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文档简介

1、.8.3 PCR放大未知的DNA片段。获得DNA后，要获得旁边未知的DNA片段，可以通过染色体阶段检查来完成。染色体补查是指从生物基因组或基因组文库的已知序列中逐步获得或检测与旁边的未知序列或已知序列建立线性关系的目的序列的核苷酸构成的方法和过程。(约翰f肯尼迪、美国电视电视剧(Northern Exposure)、染色体)、8.3.1反向PCR和反向PCR(inverse PCR)是在图8-8中所示的已知序列周围放大未知序列的简单方法首先用已知片段内部不存在的限制性内切酶切割模板DNA，然后将酶切的DNA片段连接成环状分子。其中至少有一个环状分子包含已知的整个片段。根据已知段两端的“序列设计

2、引物”(Sequence Design Foundation)，可以放大相邻DNA片段。图8-8反向PCR原理图表，8.3.2利用连接器的PCR。这种方法的第一阶段通常可以将基因组DNA切割成限制内切酶，然后扩展根据PCR所需的另一端的引物提供已知序列设计的引物和连接器序列设计的引物、已知序列翼的未知序列。，(约翰f肯尼迪、美国电视电视剧(Northern Exposure，Northern Exposure，酶)PCR放大引物是根据连接器拉伸端序列设计的引物LP1和LP2，以及根据已知序列设计的引物SP1和SP2。8.3.3列不对称交错PCR，Tail-PCR : Thermal Asymm

3、etric Interlaced PCR使用不同退火温度选择性放大目标段。采用特异性引物和随机引物PCR的PCR一般是特异性引物和简要引物扩增的产物(同特异性引物扩增的产物(II型产物)；相同退化引物扩增的产物(III型产物)。TAIL-PCR的基本原则是使用目标序列旁边的已知序列设计三个嵌套的奇点引物(SP1、SP2、SP3，约为14bp)，并且每个都具有低Tm值的短随机简单性和引物(；脱PCR共分为3次反应。TAIL-PCR是特殊的热循环程序，有利于PCR反应的产物放大，是抑制型非特异性产物。使用长的高退火温度的嵌套特定引物和短的低退火温度的随机减少和引物，退火温度差异很大。通过控制退火温度，控制某种引物优势，可以控制产物的放大。首先进行第五轮高度的严格扩增，这主要是由于异性的引物作用，单向扩增目的单链DNA作用。然后执行低级PCR循环，随机简化，引物操作，以前用于线性放大的DNA产品可以变成双链。此后，在扩增中，高准严度和中准严度周期交错，目的顺序扩增远超过非特异性产物，控制特异性和非特异性产物的生成比例(图8-10)。最后

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