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文档简介
1、纸色谱分析法,实验目的,理解1纸色谱分析法的基本原理2纸色谱分析法的基本操作技术,实验原理,纸色谱分析法:滤纸为载体的固定相为纸纤维吸附的水分,流动相为不与水混合的有机溶剂。 将试料点放置在滤纸的原点位置,移动相溶剂利用滤纸的毛细管作用连续沿着滤纸通过原点后,试料中的各成分随着移动相溶剂向前方移动,在移动相和固定相溶剂之间多次连续分配。 色谱分析法:混合物中各成分在流动相与固定相间的分配比不同而分离,结果,分配较大的物质移动速度快,移动距离远的分配较小的物质移动速度慢,移动距离近。 这样,将试料中的各成分分别收集到滤纸的不同位置。 这种分离过程称为展开。 因此,流动相溶剂也被称为展开剂。 分离
2、的物质为像甲基橙那样的有色时,在色谱分析法后在滤纸上可直接看到其色斑。 分离氨基酸等无色物质时,必须用显色剂显色。 无色的氨基酸可以用茚三酮显红色,使用的茚三酮是显色剂。 样品层析展开后,分离的各化合物可以用其Rf值(比移位值)鉴定。 Rf值因各化合物的结构、滤纸的种类、展开剂、温度而异。 然而,在上述条件是恒定的情况下,Rf值对于某些化合物来说是恒定的。 因此,Rf值可以用作定性鉴别的依据。装置:色谱分析法滤纸直尺铅笔毛细管电吹、试剂:展开剂:正丁醇3360冰乙酸:乙醇:水=4336013360133602显色剂:%茚三酮溶液样品:丙氨酸(2% )亮氨酸:试验机和试剂,1,1 注意: a、b
3、两点不要靠近滤纸的边缘,以免产生边缘效应。 准备过程中请不要用手触摸滤纸的正中间。 实验步骤、2、点样本用毛皮拉力赛吸取准备好的样本,毛皮拉力赛在纸面上垂直标记有a、b的地方,分别点2个样本。 一个是丙氨酸样品,另一个是丙氨酸和亮氨酸的混合液。 风干,按照上述方法重复。 注意:点的样品直径在3mm以下,动作轻,在风干一个样品后再订购另一个样品。 实验数据、Rf=、从原点到层析斑点中心的距离、从原点到展开剂前端的距离、Rf测定=? 展开是将点状滤纸垂直挂在带钩状体的吉卜赛人格拉夫气缸盖上,并将滤纸的下端浸入展开剂中。 当展开剂的前端位置达到距滤纸上端约12cm时,慎重取出滤纸,用湿铅笔决定展开剂
4、的前端位置,然后用电吹干。 注意:展开剂不要让滤纸上的起点线被水淹没,起点线下1cm左右起点线必须与展开剂液面平行,滤纸不要接触库托格拉夫油缸的玻璃壁展开时断层油缸关闭。 注意事项、实验中请勿用手触摸滤纸中间。 实验的成功与否取决于点的样品的好坏,要求点的样品直径在3mm以下。 展开剂不得淹没滤纸上的起点线起点线必须与展开剂液面平行滤纸不得接触库吉卜赛人格拉夫气缸的玻璃壁展开时断层气缸关闭。 分别补正丙氨酸和亮氨酸的Rf值,每人单独操作,并将样品色谱分析法滤纸添加在实验报告书上。 1、Rf值的意思是什么? 影响Rf值的主要因素是什么? 2 .纸张色谱分析法时,色谱分析法汽缸为什么要求尽量关闭呢?思考问题,1丙氨酸2混合液、点线
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