全国艾滋病检测技术规范(2025年修订版)(征求意见稿)

全国艾滋病检测技术规范(2025年修订版)(征求意见稿)本规范适用于全国各级疾病预防控制机构、医疗机构、采供血机构、出入境检验检疫机构、妇幼保健机构、社区卫生服务机构、自愿咨询检测门诊（VCT）、艾滋病自检服务点位及其他开展人类免疫缺陷病毒（HIV）检测的相关机构，覆盖从样本采集、实验室检测、结果报告、咨询告知到阳性随访的全流程技术操作与质量管理要求，所有开展HIV检测的机构及人员必须严格遵照本规范执行。规范性技术引用文件包括《病原微生物实验室生物安全管理条例》《艾滋病防治条例》《医疗机构临床实验室管理办法》《全国艾滋病检测工作管理办法》《HIV诊断试剂注册技术审查指导原则（2023年版）》《临床基因扩增检验实验室工作规范》《血站技术操作规程》《医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原则》，所有引用文件的最新版本适用于本规范。相关术语定义统一明确如下：一是HIV感染急性期，指HIV侵入机体到血清抗体稳定阳转的阶段，通常为感染后2-4周，部分感染者可伴随急性逆转录综合征表现，此阶段病毒载量高、传染性极强，p24抗原、HIV核酸可稳定检出，抗体尚未阳转或仅呈弱反应；二是窗口期，指从HIV感染人体到现有检测方法能够稳定检出感染标志物的时间间隔，其中HIV-1前病毒DNA检测窗口期为感染后3-7天，HIV-1RNA定量检测窗口期为感染后7-10天，第四代HIV抗原抗体联合检测窗口期为感染后14-21天，第三代HIV抗体特异性检测窗口期为感染后21-28天，抗体快速检测（指尖末梢血、口腔黏膜渗出液）窗口期与第三代试剂一致；三是HIV诊断试验层级，分为筛查试验（含初筛、复检）和确证试验两个层级，其中确证试验包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（RIBA）、HIV核酸定性/定量试验、HIV-1/HIV-2抗体分型试验；四是干血斑样本（DBS），指将采集的全血滴加在Whatman903级或等效性能的专用滤纸片上，经自然干燥形成的标准化血斑样本，可用于HIV抗体、抗原、核酸检测，适用于偏远地区样本转运、婴幼儿早期诊断、流行病学调查等场景；五是HIV自我检测，指个体在私密场景下自行采集样本、完成检测操作、读取结果的过程，自检结果仅作为初筛提示，不得作为确诊依据。实验室生物安全为HIV检测工作的核心前提，所有开展HIV检测的实验室应当符合生物安全二级（BSL-2）及以上防护标准，涉及HIV毒株分离、培养、中和试验等高风险操作必须在生物安全三级（BSL-3）实验室内开展。实验室应当建立生物安全管理责任制，明确实验室负责人为生物安全第一责任人，每年至少开展2次生物安全专项培训与应急演练，所有上岗人员必须经过生物安全考核合格后方可从事检测操作。个人防护方面，进入实验区域必须穿戴工作服、工作帽、医用外科口罩；开展样本开盖、离心、震荡等可能产生气溶胶的操作时，需佩戴N95级及以上防护口罩、护目镜或防护面屏、双层一次性乳胶手套，手套出现破损、污染时必须立即更换并严格执行手卫生流程；严禁穿着实验防护服进入办公区、休息室、卫生间等非实验区域，实验操作过程中严禁饮食、吸烟、佩戴隐形眼镜、化妆，严禁用手直接接触口、眼、鼻等黏膜部位。样本管理方面，所有HIV检测样本应当视为潜在感染性材料，样本接收、转运、处理全程必须放入防渗漏密封容器，离心操作必须使用带密封盖的防泄漏离心杯，离心结束后在生物安全柜内开盖，严禁在开放实验台上直接打开离心后的样本管；筛查剩余样本在2-8℃条件下保存7天，确证阳性剩余样本在-20℃条件下保存至少10年，-70℃条件下可长期保存，严禁将HIV检测样本与非感染性样本混放储存。溢洒应急处置方面，若发生样本溢洒，应当立即用吸水纸巾覆盖溢洒区域，从外围向中心倾倒有效氯浓度为5000mg/L的含氯消毒剂，作用30分钟后再行清理，清理过程中避免直接接触溢洒液体；若溢洒样本接触皮肤或黏膜，立即用大量流动清水持续冲洗接触部位15分钟以上；若发生锐器刺伤，立即从近心端向远心端挤压伤口，尽可能挤出损伤处血液，再用流动清水和肥皂水交替冲洗伤口15分钟，随后用75%酒精或0.5%碘伏消毒伤口，按照职业暴露处置流程开展风险评估，必要时在暴露后2小时内启动预防性用药，最长不得超过24小时，暴露后立即、4周、8周、12周、6个月分别开展HIV随访检测。实验室消毒与废物处理方面，实验结束后使用1000mg/L含氯消毒剂或75%酒精对实验台面、仪器表面进行擦拭消毒，作用时间不少于10分钟；实验产生的医疗废物必须放入双层黄色医疗废物袋，经121℃、20分钟高压蒸汽灭菌处理后，交由具备资质的医疗废物处置单位集中处理，严禁未经消毒处理的HIV检测相关医疗废物流出实验室。检测人员需满足对应资质要求：筛查实验室检测人员需具备医学检验、临床医学、预防医学等相关专业背景，经市级以上疾控中心组织的HIV检测技术培训，掌握样本采集处理、筛查试验操作、生物安全防护、结果报告相关要求，考核合格后上岗；确证实验室检测人员需经省级以上疾控中心组织的确证检测专项培训，掌握免疫印迹、核酸检测、结果判定、疑难结果分析技能，具备3年以上HIV检测工作经验，考核合格后上岗；核酸检测实验室人员需经省级以上临床检验中心组织的基因扩增检验技术培训，掌握核酸提取、扩增检测、污染防控技能，获得基因扩增检测上岗证书；社区、监管场所、VCT门诊等快速检测点的工作人员，需经县级以上疾控中心组织的快速检测技术培训，掌握快速检测操作、样本采集、结果初判、阳性样本转介流程，考核合格后上岗。所有检测人员每2年接受一次复训与考核，上岗前需接受伦理规范、隐私保护专项培训，严格落实检测工作责任。样本采集、转运与处理需严格执行标准化流程。样本类型方面，HIV检测适用样本包括静脉全血、血清、血浆、指尖末梢全血、干血斑、口腔黏膜渗出液、尿液，不同检测方法适用样本类型需严格匹配试剂说明书要求，严禁超样本类型范围开展检测；其中血清/血浆样本适用于所有筛查、确证及核酸检测项目，指尖末梢全血适用于快速检测、即时检测（POCT）场景，干血斑样本适用于抗体检测、HIV-1DNA/RNA检测、婴幼儿早期诊断，口腔黏膜渗出液、尿液样本仅适用于经国家药监局批准的相应抗体快速筛查试剂，不得用于确证试验或核酸检测。样本采集方面，静脉血采集使用一次性真空采血管，抗体或抗原抗体联合检测使用无抗凝剂促凝管或含分离胶采血管，采集量3-5ml；核酸检测使用EDTA-K2抗凝管，严禁使用肝素抗凝管（肝素可抑制PCR扩增反应，易导致假阴性结果），采集量5ml；采集后在采血管上清晰标注受检者唯一识别码、采集时间、采集人员信息，双人核对受检者姓名、身份证号等信息无误后送检，严禁出现样本错配、标识不清情况。末梢全血采集使用一次性末梢采血针，采集前用75%酒精消毒指尖皮肤，待酒精完全干燥后穿刺，弃去第一滴血液，用无菌采血管或试剂配套加样装置采集足量末梢血，避免过度挤压导致组织液混入造成结果偏差。干血斑样本采集时，将静脉血或末梢全血滴加在专用滤纸片上，每个血斑直径不小于8mm，确保血液均匀渗透滤纸正反面，采集后将滤纸片水平放置在洁净干燥环境中干燥4小时（相对湿度≤50%，温度18-25℃），避免阳光直射、触碰血斑表面，干燥后装入含干燥剂的密封袋，标注样本信息后送检。口腔黏膜渗出液采集使用试剂配套采样拭子，沿上下牙龈线来回擦拭4-6次，避免采集唾液，采集后将拭子放入样本稀释液中充分搅拌洗脱待检。尿液样本采集中段尿液10-20ml，避免混入经血、前列腺液、精液等杂质，采集后2小时内完成检测。样本转运方面，本地转运样本放入密封防漏的样本转运箱，箱内放置冰排保持温度2-8℃，转运过程中避免样本剧烈震荡、暴晒、反复冻融；长距离转运用于核酸检测的样本需保持-20℃以下冷冻状态，干血斑样本可在常温条件下转运，转运时间不超过14天；样本转运附带统一格式的样本送检单，明确样本数量、类型、受检者信息、检测项目，交接双方签字确认，转运记录留存时间不少于10年。样本处理方面，血清/血浆样本采集后室温放置30-60分钟待血液完全凝固，以3000r/min离心15分钟分离血清/血浆，若样本出现严重溶血（血红蛋白浓度>5g/L）、脂血（甘油三酯浓度>12mmol/L）、黄疸（胆红素浓度>342μmol/L），需标注样本状态，若可能影响检测结果需重新采集样本检测；干血斑样本处理在生物安全柜内开展，用无菌打孔器取直径3mm的血斑片，放入试剂盒配套洗脱液中按照要求温度和时间洗脱后检测，每处理完一个样本对打孔器进行75%酒精擦拭、灼烧冷却处理，避免样本间交叉污染。HIV检测需严格遵循分层分级的检测策略与技术流程。通用检测流程为“初筛-复检-确证”三级：初筛环节优先选择敏感性100%、特异性≥99%的经国家药监局批准注册的第四代HIV抗原抗体联合检测试剂，初筛无反应的样本直接报告阴性；初筛有反应的样本采用两种不同厂家、不同检测原理的高特异性筛查试剂开展双份复检，双份复检均无反应的报告阴性，双份复检均有反应或一份有反应一份无反应的，进入确证试验流程。确证试验优先采用免疫印迹试验（WB）开展抗体确证，有条件的机构可联合HIV核酸定量试验作为补充确证方法，适用急性期感染、WB结果不确定等场景。确证结果判定标准统一为：WB试验出现至少2条env带（gp160、gp120、gp41），或同时出现1条env带和1条p24带，判定为HIV-1抗体阳性；出现HIV-2特异性条带（gp105、gp36）判定为HIV-2抗体阳性；无任何条带出现判定为HIV抗体阴性；出现条带但不满足阳性判定标准的，判定为HIV抗体不确定。核酸试验判定方面，对于WB结果不确定的样本，若HIV-1RNA定量结果≥5000拷贝/ml，结合流行病学史可判定为HIV-1感染阳性；若HIV-1RNA定量结果<5000拷贝/ml或检测不到，需在2周后随访检测，随访时若WB条带进展满足阳性标准、或RNA载量动态升高，判定为阳性，若条带无进展、RNA持续阴性，判定为阴性。HIV-1DNA检测主要用于婴幼儿早期诊断，出生后6周内婴幼儿采集干血斑样本开展检测，2次连续检测阳性即可判定为HIV感染，无需等待18月龄抗体检测结果。不同检测场景需匹配适配性检测流程：一是医疗机构常规就诊检测，对住院患者、手术患者、孕产妇、婚前检查人群、性病就诊者、结核病患者等重点人群，首选第四代抗原抗体联合检测试剂，初筛有反应的立即开展双试剂复检，复检有反应的24小时内将样本送属地艾滋病确证实验室确证，确证阳性的24小时内完成传染病网络报告，同步将患者转介至属地疾控中心开展随访管理；其中孕产妇筛查阳性需启动快速确证通道，确保在分娩前获得确证结果，及时提供抗病毒治疗、母婴阻断服务。二是VCT门诊、社区快速检测场景，优先选择经批准的快速检测试剂（指尖末梢血、口腔黏膜渗出液）开展即时检测，快速检测无反应的，结合窗口期告知结果，提示存在高危行为的受检者在窗口期后复查；快速检测有反应的，不得直接告知阳性结果，需采集静脉血样本送筛查/确证实验室开展后续复检和确证，在确证结果出具前为受检者提供风险咨询，做好心理疏导，避免心理危机事件发生。三是艾滋病自我检测服务，提供自检试剂的机构需配套提供清晰的操作指导视频、图文说明书、24小时结果咨询热线，明确告知结果解读规则：对照带和检测带均显色为初筛有反应，需立即到疾控机构或医疗机构开展专业检测确认；仅对照带显色为无反应，处于窗口期的受检者需在窗口期后复查；对照带不显色提示检测无效，需重新检测；严禁任何机构或个人将自检阳性结果作为确诊依据，不得向自检者出具诊断报告，不得泄露自检者个人信息。四是采供血机构检测，对捐献血液采用“两遍血清学筛查+一遍核酸检测”的策略，血清学筛查选择两个不同厂家的第四代抗原抗体联合试剂，核酸检测采用HIV/HCV/HBV三联核酸检测试剂，任何一种检测有反应的血液一律不得用于临床，按照医疗废物规范处置，同步对献血者进行永久屏蔽，将检测结果反馈至献血者本人，指导其到医疗机构进一步确诊。五是暴露前后预防相关检测，开展暴露后预防（PEP）的受检者在暴露后立即开展基线检测（第四代抗原抗体+核酸检测），排除已存在的感染，随后在暴露后4周、8周、12周、6个月分别开展随访检测；开展暴露前预防（PrEP）的人群在服药前开展基线HIV检测（抗原抗体+核酸），服药期间每3个月开展一次HIV检测，避免已感染人群继续使用PrEP方案导致耐药，若检测发现抗原抗体阳性，及时开展核酸检测和耐药检测，调整干预方案。六是婴幼儿HIV感染诊断，HIV感染母亲所生儿童在出生后6周、3个月分别采集干血斑样本开展HIV-1DNA检测，两次检测均阴性的在18月龄时开展抗体检测，抗体阴性即可排除感染；任意一次DNA检测阳性的，再次采集静脉血样本开展核酸定量和抗体检测复核，复核阳性即可确诊，及时启动抗病毒治疗。七是监管场所检测，监狱、看守所、强制隔离戒毒所等场所在新入所人员入所24小时内开展HIV筛查，筛查有反应的及时送确证，确证阳性的在监管场所内落实抗病毒治疗措施，出所时做好治疗转介衔接，避免治疗中断。各类检测方法需严格遵守操作规范：酶联免疫吸附试验（ELISA）操作时严格按照试剂说明书设置阴阳性对照、临界值对照，每板次放置弱阳性、阴性质控品，质控结果在控方可判定样本结果，温育温度、时间、洗板次数、加样量严格匹配试剂要求，避免因洗板不充分、加样误差、温育温度偏差导致假阳性或假阴性。化学发光免疫分析试验（CLIA）需定期对仪器进行校准、维护，每日开机后先开展室内质控，质控在控后方可检测样本，试剂在有效期内使用，避免反复冻融；对S/CO值处于0.8-1.2灰区范围的样本，开展双份复检，必要时进行核酸检测确认。免疫层析快速试验（RT）在15-30℃环境温度下开展，试剂提前从冷藏环境取出恢复至室温后使用，加样量严格按照说明书要求，加入样本稀释液后15-20分钟读取结果，超过30分钟读取的结果无效，不得将超时显示的条带作为阳性判定依据。免疫印迹试验（WB）严格控制转膜电流、时间、抗体孵育温度、显色时间，每批次试验携带明确的阳性、阴性对照，对照条带清晰符合要求后方可判定样本结果；对仅出现gag带（p17、p24）或单条pol带（p31、p51、p66）的不确定结果，详细记录条带位置，及时告知受检者随访要求，不得随意出具阳性或阴性报告。核酸扩增试验（NAAT）实验室符合临床基因扩增实验室分区要求，设置试剂准备区、样本处理区、扩增区、产物分析区，各区物品专用，不得交叉使用，严防扩增产物污染；每批次检测设置阴性质控（生理盐水）、阳性质控（已知浓度HIV核酸标准品）、低浓度室内质控品（浓度为最低检出限的2-3倍），所有质控结果在控方可报告结果；用于HIV感染诊断的核酸试剂最低检出限≤50拷贝/ml，用于婴幼儿诊断的核酸试剂最低检出限≤20拷贝/ml，避免低病毒载量样本漏检。HIV-1基因型耐药检测适用于抗病毒治疗失败（病毒载量>1000拷贝/ml）、急性期感染、启动治疗前的孕产妇及儿童感染者，检测采用Sanger测序法或高通量测序法，测序序列覆盖蛋白酶、逆转录酶、整合酶区域，耐药突变按照斯坦福大学HIV耐药数据库最新版本标准判定，结果用于指导临床治疗方案调整。实验室需建立覆盖检测全流程的质量控制体系。检测前环节，建立样本采集、转运、接收标准操作流程，对样本标识、样本状态、采集时间、送检时间进行核查，对标识不清、渗漏、严重溶血脂血、采集量不足的不合格样本予以拒收，要求重新采集；定期对采样、转运人员开展培训，确保样本质量符合要求。检测中环节，每批次检测同步开展室内质控，质控品选择与临床样本基质一致的血清/血浆材料，不得使用试剂自带对照品替代室内质控品；筛查试验质控品设置为临界值浓度，可灵敏反映检测系统偏差；确证试验和核酸检测的质控品设置高、低两个浓度水平，其中低浓度质控品浓度接近方法最低检出限；质控结果采用Levey-Jennings质控图判定，出现质控结果超出±2SD范围时立即查找原因，纠正偏差后重新检测，严禁质控失控状态下出具检测报告。检测后环节，建立结果双人复核制度，所有检测结果由检测人员填写、另一名具备资质的人员复核签字后方可报告，阳性结果经实验室负责人审核确认；定期对检测结果开展汇总分析，对假阳性、假阴性结果进行原因追溯，持续改进检测质量。外部质量评价方面，所有HIV检测实验室必须参加国家或省级疾控中心组织的实验室能力验证活动，筛查实验室每年参加至少2次能力验证，确证实验室、核酸检测实验室每年参加至少3次能力验证，能力验证结果不合格的实验室立即暂停检测工作，完成整改并经考核合格后方可恢复检测；国家艾滋病参比实验室定期开展HIV检测试剂临床质量评估，公布不同厂家试剂的敏感性、特异性数据，指导各级实验室选择质量可靠的检测试剂。实验室需建立全流程记录档案，包括样本接收记录、仪器使用维护记录、试剂出入库记录、室内质控记录、外部质评记录、检测原始记录、结果报告记录、生物安全记录等，所有记录真实、准确、完整，留存时间不少于10年，确证阳性病例相关记录长期留存；检测试剂从具备合法资质的供应商采购，留存试剂注册证、生产许可证、经营许可证、批次检验报告，试剂储存严格按照要求温度（2-8℃或-20℃）执行，每日记录冰箱温度，过期、变质试剂一律不得使用；移液器、酶标仪、化学发光仪、PCR仪、生物安全柜、高压灭菌器等关键设备每年至少校准1次，校准合格后方可使用，建立仪器维护档案，记录每次维护、校准、故障维修情况。结果报告与告知需严格遵循规范、保护隐私。报告内容需包含受检者基本信息（姓名、性别、年龄、身份证号）、样本类型、检测方法、检测结果、检测机构名称、检测日期、报告人员、审核人员签字、检测机构公章，报告规范清晰，不得涂改。报告时限需符合要求：常规筛查检测在样本接收后24小时内出具结果；快速检测在30分钟内出具初步结果；确证试验在样本接收后5个工作日内出具结果；核酸检测在样本接收后3个工作日内出具结果；婴幼儿干血斑诊断检测在样本接收后7个工作日内出具结果。结果表述规范：阴性结果直接报告HIV抗体（或抗原抗体、核酸）阴性；筛查有反应但确证阴性的结果，报告HIV抗体阴性，同步标注“本次检测结果阴性，若存在窗口期暴露风险建议随访复查”；确证阳性结果报告HIV-1抗体阳性（或HIV-2抗体阳性、HIV-1核酸阳性）。严格落实隐私保护要求，除法律法规规定的情形外，不得向任何无关单位或个人提供受检者检测信息。结果告知由经过培训的专业人员在独立私密的咨询室内当面告知受检者本人，无关人员不得在场：阴性结果告知时，向受检者解释结果意义，结合检测时间与窗口期的关系，开展艾滋病预防健康宣教，指导采取安全性行为、避免共用针具等预防措施；阳性结果告知时，秉持尊重、不歧视的原则，清晰明确告知确证结果，不得使用歧视性语言，同步告知艾滋病是可防可控的慢性病，尽早启动抗病毒治疗可获得接近健康人群的预期寿命，消除受检者恐慌情绪，引导其及时将感染状态告知配偶/性伴并动员检测，为其提供定点医疗机构抗病毒治疗转介服务，说明后续CD4细胞计数、病毒载量随访检测要求，为有需求的感染者提供心理支持；对检测阳性的未成年人、无民事行为能力人，告知其法定监护人，同步做好心理疏导。确证阳性的感染者需纳入规范随访检测：启动抗病毒治疗前开展基线检测，包括CD4+T淋巴细胞计数、HIV病毒载量、基因型耐药检测、血常规、肝肾功能、梅毒、乙肝、丙肝合并感染检测，为治疗方案制定提供依据；启动抗病毒治疗后第4周、第8周、第12周分别开展病毒载量检测，评估治疗效果，治疗12周病毒载量需下降至<200拷贝/ml，治疗24周病毒载量需低于检测下限（<50拷贝/ml）；治疗达到病毒持续抑制后，每6个月开展一次CD4细胞计数和病毒载量检测，每12个月开展一次肝肾功能、血常规、血脂血糖等代谢相关检测，若治疗过程中出现病毒载量反弹（>1000拷贝/ml），及时开展耐药检测，调整治疗方案；感染HIV的育龄妇女在孕前、孕期、产后按照母婴阻断要求增加检测