2025年生物理化分析专业考试试题（附答案）

2025年生物理化分析专业考试试题（附答案）一、名词解释（每题3分，共12分）1.生物传感器答案以生物活性物质（如酶、抗体、核酸、细胞等）为识别元件，将特异性生物识别反应转化为可定量检测的电、光、热等信号的装置。2.色谱保留时间答案组分从进样开始至色谱柱后出现该组分色谱峰顶点所需的时间，常用tR3.荧光猝灭答案荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子发生相互作用，导致荧光强度降低甚至消失的现象。4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）答案利用阴离子去污剂SDS使蛋白质变性并带上大量负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中依据分子量大小对蛋白质进行分离的电泳技术。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.紫外-可见分光光度法中，吸光度A与透光度T的关系为（）A.AB.AC.AD.A答案A2.高效液相色谱（HPLC）中，常用的检测器不包括（）A.紫外检测器B.示差折光检测器C.火焰离子化检测器D.荧光检测器答案C解析火焰离子化检测器（FID）是气相色谱常用检测器，HPLC中因流动相多为液体且不易燃烧，一般不使用FID。3.测定蛋白质浓度常用的紫外吸收波长位于（）A.260nmB.280nmC.340nmD.410nm答案B4.在酶促反应动力学中，米氏常数KmA.酶被底物饱和时的反应速度B.反应速度达到最大速度一半时的底物浓度C.酶与底物亲和力越大，KmD.酶完全失活时的底物浓度答案B5.用分光光度法测定某物质含量，当透光率为50%时，吸光度为（）A.0.301B.0.693C.0.500D.1.000答案A解析A=6.在原子吸收分光光度法中，常用的光源是（）A.钨灯B.空心阴极灯C.氘灯D.激光器答案B7.在高效液相色谱中，反相色谱常用的流动相体系是（）A.正己烷-异丙醇B.甲醇-水C.氯仿D.四氢呋喃答案B8.用pH计测定溶液pH时，常用参比电极是（）A.玻璃电极B.甘汞电极C.铂电极D.石墨电极答案B9.凝胶过滤色谱分离蛋白质的原理是（）A.离子交换B.分子筛效应C.亲和吸附D.疏水作用答案B10.下列操作中不会引入误差的是（）A.未等温度平衡就读数B.使用校正过的移液管C.样品未充分混匀D.比色皿外壁附有液滴答案B三、填空题（每题2分，共20分）1.Lambert-Beer定律的数学表达式为A=εc答案摩尔吸光系数（摩尔吸收系数）2.高效液相色谱中，流动相使用前必须进行____处理，以去除溶解气体。答案脱气3.在荧光分析法中，一定浓度范围内荧光强度与激发光强度成__比，与荧光物质浓度成__比。答案正；正4.常用测定蛋白质分子量的电泳方法是____。答案SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）5.配制缓冲溶液时，Henderson-Hasselbalch方程为pH=p答案弱酸解离常数的负对数6.原子吸收光谱分析中，样品的原子化方式主要有火焰原子化和____原子化。答案石墨炉（电热）7.考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度时，染料与蛋白质结合后颜色由棕色变为____色。答案蓝8.色谱分析中，分离度R的计算公式为R=2(答案保留时间9.用pH计测定溶液pH前，需用标准缓冲溶液进行____。答案校准（标定）10.生物样品分析中为避免蛋白质变性，低温离心通常控制在____摄氏度左右。答案4四、简答题（每题7分，共28分）1.简述紫外-可见分光光度法进行定量分析的原理及选择测定波长的原则。答案原理基于Lambert-Beer定律：A=εcl，在稀溶液条件下吸光度A与浓度2.说明高效液相色谱中反相色谱与正相色谱的主要区别。答案反相色谱固定相极性小于流动相，常用C18等非极性键合相，流动相为甲醇-水、乙腈-水等极性溶剂，适用于非极性至中等极性化合物；正相色谱固定相极性大于流动相，常用硅胶、氨基等极性固定相，流动相为非极性溶剂如正己烷，适用于极性化合物。二者的保留机制和洗脱顺序相反。3.简述SDS测定蛋白质分子量的原理。答案SDS与蛋白质结合后使蛋白质变性，并按一定比例结合大量SDS，使蛋白质带上大量负电荷，消除了不同蛋白质原有的电荷差异。在聚丙烯酰胺凝胶中，蛋白质的电泳迁移率只取决于分子大小，分子量越小迁移越快。以已知分子量标准蛋白的对数分子量为纵坐标、相对迁移率为横坐标绘制标准曲线，由待测样品的迁移率即可求得其分子量。4.简述生物样品中蛋白质沉淀的常用方法及其原理（至少三种）。答案(1)有机溶剂沉淀法：加入乙醇、丙酮等降低溶液介电常数，破坏蛋白质水化层使其聚集沉淀；(2)盐析法：加入硫酸铵等增加溶液离子强度，竞争结合水分子，使蛋白质脱去水化层而沉淀；(3)等电点沉淀法：调节pH至蛋白质等电点，使蛋白质净电荷为零，分子间排斥力减小而聚集沉淀；(4)加热变性沉淀法：加热使蛋白质空间结构破坏、疏水基团暴露，从而凝固沉淀。五、计算题（每题10分，共20分）1.用分光光度法测定某蛋白质溶液浓度。取1.0mL样品稀释至100mL，在280nm处用1cm比色皿测得吸光度A=0.45。已知该蛋白质的摩尔吸光系数答案225mg/mL解析根据Lambert-Beer定律A=c稀释倍数为100/c换算为质量浓度：3.752.欲配制0.10mol/L磷酸盐缓冲液