过氧化氢酶活性的测定-紫外线吸收法[优选材料]_第1页
过氧化氢酶活性的测定-紫外线吸收法[优选材料]_第2页
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文档简介

1、植物生理学实验报告 实验题目：过氧化氢酶活性的测定-紫外线吸收法姓名 班级 学号 一、 实验原理和目的H2O2在240 nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性二、 实验器具和步骤材料：海桐叶仪器与用具：紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；试剂:0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0 、pH7.8 0.1mol/L H2O2步骤： 1称取植物材料0.3g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 6

2、ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，以 6000rmin 离心15分钟，倾出上清液。 2.测定：取10ml试管2支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按下表顺序加入试剂。紫外吸收法测定H2O2样品液配置表 管 号 S1 S2(对照) 粗酶液(ml) 0.2 0.2（ph7.8 PBS） pH7.8磷酸(ml) 1.5 1.5 蒸馏水(ml) 1.01.03测定: 25预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测2min，记录数据。 4.按下式计算酶活性。结果计算：

3、 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= A240* Vt/(0.1* t* FW *V1 )Vt粗酶提取液总体积（ml）； V1测定用粗酶液体积（ml）； FW样品鲜重（g）；0.1A240每下降0.1为1个酶活单位（u）； t加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。三、 实验数据和作业过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=(1.546-1.526)*6/(0.1*2*0.3*0.2)=10四、 数据分析过氧化氢酶活性较低，可能是由于叶片采集时间过久。五、 思考题（1） 影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?答：叶片的选择，温度的变化，研磨是否充分，洗涤是否干净。 （2）过氧化氢酶与哪些生化过程有关?答：过氧化氢是一种代谢过程中产生的废物,它能够对机体造成损害.为了避免这种损害,过氧化氢必须被快速地转化为其他无害或毒性较小的物质.过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中,它的主要作用就是催

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