茶叶及其制品和代用茶中14种农药及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱联用法

茶叶及其制品和代用茶中14种农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法标准号：T/CTMAXXXX-2026英文名称：Determinationof14PesticidesandTheirMetabolitesResiduesinTea,TeaProductsandHerbalTeabyLiquidChromatography-MassSpectrometry1范围本文件规定了茶叶及其制品、代用茶中14种农药及其代谢物残留量的液相色谱-质谱联用测定方法，包括原理、试剂与材料、仪器设备、样品处理、仪器分析、结果计算与表示、方法学验证、质量控制及注意事项。本文件适用于绿茶、红茶、乌龙茶、白茶、黄茶、黑茶、花茶、紧压茶等茶叶及其制品，以及菊花、金银花、枸杞、决明子等代用茶中14种农药及其代谢物残留量的定性鉴别与定量测定（14种农药及其代谢物清单见附录A）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则GB2763-2021食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB23200.121-2021食品安全国家标准植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法GB/T8302-2013茶取样GB/T8303-2013茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定NY/T761-2021蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定3术语和定义3.1茶叶及其制品以茶树鲜叶为原料，经杀青、揉捻、干燥等工艺加工制成的产品，及以其为原料再加工制成的花茶、紧压茶、袋泡茶等制品。3.2代用茶以植物的叶、花、果实、根茎等为原料，经加工、拼配制成的供饮用的产品，不含茶树鲜叶原料。3.3基质匹配标准曲线以空白样品提取液为基质，加入不同浓度的标准工作液配制而成的标准曲线，用于校正样品基质对检测结果的影响，提高定量准确性。3.4定量限在本文件规定的实验条件下，样品中农药残留量能够被准确定量测定的最低浓度，其测定结果应符合方法学验证要求（回收率、相对标准偏差达标）。4原理样品经乙腈提取，结合分散固相萃取（dSPE）或固相萃取（SPE）净化，去除色素、多酚、蛋白质等基质干扰物。采用液相色谱进行分离，三重四级杆质谱检测器进行定性与定量分析。通过保留时间和特征离子对（母离子、子离子）进行定性鉴别，外标法或基质匹配外标法进行定量计算，得出样品中14种农药及其代谢物的残留量。对于二硫代氨基甲酸酯类等易转化的农药，通过甲酯化衍生处理，将其转化为稳定衍生物后再进行色谱-质谱分析，确保检测准确性。5试剂与材料5.1试剂5.1.1有机溶剂：乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、正己烷（色谱纯）、甲酸（色谱纯）、乙酸铵（分析纯）、无水硫酸镁（分析纯，650℃烘烤4h，冷却后密封保存）。5.1.2衍生试剂：碘化甲烷（分析纯）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，分析纯）、氢氧化钠（分析纯）。5.1.3净化吸附剂：N-丙基乙二胺（PSA）、石墨化碳黑（GCB）、C18吸附剂，均为色谱级。5.1.4标准物质：14种农药及其代谢物标准品（纯度≥98%），购自有资质的标准物质供应商，储存于-20℃冰箱中，避光保存。5.1.5标准储备液：准确称取适量标准品，用甲醇溶解并定容，配制浓度为1000μg/mL的标准储备液，-20℃避光保存，有效期6个月。5.1.6标准中间液：取适量标准储备液，用甲醇稀释至10μg/mL的标准中间液，4℃避光保存，有效期1个月。5.1.7标准工作液：根据检测需求，用空白样品提取液配制系列浓度的标准工作液（0.01μg/mL~1.0μg/mL），现配现用。5.1.8实验用水：符合GB/T6682-2008规定的一级水。5.2材料5.2.1固相萃取柱：氨基柱（NH2，500mg/6mL）、石墨化碳黑柱（GCB，500mg/6mL），根据农药类型选择使用。5.2.2离心管：50mL、10mL聚四氟乙烯离心管，耐有机溶剂。5.2.3滤膜：0.22μm有机相滤膜，用于过滤净化后的样品液。5.2.4样品瓶：2mL螺纹样品瓶，带密封垫。6仪器设备6.2.1液相色谱-质谱联用仪：配备三重四级杆质谱检测器，具备电喷雾离子源（ESI），可实现正离子/负离子模式切换。6.2.2高速冷冻离心机：转速≥10000r/min，温度可调控（0℃~4℃）。6.2.3超声波提取仪：功率≥200W，频率40kHz，可调控温度。6.2.4氮吹仪：配备水浴加热装置，氮气纯度≥99.99%。6.2.5分析天平：感量0.1mg和0.01g。6.2.6样品研磨机：可将样品磨碎至过40目筛，无交叉污染。6.2.7移液器：100μL~1000μL、1mL~5mL、5mL~10mL，精度符合要求。6.2.8恒温水浴锅：温度波动±1℃。6.2.9涡旋振荡器：转速可调，用于样品混匀。7样品处理7.1样品采集与储存按照GB/T8302-2013的规定进行样品采集，每份样品不少于500g，密封于洁净容器中，标注样品名称、来源、采集日期等信息。新鲜代用茶（如鲜菊花）4℃冷藏运输，所有样品-20℃冷冻储存，储存期不超过7天，避免反复冻融。7.2样品制备按照GB/T8303-2013的规定，将样品去除杂质，用样品研磨机磨碎，过40目筛，充分混匀后装入洁净容器中，置于干燥器中保存，用于干物质含量测定及后续检测。7.3提取7.3.1常规提取：准确称取2.0g（精确至0.01g）制备好的样品，置于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋振荡1min，超声提取20min（温度控制在30℃以下），加入4g无水硫酸镁，涡旋振荡1min，10000r/min离心5min，取上清液备用。7.3.2衍生化提取（适用于二硫代氨基甲酸酯类）：准确称取2.0g样品，置于50mL离心管中，加入5mL0.1mol/LEDTA-氢氧化钠溶液，涡旋混匀，加入1mL碘化甲烷，恒温水浴30℃反应30min，期间每隔10min涡旋混匀1次。反应结束后加入10mL乙腈，后续操作同7.3.1。7.4净化7.4.1分散固相萃取净化：取4mL上清液置于10mL离心管中，加入50mgPSA、20mgGCB、100mg无水硫酸镁，涡旋振荡1min，8000r/min离心3min，取上清液经0.22μm有机相滤膜过滤，收集至2mL样品瓶中，供液相色谱-质谱联用仪分析。7.4.2固相萃取净化（适用于复杂基质样品）：将上清液过氨基固相萃取柱，先用5mL乙腈预淋洗柱子，再加入样品液，用10mL乙腈洗脱，收集洗脱液于氮吹管中，40℃氮吹至近干，用甲醇定容至1mL，涡旋混匀，经0.22μm有机相滤膜过滤，供仪器分析。8仪器分析8.1液相色谱条件8.1.1色谱柱：C18色谱柱（2.1mm×150mm，1.7μm），或性能相当的色谱柱。8.1.2柱温：40℃。8.1.3流动相：A相为0.1%甲酸水溶液（含5mmol/L乙酸铵），B相为甲醇。8.1.4梯度洗脱程序：0~2min，90%A；2~8min，90%A→5%A；8~12min，5%A；12~12.1min，5%A→90%A；12.1~15min，90%A平衡柱子。8.1.5流速：0.3mL/min。8.1.6进样量：5μL。8.2质谱条件8.2.1离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子模式（ESI+）；部分农药采用负离子模式（ESI-），具体模式见附录A。8.2.2离子源温度：150℃。8.2.3脱溶剂气：氮气，流速800L/h，温度350℃。8.2.4监测模式：多反应监测模式（MRM），每种农药选择1个母离子和2个子离子（定量离子、定性离子），优化碰撞能量、锥孔电压等参数，具体参数见附录A。8.3定性分析样品中目标物的保留时间与标准工作液中对应目标物的保留时间相对偏差应≤2.5%；且样品中目标物的定量离子与定性离子的峰面积比，与标准工作液中对应比值的相对偏差应≤15%，满足以上条件可判定样品中存在该目标物。8.4定量分析采用基质匹配标准曲线定量，以标准工作液浓度为横坐标，对应定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程（R²≥0.995）。根据样品液中目标物的峰面积，代入回归方程计算样品中目标物的含量。9结果计算与表示9.1结果计算样品中农药及其代谢物残留量按下列公式计算：X=(C×V×f)/m式中：X——样品中目标物的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C——由标准曲线得到的样品液中目标物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——样品定容体积，单位为毫升（mL）；f——样品稀释倍数；m——样品取样质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字，当残留量低于0.01mg/kg时，保留一位有效数字。9.2结果表示当检测结果低于定量限时，以“<定量限（LOQ）”表示；当检测结果高于定量限且低于最大残留限量时，直接报告测定值；当检测结果高于最大残留限量时，需重复检测确认，报告确认后的测定值，并注明超出GB2763-2021规定限量。10方法学验证10.1线性关系在0.01μg/mL~1.0μg/mL浓度范围内，目标物的基质匹配标准曲线回归方程相关系数R²应≥0.995，线性关系良好。10.2回收率与精密度在空白样品中添加低、中、高三个浓度水平（分别为定量限、2倍定量限、10倍定量限）的标准工作液，进行加标回收试验，每个浓度水平平行测定6次。10.2.1回收率：14种农药及其代谢物的加标回收率应在70%~120%范围内。10.2.2精密度：相对标准偏差（RSD）应≤15%。10.3定量限与检出限10.3.1定量限（LOQ）：本方法中14种农药及其代谢物的定量限应≤0.01mg/kg。10.3.2检出限（LOD）：以信噪比（S/N）=3计算，检出限应≤0.003mg/kg。10.4基质效应通过对比溶剂标准曲线与基质匹配标准曲线的斜率，计算基质效应（ME）。ME=（基质匹配曲线斜率/溶剂标准曲线斜率-1）×100%，当ME绝对值≤20%时，基质效应可忽略；当ME绝对值>20%时，必须采用基质匹配标准曲线校正。11质量控制11.1.1每批样品检测时，应同时做空白试验（不加样品，按相同前处理及检测流程操作），空白试验中不得检出目标物。11.1.2每20个样品插入1个质量控制样品（加标空白样品，加标浓度为中浓度水平），质量控制样品的回收率应在70%~120%范围内，否则该批次样品需重新检测。11.1.3仪器运行期间，每间隔1h注入1针中间浓度标准工作液，峰面积相对偏差应≤10%，确保仪器稳定性。11.1.4实验所用器皿需经酸液浸泡、水洗、烘干后使用，避免交叉污染；试剂应符合纯度要求，定期进行质量验证。12注意事项12.1实验中使用的乙腈、甲醇等有机溶剂具有挥发性和毒性，应在通风橱中操作，佩戴防护手套、口罩等防护用品。12.2碘化甲烷具有毒性和腐蚀性，使用时需严格遵守操作规程，剩余试剂密封保存，废液单独收集处理。12.3样品处理过程中应避免强光照射，防止光敏性农药分解，影响检测结果。12.4质谱仪需定期校准，离子源、色谱柱应定期维护清洗，确保仪器性能稳定；实验数据及时备份，保存期限不少于6个月。12.5不同类型茶叶及代用茶基质差异较大，可根据实际情况调整提取时间、净化吸附剂用量等参数，确保净化效果和回收率。13附录（资料性）附录A14种农药及其代谢物清单及质谱参数列出14种农药及其代谢物的中文名称、英文名称、CAS号、离子化模式、母离子、定量子离子、定性子离子、碰撞能量、锥孔电压、保留时间等参数。附录B方法学验证典型数据提供14种农药及其代谢物在不同基质（绿茶、红茶、菊花代用茶）中的线性关系、回收