临床检验医学知识专题讲座专家讲座

绪论一、临床检验基础现实状况和特点古代:感官检验（如：尿液－中世纪)17世纪:荷兰Leeuwenhoek创造显微镜临床检验医学知识专题讲座第1页20世纪末以来:自然科学基础学科与医学基础学科结合－电脑化、自动化、微量化临床检验医学知识专题讲座第2页21世纪：当代信息网络技术（远程诊疗)与系统生物工程（包含分子生物学)、临床医学结合。临床检验医学知识专题讲座第3页最惯用临床检验,借助先进检测技术,对来自离体血液、尿液、粪便以及分泌物和排泄物等标本进行理学、化学、病原学和显微镜形态学检验,以简便、快速检测结果,基本满足临床医学检验筛检疾病需求。临床检验医学知识专题讲座第4页临床检验当代特征:1．从手工自动化、电脑化检测临床检验医学知识专题讲座第5页2．床边检测（pointofcaretest，POCT)临床检验医学知识专题讲座第6页3.试剂批量、配套、专业和多样化临床检验医学知识专题讲座第7页4.检验方法标准化如：1966年，成立国际血液学标准化委员会（ICSH，源自1963年欧洲血液学协会标准化委员会)5．全方面质量确保人员和物质检验分析前：标本采集、储存和转运过程尤为主要。现认为，管理好这两个步骤，可降低70%检验差错率。临床检验医学知识专题讲座第8页(1)标本采集标准－保持离体标本质和量完整性临床检验医学知识专题讲座第9页（2)防止非疾病原因干扰生理变异：第一类：不能控制生理变异－年纪和性别－对检验影响为长久效应第二类：相对能控制生理变异，如食物、药品、情绪、状态、体位和标本采集时间等，对检验影响多为短期效应。1)饮食原因：刚进食、禁食、饮酒、吸烟2)药品原因：方式、浓度临床检验医学知识专题讲座第10页二、临床检验基础应用目标1.为疾病诊疗和判别诊疗提供试验室检测客观依据2.为疾病疗效监测和预后判断提供动态改变依据3.为预防疾病提供检测依据4.为科学研究提供医学检验基本数据、基本检验方法和操作技能。临床检验医学知识专题讲座第11页三、学好临床基础检验基本要求1．掌握检验基础理论2．掌握检验试验技能3．熟悉检验方法学评价4．了解检验项目参考值

红细胞计数(RBC)参考值

男性:(4.0～5.5)×1012/L

女性:(3.5～5.0)×1012/L

临床检验医学知识专题讲座第12页5.熟悉检验项目临床意义尿蛋白定性临床意义

阳性有生理性，也有病理性。糖尿病患者尿中连续出现尿蛋白阳性，需除外泌尿系感染、原发性肾病外，应考虑糖尿病肾病诊疗……临床检验医学知识专题讲座第13页血液标本采集和血涂片制备血液标本采集和抗凝剂选择

全血：临床血液学检验：血细胞计数、分类血浆：临床生化检验（内分泌激素测定等)；血栓与止血检验血清：除纤维蛋白原等凝血因子外，其它成份与血浆基本相同，多数临床化学和临床免疫学检验。临床检验医学知识专题讲座第14页一、采血方法静脉采血法(venipunctureforbloodcollection)皮肤采血法(skinpunctureforbloodcollection)真空采血法(vacuumtubeforbloodcollection,负压采血法)。

定量、安全、转运方便.

封闭式采血,无需容器转移,降低溶血。

真空定量贮存试管适于不一样检验项目临床检验医学知识专题讲座第15页真空采血容器色泽及应用范围

颜色抗凝剂应用范围灰草酸盐、氟化钠

全血、血浆，血葡萄糖

黄血培养

绿肝素全血、血浆：血气红血清：生化、免疫

蓝枸橼酸盐

全血、血浆：凝血检验紫乙二胺四乙酸盐

全血、血浆，钾盐用于血细胞、血小板和血液学检验临床检验医学知识专题讲座第16页【方法学评价】皮肤采血:易溶血、凝血和可能混入组织液，重复性差。开放式采血:操作步骤多、不规范，易污染。封闭式采血:操作规范，安全性、重复性好。临床检验医学知识专题讲座第17页【质量控制】

血标本采集是分析前质量控制主要步骤。1．患者2．采血静脉采血:止血带压迫时间宜小于1min临床检验医学知识专题讲座第18页3．溶血4．血标本处理标准及时运输检测保留:温度和有效时间5．试验结果分析

采样时:年纪、性别、饮食、药品、时间临床检验医学知识专题讲座第19页二、抗凝剂选择1.乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid,EDTA)盐Na2C10H14O8N2+Ca2+→aC10H12O8N2+2Na++2H+特点：对血细胞形态、血小板计数影响很小（但影响血小板聚集)。依据国际血液学标准化委员会(InternationalCommitteeforStandardizationofhematology,ICSH)1993年文件提议，血细胞计数用EDTA-K2作抗凝剂（EDTA-K2-2H2O1.5～2.2mg/ml血液)。临床检验医学知识专题讲座第20页2．草酸盐（sodiumoxalate)：对凝血V因子保护功效差，影响凝血酶原时间测定；草酸盐与凝血酶钙结合后形成沉淀物，影响自动凝血仪使用；高浓度钾或钠离子易使血细胞脱水皱缩，草酸铵使血细胞膨胀。临床检验医学知识专题讲座第21页3．肝素(heparin)加强抗凝血酶III（antithrombinIII,AT-III)灭活丝氨酸蛋白酶作用，从而阻止凝血酶形成，阻止血小板聚集等作用，抗凝力强。用量（15±2.5)U/ml血液。但常可引发白细胞聚集，并使血涂片在罗氏染色（Romanowskyˊsstaining)时产生蓝色背景。临床检验医学知识专题讲座第22页4．枸橼酸盐枸橼酸钠(trisodiumcitrate)，能与血液中钙离子结合形成螯合物，从而阻止血液凝固。2Na3C6H5O7+2Ca2+→2CaC6H507-+6Na+

抗凝力较弱。抗凝百分比1∶9。多用于临床血液学检验、血液保养（毒性小)。临床检验医学知识专题讲座第23页第二节血液涂片制备和细胞染色

一、血液涂片制备厚薄适宜（与血量多少、推片速度相关)，头体尾显著：细胞分布要均匀血膜边缘整齐（留一定空隙)临床检验医学知识专题讲座第24页血涂片分布不均主要原因:

推片边缘不齐、用力不均匀、载片不清洁临床检验医学知识专题讲座第25页二、血液细胞染色（一)瑞氏染色法(Wright’sstain)1．瑞氏染料酸性染料伊红（eosin,E-)碱性染料亚甲蓝（methyleneblue,M+；又名美蓝)组成复合染料。甲醇：溶解美蓝和伊红ME；固定细胞形态；提升对染料吸附作用。临床检验医学知识专题讲座第26页2．染色原理物理吸附、化学亲和3．pH值影响细胞各种成份多属蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定。在偏酸时正电荷（H＋)增多，易与伊红结合，染色偏红。在偏碱时负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。染料贮存时间愈久，染色效果愈好。染液贮存，必须加塞，以预防甲醇挥发和被氧化成甲酸。加入甘油,预防甲醇挥发，染色清楚。临床检验医学知识专题讲座第27页（二)姬姆萨染色法姬姆萨染液：由天青、伊红组成。临床检验医学知识专题讲座第28页【方法学评价】1.血涂片制备手工推片法:血量少、操作简单、重复差。临床检验医学知识专题讲座第29页2.血液细胞染色瑞氏染色法:最经典、最惯用

瑞氏-姬姆萨复合染液:取长补短临床检验医学知识专题讲座第30页第二章血液普通检验第一节

红细胞检验红细胞（redbloodcell；erythrocyte)起源于骨髓造血干细胞（colonyformingunit-spleen，CFU-S)红细胞主要生理功效：经过胞内血红蛋白来实现。临床检验医学知识专题讲座第31页一、红细胞计数(redbloodcellcount，RBC)【检测原理】

1．手工显微镜法2．血液分析仪法利用电阻抗和（或)光散射原理

临床检验医学知识专题讲座第32页红细胞计数2ml稀释液充分混匀10ul血液充池、静止镜下计数

计算:RBC/L=N×5×10×106×200临床检验医学知识专题讲座第33页Neubauer计数盘临床检验医学知识专题讲座第34页

3mm

WBCWBCWBCWBC

1mm临床检验医学知识专题讲座第35页【方法学评价】1．手工显微镜法2．血液分析仪法为当前主要临床检验细胞计数方法变异系数（coefficientofvariation,CV)小。临床检验医学知识专题讲座第36页【质量控制】1．手工法误差起源包含：标本、操作、器材、固有误差（计数域误差)2．仪器法严格按操作规程；定时作室内和室间质控。

临床检验医学知识专题讲座第37页【参考值】

成年:男性(4～5.5)×1012/L女性(3.5～5.0)×1012/L新生儿(6.0～7.0)×1012/L。临床检验医学知识专题讲座第38页【临床意义】1.生理性改变(1)年纪与性别差异(2)精神原因(3)猛烈体力运动和劳动(4)气压降低(5)妊娠中、后期临床检验医学知识专题讲座第39页2．病理性改变（1)红细胞和血红蛋白量降低：在临床最常见于各种原因贫血。1)急性、慢性红细胞丢失过多：如各种原因出血。2)红细胞寿命缩短：如各种原因溶血3)造血原料不足4)骨髓造血功效减退临床检验医学知识专题讲座第40页（2)红细胞增多1)原发性红细胞增多：见于真性红细胞增多症、良性家族性红细胞增多症等。2)继发性红细胞增多：常见于能够引发低氧血症疾病：心血管病、肺疾病、异常血红蛋白病。肾上腺皮质功效亢进（库欣病)，可能与皮质激素刺激骨髓使红细胞生成偏高相关

药品肾上腺素、糖皮质激素、雄激素等。(3)相对性红细胞增多临床检验医学知识专题讲座第41页二、血红蛋白(hemoglobin,Hb或HGB)测定（一)血红蛋白分子结构及成份色素：亚铁血红素蛋白质：珠蛋白血红素：原卟啉和铁原子组成一个结合物，合成受δ-氨基-γ酮戊酸合成酶（δ-aminolevulinicacidsynthetase)、血红素本身和Fe2+调整。临床检验医学知识专题讲座第42页在正常状态，机体有99%Hb铁原子呈Fe2+状态，称为还原Hb,1%Fe3+为高铁血红蛋白，只有亚铁状态Hb才能与氧结合，此时称氧合血红蛋白。临床检验医学知识专题讲座第43页

血红蛋白结构

constructionofhemoglobin卟啉卟啉Fe卟啉卟啉

珠蛋白临床检验医学知识专题讲座第44页血红蛋白结构临床检验医学知识专题讲座第45页(二)血红蛋白合成血红蛋白合成受激素调整。红细胞生成素：促δ-氨基-γ酮戊酸（δ-aminolevulinicacid，ALA)生成与铁利用，促血红素和Hb合成；雄激素：在人体不一样生长时期。Hb种类与百分比不一样。临床检验医学知识专题讲座第46页【检测原理】血红蛋白形式：氧合血红蛋白（oxyhemoglobin)碳氧血红蛋白（carboxyhemoglobin)高铁血红蛋白（hemiglobin，Hi)其它衍生物临床检验医学知识专题讲座第47页1．氰化高铁血红蛋白（hemiglobincyanide,HiCN)测定法吸收波峰：540nm

2．其它测定法：叠氮高铁血红蛋白法（hemiglobinazide,HiN3)碱羟血红蛋白测定法沙利（Sahli，已经淘汰)血红蛋白测定法等临床检验医学知识专题讲座第48页【方法学评价】1966年，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白测定法作为国际标准参考方法。HiCN法简便、显色快而稳定。可检测除硫化血红蛋白（sulphonhemoglobin,SHb)外各种血红蛋白。氰化钾（potassiumcyanide，KCN)有剧毒十二烷基硫酸钠血红蛋白（sodiumdodecylsulfate,SDS)测定法：除SHb外，血液中各种Hb均可与低浓度SDS作用，生成SDS-Hb棕红色化合物。吸收曲线波峰在538nm，波谷在500nm，肩峰在560nm。无公害。破坏白细胞，不适于同时用于有白细胞计数和Hb测定血细胞分析仪上使用。

临床检验医学知识专题讲座第49页叠氮高铁血红蛋白（HiN3)测定法：含有与HiCN测定法相同优点，试剂有毒性。碱羟血红蛋白(AHD575)测定法沙利法为传统血红蛋白测定法，已淘汰。

临床检验医学知识专题讲座第50页【质量控制】血标本、方法、器材、采血部位

【参考值】成年：男性120～160g/L女性：110～150g/L新生儿：170～200g/L老年（70岁以上)：男性：94.2～122.2g/L女性：86.5～111.8g/L【临床意义】

与红细胞计数相同，但对贫血程度判断准确性优于红细胞计数。临床检验医学知识专题讲座第51页三、红细胞形态检验

【方法学评价】即使血细胞分析仪广泛用于全血细胞计数，但观察血涂片可用于预计对应血细胞数量，因而显微镜细胞数量和形态观察现常作为对仪器分析质控参考对照。注意:假如血片制作不良和染色不佳，常使细胞判别发生困难，甚至造成错误结论。临床检验医学知识专题讲座第52页【质量控制】

选择细胞分布均匀区域:红细胞堆积棒状穿钱状:细胞过于密集。但假如在血涂片较薄区域出现，可能是红细胞外附有异型球蛋白

注意完整检验次序临床检验医学知识专题讲座第53页【临床意义】

1.红细胞大小不一（1)

小红细胞(microcyte)：＜6μm（2)

大红细胞(macrocyte)：＞10μm。常见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、恶性贫血等。（3)

巨红细胞(megalocyte)：＞15μm临床检验医学知识专题讲座第54页（4)红细胞大小不均(anisocytosis)：同一患者红细胞之间直径相差一倍以上。如大达12μm，小仅2.5μm。常见于严重增生性贫血，巨幼细胞性贫血时尤为显著。临床检验医学知识专题讲座第55页2.红细胞内血红蛋白含量改变（1)正常色素性(normochromic)：见于急性失血、再生障碍性贫血、白血病等。（2)低色素性(hypochromic)：见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血，一些血红蛋白病。（3)高色素性(hyperchromic)：最常见于巨幼细胞性贫血。（4)多色性(polychromatic)：刚脱核而还未完全成熟红细胞，体积较大。正常人外周血占1%左右。尤见于溶血性或急性失血性贫血。

（5)细胞着色不一（anisochromia)：双形性贫血（dimorphicanemia),多见于铁粒幼红细胞性贫血。临床检验医学知识专题讲座第56页5．红细胞形状改变（1)

球形红细胞(spherocyte)：见于遗传性和取得性球形细胞增多症（如本身免疫溶血性贫血或直接理化损伤如烧伤等)。临床检验医学知识专题讲座第57页（2)

椭圆形红细胞(elliptocyte)：见于遗传性椭圆形细胞增多症、大细胞性贫血；偶见于缺铁性贫血、骨髓纤维化、巨幼细胞贫血、镰形细胞性贫血。正常人血液约占1%。临床检验医学知识专题讲座第58页（3)

靶形细胞(targetcell)：常见于各种低色素性贫血、尤见于珠蛋白生成障碍性贫血、HbC病，及阻塞性黄疸、脾切除后。临床检验医学知识专题讲座第59页（4)

口形红细胞(stomatocyte)：常见于口形红细胞增多症，小儿消化系统疾患引发贫血及酒清中毒、一些溶血性贫血、肝病。临床检验医学知识专题讲座第60页（5)

镰形红细胞(sicklecell)：镰状细胞贫血（HbS-S，HbS-C)，在缺氧条件下，可有大量镰状红细胞。临床检验医学知识专题讲座第61页（6)

棘红细胞(acanthocyte)：见于遗传性或取得性β-脂蛋白缺乏症；于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症。棘红细胞应与皱缩红细胞（也称锯齿状红细胞)区分（crenatedcell,echinocyte)。临床检验医学知识专题讲座第62页（7)

新月形红细胞（meniscocyte)：见于一些溶血性贫血（如阵发性睡眠性血红蛋白尿症)，其意义不明。正常人无。临床检验医学知识专题讲座第63页（8)

泪滴形红细胞（teardropcell)：可能是