟喋吟。这种喋吟不能与胞喀咤配对，却与胸腺喳

咤配对，因此能使GC对转换成AT对。

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832诱变与育种（续）

，（3）嵌入染料，能引起移码突变，常用的有口丫

咤橙、原黄素和口丫咤黄素等口丫咤衍生物；

，（4）紫外线和电离辐射

-紫外线能引起DNA断裂、DNA分子双链的交联、胞

喀陡和尿喀咤的水合作用以及嗑陡二聚体的形成等。

-电离辐射（如X射线、丫射线等）

•直接作用能引起DNA双螺旋氢键的断裂、DNA单链的断裂、

DNA双链之间的交联、不同DNA之间的交联等；W

•间接作用是逋过水在电离时所形成的自由基及其产生的连

锁反应造成诱变。1

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8.3.2.2诱变与筛选

（1）诱变过程

-出发菌株

•①纯种以排除异核体或异质体的影响；

•②选产量高的，及其他性状，如生长快，营养要

求低，可利用廉价原料等；1

•③对诱变剂敏感的菌株，不但可以提高变异频

率，而且高产突变株的出现率也大;

•④已经诱变过的菌株。

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(1)诱变过程

•诱变剂的选择

-选择诱变剂时，应考虑诱变剂本身的特点，

例如紫外线主要作用于DNA分子的喀咤碱

基，而亚硝酸主要作用于DNA分子的噂吟碱

基0

-诱变率随诱变剂量的增加而提高，但达到一

定程度后，再提高剂量，反而会使诱变率下

降；

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(1)诱变过程(续)

•诱变处理方法

-单一诱变剂处理

-复合处理：是指用两种以上的诱变方法处理菌种©

一般说来，复合处理要比单一处理效果好。复合处

理包括：

■①利用同一诱变剂多次重复处理；

■②利用两种或多种诱变剂先后分别处理；

③利用两种或多种诱变剂同时处理或多次进行处理。

■④诱变效果的影响因素

-出发菌株的遗传特性

-诱变剂

-菌种的生理状态

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(2)筛选过程

港初步筛选

-抗生素产生菌的育种，采用随机筛选的初筛

方法：即将诱变处理后形成的各单细胞菌株

不加选择地随机进行发酵并测定其产量，从

中选出产量最高者进一步复筛。

•复筛

♦检验1

-高产突变株还需要进行菌株性能和生产性能

的检验

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8・3.2.3定向培育和驯化

利用某一特定环境条件长期处理某一微

生物群体，同时不断将它们进行移种传

代，以达到累积和选择合适的自发突变

体的目的，这种方法被称为定向培育。

•比诱变育种和杂交育种慢得多。

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8.4基因重组

基因重组或基因克隆又称为DNA分子克隆，是根据遗

传工程原理利用限制性内切酶在体外对DNA进行的人

工操作，即应用酶学方法，在体外将不同来源的DNA

分子通过酶切、连接等操作重新组装成杂合分子，并

使之在适当的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代

DNA分子的过程。I

•克隆（clone）：（名词）是指从同一个祖先通过无性繁

殖的方式产生的后代，或具有相同遗传性状的DNA分

子、细胞或个体所组成的特殊的生命群体；（动词时）

是指从同一个祖先生产这类同一DNA分子群或细胞群

的过程。1

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8.4基因重组（续）

•一个完整的基因克隆过程包括以下步骤:

-①带有目的基因的DNA片段的获得

-②目的基因与载体在体外连接；

-③重组DNA分子导入宿主细胞；

.④阳性重组子的筛选、鉴定：IW

-⑤重组子的扩增与/或表达。

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84基因重组（续）

DNA

跟耦性柚热内切”・限制性科.内切融■解

我体

0H

.住股能■虻理

0H

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8.4.1基因工程工具酶

（1）限制性核酸内切酶

-是识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸

酶，简称限制酶。

-已发现的400种限制酶，可分为3类;

-作用特点如下：

■禽识别位点的DNA序列呈二重旋转对称（即具有回文结

②切割DNA均产生含5、磷酸和3”羟基的末端；■

*③错位切割产生具有5、.或3、•突出的黏性末端，而沿对称轴

切割双链DNA产生平头末端，也称钝性末端；W

④少数不同的限制酶可识别和切割相同的位点，这些酶称

为同切酶，如Mbol和Sau3A。

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8.4.1基因工程工具酶(续)

(2)DNA连接酶

-是一种能够催化DNA中相邻的3'-羟基和5、-

磷酸基团末端之间形成磷酸二酯键并把两段

DNA拼接起来的酶。

•(3)DNA聚合酶

(4)逆转录酶

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842基因工程载体

8.421概述

-载体(vector)是携带外源DNA进入宿主细胞进行扩增

和表达的DNA,它们一般是通过改造质粒、噬菌体

或病毒等构建的。…••二

-载体必须具备下列基本要求和特征：■

•①是一个复制单位，能在适当的宿主细胞中复制；M

.②具有多种限制酶的单一切点以便外源DNA插入；■

•③载体分子较小，以便体外基因操作，同时载体DNA与宿

主DNA便于分离；W

.④具有筛选标志以区别阳性与阴性重组分子；

•⑤对于表达型载体还应具有与宿主细胞相适应的启动子、〕

增强子、加尾信号等基因表达元件。

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8421、概述

•宿主细胞

-是分子克隆中重组DNA分子复制、扩增和（或）表达

的场所。<

•适当的宿主细胞，必须符合以下条件：1

-应对载体的复制和扩增没有严格的限制；

-不会对增殖过程中的重组DNA分子进行修饰；

-不应存在能降解特异外源重组DNA的内切酶体系;

-重组缺陷型，不会产生体内重组;

-容易导入重组DNA分子。

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84.2,2质粒载体

•作为载体的质粒一般具有以下特点：

-相对分子质量较小(1〜200kb)；

-具有适当的多克隆位点以便外源DNA插入；

-松弛型复制；

-质粒能携带的外源DNA片段一般较小

15kb)；

-具有插入失活筛选标志，便于从平板上直接

筛选阳性重组子。

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84.2.3其他载体

(1)入噬菌体载体

—人噬菌体基因组约为48.5kb,是一种双链

DNA噬菌体0、

-线性X噬菌体DNA分子的两端各有12碱基的

互补单链序列，是天然的黏性末端，称为…

COS位点。

-目前已成功构建两类X噬菌体载体：

•①置换型载体

•②插入型载体

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84.2.3其他载体(续)

(2)M13丝状噬菌体载体

-M13是一种闭环的单链DNA分子，基因组大小约

6.4kb,在感染细菌后呈双链复制型DNA

e(3)黏菌粒载体

-指由单链噬菌体载体和质粒载体结合而成的载体，

系由一个COS片段与质粒重组而成，在宿主细胞中

可作为正常噬菌体进行复制，但不表达任何噬菌体

的功能1

(4)酵母人工染色体载体(YAC)

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8.4.3目的基因的获得

（1）通过构建基因文库筛选靶基因

-基因组文库是指将基因组DNA通过限制性内切酶部

分酶解后所产生的基因组DNA片段随机地同相应的

载体重组、克隆，所产生的克隆群体代表了基因组

DNA的所有序列。

.用人噬菌体载体构建基因组文库的基本步骤：]

-①基因组DNA的片段化，分离为20kb的基因组DNA片段;

-②载体DNA的制备；

-③体外连接载体与外源DNA,连接产物体外包装及感染;

-④重组噬菌体感染大肠杆菌；

-⑤基因组文库的鉴定和扩增。

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8.4.3目的基因的获得（续）

•cDNA文库

-cDNA是指以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下形成的互补

DNAo

-以细胞的全部mRNA逆转录合成的cDNA组成的重组克隆群体

称为cDNA文库。«

•从cDNA文库中可以获得较完整的连续编码序列（不含内含子）,

便于蛋白质的表达。!

-构建cDNA文库的主要步骤：■

•制备mRNA；W

•合成cDNA；1

•制备载体DNA；1

■双链cDNA的分子克隆；,

•aDNA文库的鉴定和扩增。

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8.4.3目的基因的获得(续)

-基因文库的筛选的鉴定方法：

•①用标记的DNA探针进行DNA杂交;

•②用抗体对蛋白质进行免疫杂交；

•③对蛋白质的活性进行鉴定,

•(2)聚合酶链式反应法扩增基因片段\

(3)DNA的化学合成法

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8.4.4DNA分子的体外连接

(1)黏性末端连接

(2)平端连接

(3)人工接头连接

(4)用适配子连接

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84.5重组DNA导入宿主菌

⑴转化

-再肾细菌质粒为载体，将外源基因导入受体细胞的

(2)高压电穿孔法

彝雕于蕊鹦儡‘入黜:场肱冲在

-II勺万法。

•(3)转染和感染

-利用噬赢DNA作为载体导入受体菌

.感染：即在体外将噬菌体DNA包装成病毒颗粒，然后使其

感染受体菌。I

.转染：在DNA连接酶作用下使噬菌体DNA环化，再像重组

质粒一样地转化进受体菌。

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8.4.6重组体的筛选

重组体的筛选是从转化的细菌菌落中筛选出含

阳性重组子的菌落，并鉴定重组子的正确性。

-(1)6•半乳糖昔酶系统筛选

-(2)菌落快速裂解鉴定法

-(3)内切酶图谱鉴定

-⑷通过聚合酶链式反应筛选重组子

-(5)菌落或噬菌斑原位杂交

-⑹抗药性标志的筛选

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8.5微生物细胞融合育种

8.5.1细胞融合(cellfusion)

-⑴细胞融合概念及基本原理

•细胞融合是指将遗传性状不同的两个或多个原生

质体（除去细胞壁的细胞）相融合，并使之分化再

生、形成同

时带有双亲

性状的、遗

传稳定的新

物种或新品

种的技术。

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8.5.1细胞融合

(2)细胞融合发展历史

-1858年Virchow描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的

多核细胞现象。一

-1875年Lange第一个观察到蛙类的血液细胞发生合并的过程。

-1962年日本的冈田善雄发现一种被称为日本血凝性病毒(HVJ)

的微生物能引起艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞。

-1965年英国海利斯等发现，当HVJ被吸附在两个细胞表面后，

相互接触而引起细胞膜之间出现所谓细胞质问桥的结构，随

着时间的推移，细胞质间桥的数量和