染色体与核酸

染色体与核酸染色体与核酸第1页染色体DNA结构DNA复制DNA修复DNA转座染色体与核酸第2页内容提要：细胞周期染色体与染色质染色体结构和组成（原核生物、真核生物)核小体原核生物和真核生物基因组结构特点比较第一节染色体染色体与核酸第3页（一)细胞周期染色体与核酸第4页（二)染色体与染色质

染色体（chromosome)是细胞在有丝分裂时遗传物质存在特定形式，是间期细胞染色质结构紧密包装结果。

真核生物染色体在细胞生活周期大个别时间里都是以染色质(chromatin)形式存在。

染色质是一个纤维状结构，叫做染色质丝，它是由最基础单位—核小体(nucleosome)成串排列而成。

染色体与核酸第5页

染色体在遗传上起主要作用，负责将各种遗传信息传递给子代

任何一条染色体上都带有许多基因，一条高等生物染色体上可能带有成千上万个基因，一个细胞中全部基因序列及其间隔序列统称为genomes（基因组)。

假如构想将人体细胞中DNA分子绕地球一周，那么，每个碱基大约只占1-5厘米，而一个2-3kb基因只相当于地球上一条数十米长，数厘米宽线段！

染色体与核酸第6页有些生物体数并不确定,有些雌雄个体间染色体数不一样染色体与核酸第7页染色体与核酸第8页基础特征1、结构相对稳定；2、能够自我复制，从而确保亲代与子代之间遗传性状相对稳定；3、指导蛋白质合成，从根本上控制整个生命过程；4.能产生可遗传变异；染色体与核酸第9页（三)染色体结构和组成1.原核生物(prokaryote)染色体与核酸第10页（二)真核生物染色体组成蛋白质核酸{组蛋白：H1H2AH2BH3H4非组蛋白}核小体{DNA蛋白质染色体染色体与核酸第11页1、蛋白质——组蛋白，非组蛋白（1）组蛋白是染色体结构蛋白，它与DNA组成核小体。通常能够用2mol/LNaCl或0.25mol/LHCl/H2SO4处理使组蛋白与DNA分开。

组蛋白分为H1、H2A、H2B.H3及H4。这些组蛋白都含有大量赖氨酸和精氨酸

染色体与核酸第12页H3、H4富含精氨酸H1富含赖氨酸H2A.H2B介于二者之间染色体与核酸第13页①

进化上极端保守性牛、猪、大鼠H4氨基酸序列完全相同。H3保守性也很大,鲤鱼与小牛胸腺H3只差一个氨基酸。

（2)组蛋白特征染色体与核酸第14页保守程度：H1H2A、H2BH3、H4染色体与核酸第15页上海生化所分子遗传学1998年试题：

在真核生物核内。五种组蛋白（H1H2AH2BH3和H4)在进化过程中，H4极为保守，H2A最不保守（)染色体与核酸第16页②

无组织特异性

到当前为止,仅发觉鸟类、鱼类及两栖类红细胞染色体不含H1而带有H5,精细胞染色体组蛋白是鱼精蛋白。

染色体与核酸第17页③

肽链上氨基酸分布不对称性。碱性氨基酸集中分布在N端半条链上。比如,N端半条链上净电荷为+16,C端只有+3,大个别疏水基团都分布在C端。碱性半条链易于和DNA负电荷区结合,另外半条链与其它组蛋白、非组蛋白结合。

④

组蛋白修饰作用。包含甲基化、乙基化、磷酸化及ADP核糖基化等,发生在细胞周期特定时间,组蛋白特定位点。

染色体与核酸第18页简述真核生物染色体上组蛋白种类,组蛋白修饰种类及其生物学意义中国科学院年硕士硕士入学《生物化学与分子生物学》试题染色体与核酸第19页

在细胞周期特定时间可发生甲基化、乙酰化、磷酸化和ADP核糖基化等。H3.H4修饰作用较普遍，H2B有乙酰化作用、H1有磷酸化作用。

全部这些修饰作用都有一个共同特点，即降低组蛋白所携带正电荷。这些组蛋白修饰意义：一是改变染色体结构，直接影响转录活性;二是核小体表面发生改变，使其它调控蛋白易于和染色质相互接触，从而间接影响转录活性。

组蛋白可修饰性染色体与核酸第20页（3)非组蛋白普通特征

染色体上除了存在大约与DNA等量组蛋白以外，还存在大量非组蛋白。①

非组蛋白多样性。非组蛋白量大约是组蛋白60%～70%，但它种类却很多，约在20-100种之间，其中常见有15-20种。

②

非组蛋白组织专一性和种属专一性。

染色体与核酸第21页2.DNA（1)生物进化C值矛盾（Cvalueparadoxofnucleotide)C值：通常指一个生物单倍体基因组DNA总量

最大C值：基因组中总DNA量，单倍体基因组总DNA量

最小C值：编码信息基因总DNA量

染色体与核酸第22页生物进化程度与大C值不成正相关,亲缘关系很近大C值相差很大一个生物大C值与小C值相差极大由C值矛盾可知,许多DNA是不编码蛋白质,无生理功效C值矛盾（C值反常现象)：真核基因组含有大量重复序列，功效DNA序列被大多数不编码蛋白质非功效DNA所隔开染色体与核酸第23页（2)真核细胞DNA序列分类①

不重复序列（singlecopysequence,1-3copies)copy数：在单倍体基因组里，这些序列普通只有一个或几个拷贝；含量：占DNA总量40%－80%；长度：约750－bp，相当于一个结构基因长度；特点：单拷贝基因经过基因扩增仍可合成大量蛋白质；染色体与核酸第24页②

中度重复序列

（middlerepetitivesequence)copy数：在单倍体基因组里，这些序列普通只有10-104拷贝；含量：占DNA总量10%－40%；特点：基因拷贝重复，多量

序列相同或相同

排列成串

功效相同举例：rDNA，tDNA，Alufamily等染色体与核酸第25页非洲爪蟾18S、5.8S及28SrRNA基因是连在一起，中间隔着不转录间隔区，这些单位在DNA链上串联重复约5000次。在卵细胞形成过程中这些基因可进行几千次不一样百分比复制，产生2×106个拷贝，使rDNA占卵细胞DNA75%，从而使该细胞能积累1012个核糖体。

染色体与核酸第26页Alu序列是哺乳类中含量最多一个中度重复序列，散布在非重复序列之间，各个组员一起组成Alu家族。每一个组员长约300bp，各组员相关，互不相同，有80-88%同源性，多为点突变差异，多含AGCT序列，能够被Alu酶切割，在基因组中重复3-5×105次，平均每隔6kb就有一个，在人基因组中约占7%，功效也还不很清楚。

AlufamilyAlu酶切割位点AGCT300bp300bp300bp6kb6kb6kb6kb染色体与核酸第27页

因为碱基组成不一样,各物种DNA在CsCl梯度离心中,平衡时浮力密度决定于G+C含量,G+C含量高,浮力密度大。故对某一物种来说,其浮力密度曲线是覆盖一定浮力密度范围一条宽带,高度重复序列中,有一些简单高度重复序列,G+C尤其低或高,故形成比主带略重或略轻卫星带,叫卫星DNA卫星DNA③

高度重复序列（highrepetitivesequence)——卫星DNA染色体与核酸第28页隐蔽卫星DNA:有些高度重复序列碱基组成与总体差异不大,不能成为卫星DNA,但也有串联集中分布特点,故称之为隐蔽卫星DNA,crypticsatelliteDNA染色体与核酸第29页copy数：在单倍体基因组里，这些序列普通只有105-106拷贝；含量：占DNA总量10%－60%；特点：基因拷贝多串联重复排列，分布于着丝粒，端粒，结构基因两侧，异染色质成份，与染色体稳定相关长度：约6－100bp染色体与核酸第30页

酵母Telomeres普通以100bp左右不准确重复序列所组成。

5’(TxGy)n

3’(AxCy)n

其中X、Y普通为1－4

单细胞真核生物中n常为20－100,高等真核生物中>1500。

真核生物端粒Telomeres染色体与核酸第31页高等真核生物DNA不论从结构还是功效看都极为复杂，以小鼠为例：1、小鼠总DNA10％是小于10bp高度重复序列，重复数十万到上百万次/genome。

2、总DNA20％是重复数千次、长约数百bp中等重复序列。

3.总DNA70％是不重复或低重复序列，绝大个别功效基因都位于这类序列中。

染色体与核酸第32页染色体与核酸第33页简述DNAC值以及C值矛盾（CValueparadox).中科院上海生化所98年上海第二军医大：C值矛盾染色体与核酸第34页1.染色质和核小体

（nucleosome）（四)真核生物核小体组成

（1)染色质电子显微镜图显示出由核小体组成念珠状结构，能够看到由一条细丝连接着一连串直径为10nm球状体。

（2）核小体是由H2A、H2B.H3、H4各两个分子生成八聚体和由大约200bpDNA组成。八聚体在中间，DNA分子盘绕在外，而H1则在核小体外面。每个核小体只有一个H1。

染色体与核酸第35页ThenucleosomeconsistsofapproximatelyequalmassesofDNAandhistones(includingH1).Thepredictedmassofthenucleosomeis262kD.染色体与核酸第36页染色体与核酸第37页染色体与核酸第38页染色体与核酸第39页染色体与核酸第40页Nucleosome、chromosome、genome中科院年硕士学位硕士入学分子遗传学试题Nucleosome定义:用于包装染色质结构单位，是由DNA链缠绕一个组蛋白核组成。

染色体与核酸第41页中国科学院上海生化与细胞所年招收硕士硕士分子遗传学入学考试:简述真核细胞内核小体与核小体关键颗粒结构。

染色体与核酸第42页（五)原核生物和真核生物基因组结构染色体与核酸第43页结构简练:原核生物DNA绝大个别用来编码蛋白质，只有非常小一个别不转录，常与基因表示调控相关存在转录单元:功效相关基因，往往丛集在基因一个或几个特定部位形成转录单元，形成多顺反子mRNA1.原核生物基因组特点：X174D-E-J-F-G-HmRNA蛋白J、F、GHDE染色体与核酸第44页基因内基因个别重合基因一个碱基重合③

有重合基因:同一个DNA携带两种蛋白质信息染色体与核酸第45页2.真核生物基因组结构特点●

真核基因组结构庞大：3×109bp、染色质、核膜●单顺反子●基因不连续性：断裂基因（interruptedgene)、内含子(intron)、

外显子(exon)●非编码区较多：多于编码序列（9:1)●

含有大量重复序列染色体与核酸第46页第二节DNA结构一、DNA一级结构二、DNA双螺旋结构(二级结构)三、DNA高级结构四、核酸性质五、DNA分子变性与复性染色体与核酸第47页一、DNA一级结构1.概念：4种核苷酸连接及其排列次序，表示了该DNA分子化学组成。

染色体与核酸第48页2.组成

（1）碱基（Bases）DNA和RNA中碱基是含有各种取代基杂环芳香族化合物嘌呤（purine)：双环结构腺嘌呤（adenine)鸟嘌呤（guanine)嘧啶（pyrimidine)：单环结构胞嘧啶（cytosine)尿嘧啶（uracil)---RNA胸腺嘧啶（thymine)染色体与核酸第49页染色体与核酸第50页染色体与核酸第51页染色体与核酸第52页脱氧核苷酸结构染色体与核酸第53页（2)磷酸二酯键在DNA中脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸经过一个磷酸基团和前一核糖5’－羟基和下一个核糖3’羟基共价交联而形成多聚物，这种键或连接称为磷酸二酯键在中性条件下，每一个磷酸基团带有一个单位负电荷，因而核酸是"酸”，而且是强酸阴离子，是一个带有强负电性多聚体染色体与核酸第54页染色体与核酸第55页脱氧核糖核酸结构核糖核酸结构染色体与核酸第56页3.基础特点（1）DNA分子是由两条相互平行脱氧核苷酸长链盘绕而成。（2）DNA分子中脱氧核糖和磷酸交替连接，排在外侧，组成基础骨架，碱基排列在内侧。（3）两条链上碱基经过氢键相结合，形成碱基对，它组成有一定规律。这就是嘌呤与嘧啶配对，而且腺嘌呤（A）只能与胸腺嘧啶（T）配对，鸟嘌呤（G）只能与胞嘧啶（C）配对。染色体与核酸第57页HydrogenbondingpatternsinthebasepairsdefinedbyWatsonandCrick染色体与核酸第58页二、DNA双螺旋结构(二级结构)沃森、克里克于1935年提出模型带有负电磷酸－戊糖骨架在分子外侧碱基平面堆积于螺旋内部因为骨架双链在螺旋轴上间距不相等,因而在分子表面形成宽窄不等大沟和小沟双链之间对应碱基以氢键作用形成碱基对染色体与核酸第59页1.二级结构概念

指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成双螺旋结构，自然界中DNA分子通常都是以双螺旋结构存在染色体与核酸第60页DNA分子结构染色体与核酸第61页绕DNA双螺旋表面上出现螺旋槽（沟)，宽沟称为大沟，窄沟称为小沟。大沟，小沟都、是因为碱基对堆积和糖-磷酸骨架扭转造成。

染色体与核酸第62页DNA双螺旋模型是哪年由谁提出?简述其基础内容.为何说该模型提出是分子生物学发展史上里程碑，含有划时代贡献?

浙江大学医学院生物化学（硕士)染色体与核酸第63页2.DNA二级结构分类—A型、B型及Z型螺旋右手螺旋:A-DNA，B-DNA左手螺旋:Z-DNAABZ染色体与核酸第64页ABZ染色体与核酸第65页（1)B-DNA

生物体内DNA结构是基础一致，即所谓B型螺旋（最稳定)

沃森、克里克提出DNA分子双螺旋结构为B-DNA钠盐，两条反向平行链围绕同一中心轴组成右手螺旋染色体与核酸第66页B-DNA分子结构染色体与核酸第67页(2)A-DNA在低温条件下,DNA分子能够被诱导形成A型螺旋结构愈加紧密、更宽,螺旋重复每匝为11个碱基对(3)Z-DNAZ型DNA为左旋DNA,属于异常螺旋形式外观呈Z字型,每匝12碱基对不是体内DNA主要形式染色体与核酸第68页染色体与核酸第69页染色体与核酸第70页B-DNAZ-DNAA-DNA轴心与碱基关系穿过碱基对不穿过碱基对穿过碱基对出现情况普通情况，正常状态下DNA结构polyGC等4MNa+存在时会存在普通情况，dsRNA,DNA-RNA出现沟情况大沟和小沟只有小沟，更深大沟和小沟，更深染色体与核酸第71页大沟存在生物学意义:①

有利于蛋白质因子与DNA特异性结合，蛋白质因子沿大沟与DNA形成专一性结合几率大于小沟;②

大沟空间有利于与蛋白质结合染色体与核酸第72页不一样构象活性区分B-DNA>A-DNA>Z-DNA染色体与核酸第73页①

产生条件:嘌呤和嘧啶交替出现，普通大于6个②Z-DNA可能在基因转录调控方面有作用A邻近调控（4)左手螺旋Z-DNA研究控制区-开启子不转录Z-DNAB-DNA转录染色体与核酸第74页B远距离调控（转录区可在上千个碱基对以外)控制区不转录负超螺旋程度低，无扭曲张力B-DNAZ-DNA负超螺旋程度高，有扭曲张力可能转录染色体与核酸第75页（5)各种构象转化——构象多变可能有利于调整蛋白识别并结合于特定核苷酸序列影响原因：A、DNA碱基组成以及次序重复性：大多数AT丰富DNA自然倾向于B-DNA，AT重复区多为蛋白质DNA结合区B、盐浓度及种类会影响构象改变C.相对湿度染色体与核酸第76页细胞内许多DNA分子都是闭环细菌质粒真核生物线粒体病毒DNA分子闭环DNA分子特点:3’端和5’端连接成环两条互补链之间相互螺旋缠绕无游离端三、DNA高级结构染色体与核酸第77页1.DNA双螺旋深入扭曲盘绕所形成特定空间结构

正超螺旋（negativesuperhelix)：DNA扭曲方向

与双螺旋方向相同，加大DNA分子内张力，有紧旋效应（overwound)；

负超螺旋（positivesuperhelix)：DNA扭曲方向与双螺旋方向相反（几乎全部细胞中超螺旋都是负)，旋转结果使DNA分子内张力减小，称为松旋效应（underwound)染色体与核酸第78页染色体与核酸第79页环状DNA形成超螺旋染色体与核酸第80页2.正超螺旋和负超螺旋能够相互转变B-DNA双螺旋分子链间螺旋数若发生改变,会出现超螺旋结构负超螺旋拓扑异构酶松弛DNA拓扑异构酶EBEB正超螺旋DNA扭曲与双螺旋相反（松开）DNA扭曲与双螺旋相同（拧紧）染色体与核酸第81页（1)拓扑异构酶（topoisomeraseІ，Ⅱ)参加构象改变TOPІ——消除负超螺旋（每次松弛一个超螺旋)TOPⅡ——形成负超螺旋（由ATP供能，引入2个超螺旋)染色体与核酸第82页染色体与核酸第83页染色体与核酸第84页精细调控严格控制体内负超螺旋维持在5%水平，详细机理不明确保各种遗传活动进行TOPІ~~~TOPⅡ含量平衡染色体与核酸第85页（2)超螺旋发生规律

VinogradJ(1968)发觉Vinogradequation:L=T+WL:linkingnumber（双链DNA交叉数，不发生断裂，为定值)T:twistingnumber（双链DNA缠绕数，初级螺旋圈数)W:writhingnumber（双螺旋数)W=负值（负超螺旋)W=正值（正超螺旋)染色体与核酸第86页例子:L=T+W一段DNA序列长为1350bpL＝135，W＝0，T＝135一端固定，另一端向相反方向旋转5下，DNA依然想要维持B-DNA结构，所以L＝130，T＝135，W＝-5说明形成了5个负超螺旋染色体与核酸第87页3.超螺旋存在意义（1）DNA复制和转录需要：复制需要较高水平负超螺旋，以消除复制叉前进阻力，复制结束后需要较低负超螺旋水平以确保转录进行；（2）DNA分子需要以高密度超螺旋状态压缩在细胞核内，超螺旋DNA比松弛分子含有更为紧密结构，因而对分子在细胞内包装过程更为有利；（3）超螺旋会影响双螺旋分子解旋能力，从而影响到DNA与其它分子相互作用。

染色体与核酸第88页四、核酸性质核酸稳定性酸效应碱效应紫外吸收纯度减色性染色体与核酸第89页1.核酸稳定性核酸稳定性源泉碱基间氢键存在——非主要碱基对之间"堆积作用”(stackinginteraction)——主要作用力碱基是芳香族化合物，是疏水大量水分子氢键作用形成网格在疏水表面附近变得稳定，水分子排列变得更有序，碱基正确堆积使全部水分子排除在这么疏水表面，疏水效应使其成为能量上最稳定一个结构最大程度地增强了碱基电荷偶极作用染色体与核酸第90页2、酸效应

在强酸和高温下，核酸能够完全水解为碱基、核糖（脱氧核糖）和磷酸3.碱效应DNA变性—碱效应使碱基发生互变异构，造成DNA双链解离，使DNA变性染色体与核酸第91页4.核酸紫外吸收因为嘧啶碱和嘌呤碱均含有苯环,所以在紫外区都有吸收DNA和RNA—260nm蛋白质—280nm染色体与核酸第92页5.DNA纯度常见260nm与280nm处吸光值来确定:纯dsDNAA260／A280为1.8纯RNAA260／A280为2.0若样品A260／A280>1.8，则表明有RNA污染若样品A260／A280<1.8，则表明有蛋白质污染染色体与核酸第93页6、核酸减色性核酸碱基消光系数与其所处环境相关其吸光值次序为：单核苷酸>单链DNA（RNA)>双链DNA（RNA)引发减色性原因为：碱基在疏水环境中堆积染色体与核酸第94页五、DNA分子变性与复性（一)DNA分子变性（DNAdenaturation)ssDNAdsDNA加温，极端pH，尿素，酰胺极端pH:高pH下,嘌呤分子结构由酮式转为烯醇式,将直接影响到特定碱基之间氢键作用,造成DNA双链解离,成为DNA变性尿素,酰胺:与碱基间形成作用,改变碱基对间氢键,造成DNA变性染色体与核酸第95页染色体与核酸第96页1.熔链温度（meilingtemperature，Tm）加热破坏了原来维持双螺旋结构原因，将双链DNA迟缓加热，不一样时间取样测A260值，能够得到该DNA分子熔链曲线；加温使DNA变性时，其紫外吸收光密度到达最大值二分之一时温度（85－95℃）为熔链温度Tm染色体与核酸第97页1.1851.01.37Tm1Tm2RichATRichGCA260℃自由碱基和单双链DNAA260吸收值不一样，50ug/mlDNA溶液:dsDNA:A260＝1ssDNA:A260＝1.37自由碱基:A260＝1.60染色体与核酸第98页2.影响Tm值原因（1)ATGC随机分布：GC％含量越高Tm值越大，GC％含量越低Tm值越小Tm＝69.3+0.41×GC％（2)大片段dsDNA分子之间比较，长短对Tm影响较小；小于100bpdsDNA分子之间比较，片段越小变性越快，Tm值越小（3)盐浓度Na离子浓度高Tm低Na离子浓度低Tm高染色体与核酸第99页3.增色效应(Hyperchromaticeffect)在变性过程中，260nm紫外线吸收值先迟缓上升，当到达某一温度时骤然上升，称为增色效应。

染色体与核酸第100页二、DNA分子复性（annealorrenaturation)1.发生条件（1）盐浓度必须高，足以使两条链之间磷酸基团上负电荷排斥力消失，通常见0.15-0.5mol/lNaCl（2）温度适当，足以预防两链内随机氢间形成，比Tm值低20－25℃染色体与核酸第101页2.Cot曲线复性是随机碰撞事件，依赖于DNA浓度，浓度高时，互补次序碰撞机会增加，复性速度加紧，复性过程可用二级反应方程式表示:sDNA＋S’DNA——dsDNAC0为单链DNA初始浓度C为t时刻DNA浓度K’速度常数c02dcdt=－kc2c=11+c0t×k’cc0=1C0t1/2=K’1K’为速度常数,与DNA复杂程度成反比c0t1/2大小就代表了基因组序列复杂性染色体与核酸第102页以c/c0对c0t作图,得到c0t曲线60℃保温时间相对A260t1/2t1/210ug/mlDNA30ug/mlDNA染色体与核酸第103页3.复性影响原因（1)次序复杂比次序简单慢（2)DNA片段大比小慢（3)温度和离子强度也有影响4.减色效应（Hypochromaticeffect)

伴随DNA复性，260nm紫外线吸收值降低现象。

染色体与核酸第104页DNA杂交NucleicAcidsfromDifferentSpeciesCanFormHybrids染色体与核酸第105页第四节DNA复制染色体DNA复制:主要是半保留复制染色体与核酸第106页一、复制起点、方向和速度1.复制起点DNA复制是由固定起点开始细菌、线粒体等复制是由单个复制子进行，真核生物是多个起点双向复制，基因中含多个复制子染色体与核酸第107页染色体与核酸第108页2.复制方向主要是从固定起点开始双向等速复制，也有单向染色体与核酸第109页二、原核生物DNA复制特点大肠杆菌DNA复制起点（oriC)保守序列分析1.E.Coil，酵母，SV40病毒染色体复制起点DNA序列共性：（1）都是由很多独特短重复序列组成；（2）这些短序列被很多亚基复制起点结合蛋白识别，它对于在复制起点组装复制酶具相关键作用；（3）复制起点附近普通有一个富含AT序列，以利于双螺旋解旋或解链，并产生单链DNA复制模板染色体与核酸第110页染色体与核酸第111页ThecomplexatoriCcanbedetectedbyelectronmicroscopy.BothcomplexeswerevisualizedwithantibodiesagainstDnaBprotein.PhotographskindlyprovidedbyBarbaraFunnell.染色体与核酸第112页2.DNA双螺旋解开（1）单链结合蛋白（SSB蛋白）特点：A、含有协同效应B.作用方式是先结合已经存在单链区，并从中侵蚀双链个别，真核SSB是先结合DNA双链并使之熔化功效：确保解开单链在复制前保持单链状态，以四聚体形式存在染色体与核酸第113页（2)DNA解链酶（DNAhelicase)分类：A、沿滞后链：E.coil解链酶Ⅱ等，B.沿前导链：repPr功效：能经过水解ATP取得能量解开双螺旋，沿单链移动，在双链处仍按单链移动从而解开双链染色体与核酸第114页3.复制引发和终止（1）引发——RNA引物合成A、前导链：RNA聚合酶直接合成一段RNA引物（5’端第一个常为pppA或pppG，长几个至几十个bp，前一两个固定，后面随机也能够从模板拷贝）B.滞后链：经常由引发体（primosome）完成引发体引发前体(preprimosome)六种蛋白：n’，n’’，n’’’，DnaB,C和I引发酶（primase）染色体与核酸第115页（2)终止参加者:终止序列Ter:20bp重复序列终止蛋白Tur:识别和结合于终止Ter序列，含有反解螺旋酶作用，阻止解旋，抑制复制叉前进作用方式:复制叉碰到终止序列Ter后，Ter-Tus复合物可阻挡复制叉前进染色体与核酸第116页Tusbindstoterasymmetricallyandblocksreplicationinonlyonedirection.染色体与核酸第117页ReplicationterminiinE.coliarelocatedbeyondthepointatwhichthereplicationforksactuallymeet.染色体与核酸第118页4.DNA聚合酶polCpolBpolA已知结构基因150.051生物学活性10-20？400细胞内分子数90090103相对分子质量/103+--新生链合成--+5’-3’外切+++3’-5’外切聚合酶Ⅲ聚合酶Ⅱ聚合酶І性质聚合酶І——除去RNA引物和损伤修复聚合酶Ⅱ——损伤修复聚合酶Ⅲ——复制中链延长染色体与核酸第119页染色体与核酸第120页DNApolymeraseIIIholoenzymeassemblesinstages,generatinganenzymecomplexthatsynthesizestheDNAofbothnewstrands.染色体与核酸第121页真核生物复制子—ARS（autonomouslyreplicatingsequence)特点：150bp左右，含复制必需保守区起始原点识别复合物—ORC三、真核生物DNA复制特点——多个复制起点上双向复制染色体与核酸第122页染色体与核酸第123页四、DNA复制调控（一）原核生物细胞DNA复制调控细胞内复制叉多少决定了复制起始频率高低（二）真核生物细胞DNA复制调控1、细胞生活周期水平调控2、染色体水平调控3.复制子水平调控染色体与核酸第124页Nature:DNA复制过程再认识

染色体与核酸第125页（一）错配修复（mismatchrepair）1、这一系统能发觉DNA双螺旋中因互补碱基之间不配对而产生变形2.修复依据：“保护母链，修复子链”

利用dam基因编码Dam甲基化酶将DNA母链GATC中A甲基化五、DNA修复染色体与核酸第126页MutS:识别并结合于错配碱基处MutL:连接MutS和MutHMutH:内切核酸酶，形成切口染色体与核酸第127页染色体与核酸第128页（二)碱基切除修复（base-excisionrepair)DNA糖苷水解酶识别修饰碱基切除修饰碱基与糖基之间N-糖苷键，留下一个脱嘌呤或脱嘧啶位点（AP位)AP内切核酸酶在该位点切开DNA，其外切酶活性能够继续切出一个缺口缺口可由DNAPol1（E.Coli)或DNAPolβ（真核生物)填补染色体与核酸第129页染色体与核酸第130页脱氨基作用染色体与核酸第131页（三)核苷酸切除修复（nucleotide-excisionrepair)核酸内切酶在损伤部位两侧各切除准确数目标碱基；包含损伤寡核苷酸被切除并留下一个缺口；缺口可由DNA聚合酶1填补（E.Coli)或DNAPolδ或ε（真核