造血干细胞移植讲解.ppt

1、造血干细胞移植，造血干细胞移植(SCT)根据干细胞来源分为：(1)自体造血干细胞移植(ASCT)(2)同种原因电子造血干细胞移植(Allo-SCT)(3)异种造血干细胞移植(SCT) 骨髓移植种类可以根据骨髓的不同来源分为骨髓移植：自体骨髓移植(ABMT)同种基因骨髓移植(Allo-BMT)同种基因骨髓移植(SBMT)异基因骨髓移植(SBMT)异基因骨髓移植，(1)自体骨髓移植在该时间内，通过大量的放疗和/或化疗，最大限度地杀死患者体内的肿瘤细胞这种移植不发生排斥和移植物抗宿主(GVHD)等严重并发症，骨髓移植容易移植，但容易复发。ABMT在以下方面应注意：肿瘤不厌倦骨髓，移植前骨盆不暴露在射

2、线下。(阿尔伯特爱因斯坦，Northern Exposure(美国电视电视剧)，因年龄太大而渡边杏。肿瘤必须对放射治疗和化疗敏感。自体骨髓移植有助于保护骨髓不受房室和化疗的影响。放射化疗不能防止对心脏、肝、肾等的毒性损伤。自我骨髓成功的关键是保存造血干细胞活力和基本功能。骨髓采集后放在常温下，骨髓在培养液或保存液内最多不能超过72小时。因此，大量剂量，化疗需要在短时间内完成，有时很难忍受。(威廉莎士比亚，哈姆雷特，化学疗法，化学疗法，化学疗法，化学疗法)-196年器官保存。对于缓解期肿瘤(尤其是血液系统白血病和多发性骨髓瘤)，BMT，采集的骨髓在体外净化，去除残留的肿瘤细胞是很好的选择。否则移

3、植后复发率很高。移植后如果GVHD不出现，则没有出现抗肿瘤效果，复发率很高。(2)同种基因骨髓移植(SBMT)仅限于人类进行单卵双胎肝移植，这种机会很少。由于供求者之间没有免疫障碍，没有免疫抑制处理，拒绝和GVHD也没有出现，临床效果很好。如果用于治疗白血病、多发性骨髓瘤等血液系统恶性肿瘤，移植后复发率高于Allo-BMT可能与移植物抗肿瘤效果不足有关。(3)同种基因骨髓移植(Allo-BMT)是指一人肝主要组织相容性复合体(MHC)一致的同种两个实体间移植。目前正在进行的是基因型相同或基本相同的兄弟姊妹间移植，少数是亲子间移植，有人类白细胞抗原(HLA)表型相同的无关人员间移植，因此这种移植

4、机会很少。GVHD容易并行，但移植后的效果比ABMT和SBMT好。2，选择受赠者： (1)选择受赠者(患者)应注意：(1)年龄控制250岁。(2)选择合适的移植时机。例如，紧急危险组和紧急费用CR1后，低危险组紧急淋浴在CR2后。慢性骨髓性白血病在慢性期早期(发病一年内)，中生障碍性贫血应尽快移植。(3)无急性和慢性感染病变。(4)左室射血指数5.0，强制肺活量60%，一氧化碳分散容量(DLCO)50%。(5)血清肌酐110mol/L(2mg/dl)和总胆红素18mol/L(2mg/dl)。(2)供应商选择与：首选HLA配型相匹配的同胞兄弟姐妹作为提供者，两个或更多的提供者选择患者ABO血型或

5、性别之类的人。也可以选择单一型相同的家族成员作为提供者。通过选择HLA表型相同或相似的无关人员作为提供者，HLA的高多态性导致概率极低。，3，同种基因骨髓移植(Allo-BMT)和同种基因骨髓移植(SBMT) (1)移植阶段：1。应用捐赠者红细胞血型检测及HLA配方，PCR，HLA-A，B，C，2。捐赠者准备：详细询问受赠者的病史和全面检查，检查血骨髓、心脏、肝脏、肾脏、免疫功能等。骨髓检查中还应检查通常分类、颗粒-单聚形成测定(GM-CFU)、染色体分析、血清巨细胞病毒等病毒抗体液滴和花岗氏反应。为了同性供应商，应调查红细胞同工酶及血型(包括亚型)，以移植后是否移植骨髓为依据。另外，从供应骨

6、髓4周前开始，使用自体血液保存法储备了600800毫升自体血液。3 .患者在准备字典处理之前必须仔细检查。痰、尿液、粪便、皮肤、耳朵、鼻子、吞咽细菌、真菌培养。预处理一周前开始服用抗菌药物。注意漱口液、洁癖甘油鼻、外耳道、利福平眼药水双眼等杭州清洁卫生。实验室检查主要包括骨髓、血液、心脏、肺、肝肾功能等。除了捐赠者等项目外，如果有肺功能、X射线胸部、条件者，就要进行内分泌方面的检查。进入层流室的那天，剪指甲，剃掉全身的毛，打扫淋浴，用洗涤剂液药浴2030分钟，戴上无菌服、帽子、口罩，作为无菌单个包裹送到无菌层流室。入住后保持无菌环境，进入无菌食物，热量、蛋白质、维生素的补充就足够了。员工严格进

7、行逆向隔离。4。骨髓移植前字典处理的目的是抑制受体免疫系统，防止移植的捐赠者造血干细胞被受体排除。预先处理各种疾病的方案很多。(1)再生和非肿瘤性疾病：方案1 :单磷酰胺(CTX)静脉点滴。案例2 :环磷酰胺和全身调查(CTX TBI)。(2)白血病：方案1 CTX TBI方案2 :CTX红霉素TBI，骨髓采集手术室内捐赠者骨髓采集。一般应用硬膜外麻醉。骨髓部位最好是骨骼后脊椎。此外，可能在骨骼前的脊椎、胸骨或(或)突部位，儿童需要添加胫骨，采集多点和深度不同的骨髓，每点采集1015毫升骨骼血，总量为1015ml/Kg(6001000ml)。移植骨髓所需的核细胞数量要根据接收者的体重和捐赠者的

8、来源来决定。(1)SBMT需要3.0-5.0107/Kg(2)Allo-BMT将2.0-6.0108/Kg收集到400ml，(2)过滤器通过17、18号注射器进行二次过滤，或一般吸收的骨髓是生理盐水或1640稀释液肝素抗凝剂，每毫升骨髓血中含有1520单位肝素，防止骨髓血凝集。(3)骨髓输血是从目标锁骨下静脉插管输入的。输入前，将含有骨髓血的采血袋或采集瓶倒放在骨髓中30分钟，注射结束后，扔掉悬浮在上层的脂肪液，避免发生脂肪栓塞。输血后，应应用采数时使用的肝素剂量的同等剂量鱼精蛋白(1mg鱼精蛋白和100u肝素)。(2) Allo-BMT骨髓饮食标准(1)饮食结构的直接证据：供体性染色体、标记

9、性染色体、HLA(I，II，III)抗原、红细胞、粒细胞、血小板抗原、(3)骨髓重建的证据：移植后24周，血网织红细胞、粒细胞、淋巴细胞、血小板迅速增加，造血免疫功能逐步重建。(。4，自体骨髓移植(1)自体骨髓采集及保存骨髓采集在手术室内硬膜外麻醉下进行，儿童全身麻醉。穿刺部位可以选择左、右前后的脊背和胸骨，儿童可以选择胫骨上端等。ABMT需要核细胞总数5.030.0109(0.55.0108/kg体重)，骨髓系造血系统(CFUC)平均1.04.0104/kg体重。骨髓液以相同比例与保守液混合，孔径(0 . 2010 . 307毫米)牙齿通过其他不锈钢过滤器从骨髓中滤出脂肪颗粒和碎片。红细胞和

10、骨髓液混合，每升加入肝素15-20U，4保存3648小时后输血。作为骨髓冷冻保护剂，可以应用10包亚砜，将骨髓保存在196液氮内。(b)骨髓净化目前国际上把净化方法分为两个茄子主要类别。也就是说，负的净化也称为语音选择。就是从移植物中去除肿瘤细胞。净化也称为良性选择：移植物中正常造血干细胞分离纯化。临床应用的方法大部分是负净化。但是物理、生物学或其他方法不够理想。(3)自体骨髓移植前字典处理ABMT的字典处理目的是在骨髓中创造一定的空间，为造血干细胞移植和增殖创造场所。进一步去除体内肿瘤细胞。停电的方案CTX中添加了全身调查(TBI)或车次全身调查(FTBI)字典处理。肺需要适当的屏蔽。(4)

11、骨髓回收：前(5)自体骨髓移植后造血功能恢复(移植活表)ABMT后外周血白细胞从无恢复到1.0109/L，平均需要1621天。血小板恢复50109/L平均为1421天，粒细胞恢复为0.510 9/l，平均为21天。外周血造血干细胞移植、1、外周血间移植类型外周血造血干细胞移植可分为：(1)自体外周血干细胞移植(APBSCT)(2)异种外周血造血干细胞移植(Allo-PBSCT)。在受体选择和移植前准备骨髓移植。2、外周血干细胞动员及收集(1)动员在正常生理条件下外周血干细胞数量少，骨髓造血干细胞110，不能满足林爽PBSCT数量的需求。常用动员剂有1人造血干细胞，2抗肿瘤化学疗法药物(1)最大

12、限度地杀死牙齿患者体内的肿瘤细胞等多种。(2)在杀死肿瘤细胞的同时，正常造血细胞也受到了损伤，但是正常造血细胞恢复时间比肿瘤细胞短，因此骨髓抑制解除时和正常造血细胞恢复时，外周血干细胞数量反馈增加了25100倍，产生了造血干细胞动员效果。国内常用的药物是环磷酰胺。西他宁。采集前动员方案的选择取决于恶性肿瘤的类型和患者的具体情况。白血病或恶性淋巴瘤晚期等血液系统恶性肿瘤，在制作自己的PBSCT时，最好选择抗肿瘤化学疗法药物作为动员剂量。Allo-PBSCT提供者必须使用GMCSF或GCSF。(2)选择采集1采集时期：(1)化学疗法动员后23周，外周血白细胞数上升到(1.0-2.0)109/L时。

13、如果仅G-CSF动员，白细胞数上升到(5.5-10.0)时血小板数50109/L牙齿。(2)外周血CD34阳性细胞1(正常0.20.1)。但是采集的时间仍然取决于患者当时的情况。2方法：使用血细胞分离器(如Fenwall CS3000)分离34次或12次COBE SPECTRA，直到收集到造血功能重建所需的细胞数。4，外周血干细胞净化方法有两种：阳性选择和阴性选择。5.为确保外周血干细胞体外PBSCT后成功的造血重建，CD34细胞应大于2.5106/kg。因此，可以利用部分CD34细胞进行体大扩增。6，外周血干细胞冷冻保存通常是经血细胞分离器分离时产生的细胞悬液约50毫升，通过加入等量的20二

14、甲基亚砜(DMSO)和RDMI1640乳浊液，可以将DMSO的最终浓度控制在10。然后分成血液冷冻储藏箱(每袋100毫升)。采用两阶段冷却方法：第一阶段将1/min速度降低到45，第二阶段将510/min降低到8090，程序结束后，最后将样品存储在196液氮内。需要应用的时候，在回送前冻结的外周血干细胞显液立即从4042水浴中放入3min内迅速解冻，然后用低温离心力去除含DMSO的清液。加入等量的RPMI1640维持液稀释，每次注入400600毫升，1小时内失去静脉。7，外周血干细胞移植后活特征外周血干细胞移植后，外周血移植后中性细胞(PMN)上升经常出现两个峰值。第一个峰值是恢复PMN牙齿0

15、.5109/L，移植后平均出现11天，一度呈下降趋势，约34周第二个峰值再次出现，白细胞恢复正常。阿尔伯特爱因斯坦，Northern Exposure(美国电视电视剧)，现在认为第一个PMN棒的出现是外周血中晚期造血祖祖细胞增殖分化的结果。第二个最高点的出现是远视造血干细胞增殖分化的结果。血小板平均上升到50.0109/L，共13天。脐带血造血干细胞移植，20世纪70年代发现脐带血中含有丰富的造血细胞，其数量和质量与骨髓相似。80年代末，用脐带血代替骨髓行造血干细胞移植成功。因此，很多国家相继建立了脐带血银行，我国也计划解决原因电子造血干细胞移植中出现的几个茄子难题。(1)脐带血的采血可以通过

16、脐静脉穿刺收集，(1)胎盘分娩前收集的两种茄子方法。(2)胎盘分娩后收集。提取脐带血时，可以使用肝素、柠檬酸盐、葡萄糖(ACD)和柠檬酸盐、磷酸盐、葡萄糖(CPD)作为抗凝剂。每个胎盘约1.02.010 9/l的核细胞，单个核细胞(MNC)1.0109，CD34细胞1.0107理论上估计体重50公斤以内患者移植的足够量。2、脐血分离和脐血保存的造血细胞可以通过羟乙基淀粉沉淀方法、密度梯度分离法、流式细胞术分离方法和单克隆抗体方法等物理生物学方法分离。冷冻保管的主要步骤集：(1)节目控制追加20DMSO(每分钟5卷，追加混合)；(2)节目控制冷却，冷冻储存。3，脐带血干燥血细胞扩大的原因：单脐带

17、血中造血干细胞数量有限。此外，由于脐带血样品分离、董洁、融化、处理、注射等各个过程中需要损失一些细胞，因此不能满足成人造血细胞移植的要求。扩增过程还消除了移植物中残留的T淋巴细胞和肿瘤细胞的作用，降低了GVHD的发生率。4，脐血造血干细胞移植后移植功能(1)接收人外周血中性细胞绝对值(ANC)5.0109/L恢复所需时间：同胞相关提供者平均为22天，无关提供者平均为24天。(2)血小板数5.0109/L恢复所需的时间：同胞相关提供者平均为48天，无关提供者平均为54天。胎间造血干细胞移植，1958年Uphoff发现了先向致死剂量调查大鼠注射胎间细胞显液，然后促进骨髓造血功能恢复的明显疗效。胎龄在36个月内，胎间含有非常丰富的造血干细胞，与骨髓造血干细胞相比，具有相似的增殖分化和骨髓造血功能重建的能力，牙齿时淋巴细胞量牙齿2较小，大部分是未完全分化的成熟T淋巴细胞。因此移植后GVHD的发生率低，严重性轻。1