CN119438463A 一种液相色谱-串联质谱法测定红细胞总叶酸的方法 （西湖维泰(杭州)诊断技术有限公司）

一种液相色谱-串联质谱法测定红细胞总叶定红细胞总叶酸的方法，所述方法的步骤如下：5甲基四氢叶酸和5,10次甲基四氢叶酸2种叶酸代谢物的浓度；再将所测得的浓度代入公式×C修正系数a=3计算得到红细胞总叶酸浓度，所述公式由叶酸蛋白结合法的检测结果修正而来。2xx。任意一项所述方法中所用试剂；所述试剂盒的使用方法同权利要求1~3任意一项所述的方32THF血总叶酸浓度和红细胞压积，根据公式“红细胞总叶酸浓度＝全血总叶酸浓度/红细胞压4红细胞5甲基四氢叶酸+a×C红细胞5,10次甲基四氢叶酸，修正系数a=3计算得到红2和10甲酰基叶酸等叶酸形式会全部或部分转化为5,10次甲基四氢叶酸，该产物能在条件下可以稳定存在。细胞5,10次甲基四氢叶酸浓度代表部分红细胞非甲基态叶酸形式浓度，缺失部分的红细胞非甲基态叶酸的浓度由叶酸蛋白结合法或微生物法检测得到的红细胞总叶酸浓度进行[0010]由上述的检测原理可知，仍有一部分红细胞非甲基态叶酸的浓度未能被液相色谱串联质谱法所检测，因此液相色谱串联质谱法检测得到的5,10次甲基四氢叶酸浓度×C。5活力范围内的水解酶都能很好地将多谷氨酸进行水解，但为了检测结果的准确性，优选本中的5甲基四氢叶酸和5,10次甲基四氢叶酸进行浓度检测；[0025]（3）使用化学发光法或微生物法检测对应的全血样本和血浆样本中的总叶酸浓特（美国）股份有限公司BeckmanCoulter6[0033]3.证实了影响本发明所提供提高检测结果的可重复性和准确性提供了理7水溶液，流动相B为含0.1%甲酸和10mM甲酸铵乙腈溶液；采用的设备包括反相色谱柱8样本对应的化合物峰面积/稳定同位素峰内标面积代入线性回归方程中求得稀释后红细胞得到原始的红细胞5甲基四氢叶酸和5,10次甲基四氢叶酸浓度。特（美国）股份有限公司BeckmanCoulter司BioRadLaboratories,Inc.生产的红细胞叶酸质控物LyphochekWholeBlood9[0061]（3）剩余全血1200×g离心10min，取出500μL上层血浆用于检测血浆中叶酸含[0075]液相色谱串联质谱法只检测了5甲基四氢叶酸和5,10次甲基四氢叶酸这两种要对液相色谱串联质谱法和化学发光法的总叶酸浓度检测结果进行修正分析，根据液相×C[0076]用液相色谱串联质谱法得到的红细胞5甲基四氢叶酸浓度①和红细胞5,10次甲基四氢叶酸浓度②,将不同的系数代入公式，可计算得到不同系数下的总叶酸与化学发由图7显示，液相色谱一串联质谱法与化学发光法检测数据的95%一致性限度值为（一C[0087]γ谷氨酰水解酶属于实施例1中所述反应液中的组分之一，其作用为将多谷氨酸同的水解酶的反应液（总体积为50μL）分别对2个已知总叶酸浓度（1140nmol/L和731×C氨酸形式的叶酸，因此为了测定结果的准确性，需要尽可能地将红细胞中多谷氨酸形酸完全转化为单谷氨酸形式叶酸，该转化过程在红细胞破碎之后、去蛋白之前的孵育步骤检测对象为2个已知叶酸浓度（740nmol/L和1370nmol/L）的红细胞生理盐水悬浮液样本总叶酸浓度/理论叶酸浓度×100%。[0097]红细胞样本中叶酸的多谷氨酸代谢物需在水解酶的作用下水解为单谷氨酸代谢100%。明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明