第七章 免疫分析法.ppt

1、第七章免疫分析法、一免疫分析法：基于抗体与抗原或抗原之间高选择性反应的生化分析法。高选择性和低检测限制。分析方法：放射性免疫、荧光免疫、酶联免疫、发光免疫、电化学免疫、克隆酶免疫、免疫抗酸等。抗原的概念，抗原(antigen，Ag):刺激机体免疫系统，引起免疫反应，相应的免疫反应产物(抗体和致敏淋巴细胞)和体内外特异性结合的物质。抗原的两个特征：免疫原性和抗原(免疫反应性)免疫原性(immunogenicity)刺激机体的免疫反应，刺激抗体和产生致敏淋巴细胞的能力。免疫反应性能是相应抗体或致敏淋巴细胞和特异性结合的能力。具有免疫原性和抗原性的所有物质称为完全抗原。只有抗原性，没有免疫原性的物质

2、称为叛逆源。反抗源蛋白完全抗原是给反抗源免疫原性的蛋白质称为载体。1 .抗原的免疫原性，抗原物质必须具备的条件：1，异物性2，一定理化性3，完整性4，宿主的遗传性，1，异物性，异物是指化学结构与宿主的自身成分不同或机体的免疫细胞从不接触的物质。异物性物质中有1，异种物质(如马血清蛋白、各种微生物及其代斯产物)是人体内的异种物质，免疫原性强。2.同种异体物质：ABO血型抗原，人类主要组织相容性抗原。3.自身抗原物质(如自身组织成分结构变化，隐蔽性自身成分暴露)构成自身抗原。第二，特定的理化特性，聚合物胶体物质在所有具有免疫原性的物质中分子量大，一般大于10kDa，在一定范围内分子量越大，免疫原性

3、越强。从特定的化学组成和结构化学组成来看，含有芳香氨基酸(尤其是酪氨酸)的蛋白质具有很强的免疫原性。从结构上看，结构越复杂，免疫原性越强。分子设想和可达性分子设想是指抗原分子中一些特殊化学基团的三维结构，决定抗原分子是否能徐璐与淋巴细胞表面的抗原受体相匹配。可达性是指抗原分子的特殊化学基团与淋巴细胞表面对应的抗原受体徐璐接触的程度。第三，具有完整性、特定物理和化学特性的物质，必须进入身体(包括注射、吸入、伤口混合等)，接触淋巴细胞，才能成为好的抗原。口服后被消化酶分解成氨基酸，破坏其结构，免疫原性丧失。自然界的天然抗原物质与蛋白质、多糖、核蛋白、4、宿主遗传性、抗原的免疫原性也与机体的反应能力

4、有关。同一种动物对同一抗原的免疫应答有明显的差异。这种差异由遗传因素控制，调节免疫反应的基因称为免疫应答基因(immune response，Ir)，2抗原决定簇(基本)载体决定簇和抗原决定簇共同抗原和交叉反应，1，抗原决定簇，1，概念抗原决定簇抗原通过AD与相应淋巴细胞表面的抗原受体结合，激活淋巴细胞，引起免疫反应。2、种类和数量一个抗原分子可以有一个或多个不同的AD。一个AD决定一个奇点。各种AD可以通过相应的淋巴细胞直接识别各种特异性3，部位抗原表面的AD。称为功能性结晶簇。抗原分子内部的AD具有不刺激免疫反应的功能，称为隐蔽结晶簇。仅处理管理因素后，曝光可以成为新的功能决定群集。4，大

5、小抗原与簇的大小对应抗体的抗原结合部位相对应。蛋白质抗原决定簇中5-7个氨基酸残基1个多糖抗原决定簇中5-7个单糖1个核酸反抗原决定簇中6-8个核苷酸5，抗原结合价(antigenic valence)是指可与抗体分子结合的抗原决定簇的总数。抗原是一价天然抗原的分子结构复杂，分子表面有多个晶体簇，形态决定簇。不连接到序列，依赖蛋白质质或多糖空间结构的决定簇，大量暴露在抗原分子表面。顺序决定群集。连接的氨基酸序列形成的晶体簇大部分在抗原分子内部。功能性AD:分子表面，容易识别的隐蔽性AD分子内部B细胞决定簇。分子表面T细胞决定簇。分子内部，AD的分类：3，共同抗原，交叉反应，两个来源不同的抗原，

6、每个主要特异性抗原决定簇，还有徐璐等抗原决定簇。亲缘关系很近的生物之间存在的共同抗原称为一般抗原。无相关性生物之间存在的共同抗原称为李晟抗原。一种共同抗原刺激机体产生的抗体，与含有共同抗原的其他物质发生结合反应，称为交叉反应。3 .抗原的分类，根据抗原的性质分类：整个抗原反抗源根据抗原和机体的亲缘关系分类。异种抗原同种抗原自身抗原李晟抗原是否需要T细胞的辅助分类根据抗原刺激B细胞产生抗体：胸腺依赖性抗原胸腺不依赖性抗原超抗原，抗原粒度和可溶性分类：根据颗粒性抗原和可溶性抗原分类。抗原的来源：外源抗原(天然抗原和人工抗原)、内源性抗原。像TD-AG (Thymus-Dependent Antig

7、en，TD-AG) :等抗原，必须通过抗原呈递细胞和TH细胞的参与，激活B细胞产生抗体。大部分蛋白质抗原属于TD-Ag。胸腺非依赖性抗原(Thymus-Independent Antigen，TI-AG) :等抗原刺激B细胞，产生抗体时不需要T细胞辅助。少数多糖抗原属于TI-Ag。表3 TD-Ag和TI-Ag的比较，超级抗原(Superantigen，SAg):概念：超级抗原是White在1989年提出的，由细菌外毒素和逆转录病毒蛋白组成，可以与大多数T细胞结合激活。这种物质具有刺激T细胞活性的强大能力，因此被称为超抗原。超抗原的种类：外源性超抗原(某些细菌的外毒素)金葡菌肠毒素A，B，C，D

8、，E(葡萄球菌肠毒素，SE)葡萄球菌毒素休克综合征毒素1，TSST-1链状球菌毒素休克综合征毒素1作为完整的蛋白质分子，交给T细胞。与T细胞的相互作用没有MHC限制，超抗原必须通过MHC-类分子传递给T细胞，但T细胞的识别不受MHC限制。TCR链V古濑车站，抗体：抗原进入机体，刺激B细胞的分化和增殖，合成并分泌为肠细胞的一种，其抗原和特异性结合，能产生免疫效果的包含本期的球蛋白。抗体分布在体液(血液、淋巴液、组织液及粘膜的外分泌液)中，主要存在于血清中。，1 .抗体(antibody，Ab)功能性概念是免疫功能的球蛋白，它由抗原刺激产生，可以与刺激它的抗原发生特异性结合。抗体主要存在于血清中，

9、也存在于呼吸机粘膜液、小肠粘膜液、唾液、吴优等其他体液中。2.免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)结构性概念，具有抗体活化或化学结构类似抗体分子的球蛋白。所有抗体都是免疫球蛋白，但不是所有免疫球蛋白都是抗体。第二，抗体的生物活性(1)特异性结合抗原超边缘区表位静电、氢键、反作用力逆影响因素：PH、温度、电解质中和效果，以及毒素和病毒与Ag结合，促进吞噬细胞。1 .接合基础，2。实质意义，(2 (2)调理效果：促进IgG抗原(颗粒)单核、巨噬细胞和中性粒细胞(FcR)吞噬作用；(3) adcc: IgG抗原(目标细胞)Fc R(NK细胞)杀伤目标细胞。(4)胎盘和粘膜，2。生物活性(

10、1)通过胎盘(新生儿抗感染)，(2)激活补体(细胞分解)；(3)调理作用(促进吞噬作用)；(4)介导的ADCC(细胞毒性)。实用意义(1)抗感染；(2)自身抗体自身免疫病；(3)介导的过敏(，类型)；(4)闭合性抗体肿瘤细胞逃逸；(5)亲和层析IgG纯化；(6)免疫学检查。抗体分子的基本结构由四肽链组成。也就是说，由两个分子量相同的链(轻链)和两个分子量较大的链(重链)组成。轻链和重链是通过二硫化键连接，形成称为Ig分子的4肽链分子的单体。单体是构成所有免疫球蛋白分子的基本结构。所有抗体的单体是四条多肽链的对称结构，即两个糖化重链(H)和两个非糖基化轻链(L)。每个重链和轻链分为氨基末端(N端

11、)和羧基末端(C端)。5 .单克隆抗体和基因工程抗体1，多克隆抗体1徐璐其他B细胞克隆产生的这些抗体称为多克隆抗体(PcAb)。2.实际意义(1)感染性疾病预防治疗(特异性差异，可能发生敏感症)(2)临床诊断，2，单克隆抗体(McAb) 1。定义：单个单克隆抗体的类别、子类、类型和亲和力完全相同，具有高度的一致性。2.特征具有高度的均匀性。杂交瘤细胞骨髓瘤细胞的无限增殖；免疫b细胞合成，分泌特定抗体。4.杂交品种技术HAT培养基：茶黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸腺嘧啶(T)。3、基因工程抗体基因工程抗体通过PCR技术获得抗体基因或抗体基因片段，与适当的载体重组，然后引入其他表达系统产生的抗体，广泛用于疾病的林爽诊断、预防和治疗、基础理论研究等。人