色谱柱的维护方法 色谱柱维护和修理保养

色谱柱的维护方法色谱柱维护和修理保养

色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率

有关系外，zui紧要的是与日常的维护紧密相关。色谱柱的使用寿

命紧要是柱效和柱压两个指标来衡量，假如一支色谱柱柱效太低或

柱压大高，通常被认为该色谱柱已经结束。因此，延长色谱柱使用

寿命的关键是，除去引起柱效下降和柱压上升的因素。以下是色谱

柱的维护方法：

一、流动相的PH应在使用的范围内

流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使

柱效下降，使用寿命变短。由于流动相的PH掌控不当而对色谱柱

造成的损害，通常很难是色谱柱恢复，因此必需认真对待，严格掌

控流动相的PH值。

二、去除样品和流动相中的固体颗粒

样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵

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住不仅会引起柱压的上升，而且也会引起柱效下降，由于筛板的堵

塞会引起液流不均，导致色谱峰型拖尾、变宽，从而使柱效下降。

因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析样品前对样品进行针

筒过滤，流动相过0.45m滤膜。

三、使用保护柱或在线过滤器

样品和流动相经过滤后并不能完全除去固体颗粒物质，由于泵的磨

损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被

流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压上升、柱效下降。保护柱

和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱孔径相同，因此可以阻

拦固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱

压上升在分析故障中占很大比例，因此，除对样品和流动相进行过

滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。

假如色谱柱柱压上升是由于进样端筛板被堵引起的，可选择以下方

式进行补救：

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L先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇、水

=20/80ml/min反向冲色谱柱180min.

2.先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器，然后反向使用。

四、正确使用缓冲盐

缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使

其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱

压上升；同时阻拦了基质上键合的碳链自由伸展，使色谱柱的保留

本领下降，柱效降低。缓冲盐析出后，去除特别困难，因此，正确

的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命特别紧要。

正确使用缓冲盐妁目的是防止缓冲盐析出，因此正确使用缓冲盐

的方法可归结为一句话：使用前要过滤，使用后要冲洗。实在方法

如下：

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1.等度条件：使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以l.Oml/min

流速冲洗60min；使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相

以0.2ml/min流速冲洗色谱柱过夜。

2.梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑糅度之前，用与初始流动相

构成相同的过渡流动相以1.Oml/min流速冲洗60min,再用该过渡

流动相以1.Oml/min冲洗色谱柱120mino含缓冲盐流动相的梯度设

定应尽量平缓，以避开梯度过程中缓冲盐析出。

注意：过渡流动相是指有机相和水相的构成与分析流动相相同，区

分只是过渡流动相不含缓冲盐。

3.缓冲盐析出的补救方法:

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方案1：用甲醇/20/80以l.Oml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗

色谱柱120min

方案2：用甲醇/水二20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。

五、防止强保留物质在色谱柱上存留

强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产

生额外的保留行为，不仅引起峰型变宽、拖尾，使柱效下降，同时

也会引起保留时间的变化，累积到确定程度时还会导致柱压上升。

由于强保留物质和大分子化合物对色谱分别的影响是一个累积效应,

需要确定的时间才会体现出来，但对很多药品特别是多而杂样品而

言，很难判定其是否是含有强保留物质，因此要防止强保留物质的

累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙氨清洗色谱柱。

清洗方法:

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1.未使用缓冲盐：每天分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然

后再用甲醇或乙氟反向冲洗色谱柱60mine

2.使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后在

用纯甲醇或乙氟反向冲洗色谱柱60min。

3.补救方法:

水----乙氟----1v仿（或异丙醇）----乙氨----水

每一步以1.Oml/min流速反向冲洗色谱柱60min

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来源：科捷分析仪器

色谱柱的老化步骤

色谱柱老化的目的：是彻底除去填充物中的残留溶剂和某些挥发性

的物质；另一方面是促进固定液均匀坚固地分布在担体的表面上。

而且新的气相色谱柱必需老化。

装填好的色谱柱，连接于仪器上后，应先试压，试漏，而后在恒定

的温度下用载气吹洗数小时后承受分析，一般称此为柱子的老化过

程。老化的目的是把固定相的残存溶剂，低沸点杂质，低分子量固

定液等赶走，使记录器基线平直，并在老化温度下使固定液在担体

表面有一个再分布过程，从而涂得更加均匀坚固。装填好的色谱柱,

经过老化一段时间后，柱效及性能均稳定了，这样才可使用。

老化步骤:

1、打开氮气、氢气、空气发生器的电源开关，输出压力稳定在

0.4Mpa左右。

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2、打开色谱仪气体净化器的氮气开关，当色谱仪载气B的柱前压上

升并稳定大约5分钟后，打开色谱仪的电源开关。

3、设置各工作部温度，柱箱初始温度50℃,)进样器和检测器都

是250g

4、待检测器温度升到io(rc以上后，打尹净化器上的氢气、空气开

关，色谱仪的氢气稳定在0.IMpa,空气压力为0.15Mpa左右，察看

基线在氢火焰点着后的电压值应高于点火之前。

5、显示屏左下方应有蓝字显示当前的电压值和时间，待基线稳定后

进样