DNA序列测定.ppt

1、DNA序列测定、终止法-作为测定对象的单链DNA铸造模型引物的4种DDNP (其中1种以32P/35S标识牌)终止剂(DDNP ) DDNP多聚酶Sanger发明：两次荣获诺贝尔奖，分别获得DDDTDDDC的最后片段进行测序过程： 1 .铸造模型和引物杂交2 .引物的延长和合成阻断4个试管中DNA多聚酶dNTP标识牌基质终止剂不同的ddaddgdddt4个试管的全部物，一连串的长度只是1个核苷酸的聚合链的3 .阳离子电泳ACGT序列高压阳离子电泳4 .通过放射性射线自显影得到了直读图像，第十章核酸分子杂交技术，概念：具有互补序列的2条核酸单链在一定的条件下以碱基对的原则形成双链的过程。 探针核

2、酸单孢杂交分子的核酸分子杂交的基本原理核酸分子杂交的基本方法探针的标识牌、核酸分子杂交的基本原理、DNA改性方法的热致变性： 90100酸碱改性药品改性：尿素、甲酰胺、甲醛等特征：黏性系数增加、密度增加、变色效果， 溶解温度(melting temperature) Tm) DNA的反复性和杂交(hybridization) DNA/DNA、DNA/RNA、RNA/RNA等、分子量大， 回复性迟的温度离子力单孢杂交液中的甲酰胺核酸分子的复杂性非特异性单孢杂交反应，把非特异性单孢杂交部位封闭，用鲑鱼精子DNA把分子杂交的基本方法、 南方印迹法北方印迹法斑点印迹杂交原位置杂交韦斯坦共和国印迹法液相

3、互杂交bp 1534 994 695 515 377 237，A B C M，Southern印迹杂交，1975年，英国Southern阳离子电泳DNA/DNA杂交，即DNA，转录到固相载体上南方杂交的主要步骤是制备待测DNA样品，酶催化剂切割测定DNA样品的电泳分离：琼脂糖凝胶电泳凝胶中DNA的改性：碱改性Southern回膜：硝酸纤维素(NC )膜，尼龙膜帽拉力赛切割法，电转移法， 真空转移法探针的调制南方单孢杂交结果的检测，南印迹单孢杂交、检测RNA (主要是mRNA )的方法和南单孢杂交不同的目标核酸： RNA RNA阳离子电泳膜：不需要改性、RNA和DNA改性后直接接触NC膜和尼龙膜

4、的优点：能够简单、迅速、在云同步上检测出大量样品， 原位杂交，标识牌的核酸探针与细胞球和组织中的核酸杂交，称为原位杂交。 在特征成分复杂的组织中可以进行单一细胞球的研究，不需要从组织和细胞球中提取核酸，对含量极低的靶序列灵敏度高可以正确地反映组织细胞的相互关系和功能状态，核酸原位杂交的基本步骤， 细胞球和组织的固定：幻灯片式葛拉斯组织细胞杂交前的预处理用洗衣粉和用蛋白酶去除核酸表面蛋白质的探针的选择和标识牌单孢杂交结果的检测、Western单孢杂交印迹法，检测蛋白质， 将阳离子电泳分离的非标识牌蛋白质转移到固相载体并利用特异抗血清进行蛋白质鉴定和定量的方法的主要步骤：蛋白质样品的SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE )阳离子电泳蛋白质的电转移： NC膜营销对象蛋白质的免疫学检测营销对象蛋白质第一抗体(一次抗体) 在与反应标识牌的第二抗体(酶催化剂标识牌二次抗体)反应中显色反应：促进酶促反应，核酸分子和核酸探针存在于单孢杂交液中的RNA酶保护分析法，核酸酶S1保护分析法，探针的标记，探针的种类cDNA探针，基因组DNA探针，寡核苷酸探针， RNA探针标识牌物质核素标识牌物质(同位素标识牌):32P、35S、3H等非核素标识牌物质(非同位素标识牌