致泻大肠埃希式菌的检验.ppt

1、引起腹泻的大肠杆菌及其试验。目标和要求1。学习掌握致泻性大肠杆菌检验的基本原理和方法；2.了解致泻大肠杆菌在动物性食品检验中的意义。b，3，2。生物学特征通常称为大肠杆菌1、革兰氏阴性菌2、杆状、两端圆形、鞭毛周围、无荚膜3、需氧和兼性厌氧4。它能在普通琼脂上生长，b，4，普通大肠杆菌，扫描照片，b，5，3。污染途径、污染6、4、致病性、肠道感染腹泻、食物中毒、肠道发热、肠道感染鼠疫(严重传染病)、尿路感染、肺炎、脑膜炎、伤口化脓、败血症、b、7、生物检验5、微生物检验、样品检验、225毫升营养肉汤、乳糖发酵阳性的发酵管、36118小时、24小时、乳糖发酵或不发酵、3个菌落、5、氧化酶、革兰氏

2、阴性杆菌、TSI、靛蓝底物、pH7.2尿素KCN、赖氨酸、功率、TSI底层、H2S、KCN 不同于下述的各种反应结果，非大肠杆菌、报告(1)检验步骤：样品处理、富集培养、曙红亚甲蓝(EMB)平板分离、培养、生化鉴定、血清学鉴定报告、b、9、1、富集培养，用无菌程序称取25g样品，将其加入到225毫升营养肉汤中，用均质机粉碎1分钟或用无菌沙在研钵中研磨。 取出适量，接种乳糖胆盐培养基测定大肠菌群的MPN数，其余转入500毫升瓶中，361培养6小时。摘下一个环，将其接种到30毫升肠道细菌增菌肉汤中，在42培养18小时。b、10、2、分离培养，将乳糖胆盐发酵管和乳糖发酵阳性的富集液分别接种到麦康凯或

3、怡红美兰琼脂平板上；对于污染严重的样品，可将样品匀浆直接接种到麦康凯或怡红美兰平板上，在361中培养1824小时，观察菌落。不仅要注意乳糖发酵菌落，还要注意乳糖未发酵和缓慢发酵菌落。b，11，EMB中等，黑紫色或紫红色，圆形，边缘规则，表面光滑湿润，常带有金属光泽，有的呈紫黑色，无或稍有金属光泽。菌落特征：b，12，3，生化试验。从鉴定板中直接选择几个菌落，接种三糖铁琼脂或克里金二糖铁琼脂。同时，用蛋白胨水、半固体、pH7.2的尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基分别接种这些培养物。所有上述培养物在36下培养过夜。产酸或不产酸的TSI斜面、产酸的底部、H2S阴性、KCN阴性和尿素阴性的

4、培养物为大肠杆菌。产酸或H2S、KCN和尿素中任何一种阳性的TSI底部培养物都是非大肠杆菌。必要时，进行氧化酶试验或革兰氏染色显微镜检查。b，13，三糖琼脂试验：只能使用葡萄糖的细菌，葡萄糖分解产生酸，可使斜面先变黄，但由于量少，产生的酸与空气接触被氧化，细菌利用培养基中的含氮物质产生碱性产物，使斜面稍后再次变红，底部保持黄色，因为酸在厌氧条件下不被氧化。发酵乳糖的细菌产生大量的酸，使整个培养基变黄。细菌分解含硫氨基酸产生H2S，与硫酸亚铁反应生成硫酸亚铁。大肠杆菌能分解葡萄糖产生酸和气体，其中大多数能分解乳糖而不产生H2S。靛蓝基质试验：细菌分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对二氨基苯甲醛反应生成玫瑰吲哚并变红。脲酶试验：细菌分解尿素产生两分子氨，使培养基的酸碱度上升，指示剂酚红呈红色，证明细菌有脲酶。动态测试：动态细菌会沿穿刺线扩散生长。赖氨酸脱羧试验：细菌从赖氨酸中除去羧基(-COOH)，这导致培养基的酸碱度变成碱性。指示剂溴百里酚蓝呈蓝色，检测结果为阳性。如果细菌不能脱酸，培养基是黄色的。、b、16、4、血清学试验假设试验：选择经生化试验确认为大肠杆菌的琼脂培养物，用致病性大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌、产肠毒素性大肠杆菌和出血性大肠杆菌O157血清的多价O血清进行玻片凝集试验。当它与某种多价血清凝集时，用多价血清中