医学ppt课件大全抗体芯片_第1页
医学ppt课件大全抗体芯片_第2页
医学ppt课件大全抗体芯片_第3页
医学ppt课件大全抗体芯片_第4页
医学ppt课件大全抗体芯片_第5页
已阅读5页,还剩13页未读 继续免费阅读

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

05级生物技术班 金 波 l 蛋白组学研究是即基因组学研究后的生命 科学发展的一个大方向之一。蛋白质的结 构和功能最终直接影响着生命活动的变化 ,基因转录水平的研究只能在一定程度上 反映基因表达产物的变化,而真正发挥功 能的蛋白要经过转录后加工、翻译调控以 及翻译后加工等许多步骤和调控才能形成 ,因而对蛋白质的直接研究才能真实的解 释各种生命现象。但是目前研究蛋白质的 手段和方法还没有很大的发展,所以寻找 有效、快捷的蛋白分析技术成为了至关重 要的一个环节。 l 蛋白芯片技术的出现给蛋白组学研究带来 新思路。蛋白组学研究中一个主要的内容 就是要研究在不同生理状态或病理状态下 蛋白水平的量变,微型化,集成化,高通 量化的抗体芯片就是一个非常好的研究工 具,它也是蛋白芯片中发展最快的芯片, 而且在技术上已经日益成熟。这些抗体芯 片有的已经在向临床应用上发展,比如肿 瘤标志物抗体芯片等,还有很多已经用在 研究的各个领域里。 抗体芯片是最近发展起来的一种技术,可 以同时检测几百种蛋白质表达水平;也可 以用来研究蛋白质翻译后加工 (磷酸化水平 改变 )或者研究蛋白质间相互作用。其原理 是:大量不同的抗体按照预定的顺序排列 并固定在固体支持物上且保留其抗原结合 能力,制成抗体芯片膜,芯片膜与蛋白质 样品一起孵育,在温育过程中芯片膜识别 并捕捉抗原,通过化学发光方法对抗原以 及与抗原相连的蛋白质进行研究 l 第一张商品化的抗体芯片是由美国 BD Clontech公司推出的。这是一张用于研究的 抗体芯片,芯片上排列了 378种已知蛋白的 单抗( Ab Microarray 380, 目录号 K1847- 1),这些单抗对应的蛋白都是细胞结构和 功能上十分重要的蛋白,涉及信号传导、 肿瘤、细胞周期调控、细胞结构、细胞凋 亡和神经生物学等广泛的领域。通过这张 芯片,我们在一次实验中就能够比较几百 种蛋白的表达变化。 l Ab Microarray 380上抗体是经过精心挑选 的,这些抗体不仅可以识别人源的蛋白, 对小鼠和大鼠样品同样有效。另外,每个 抗体的结合亲和力都经过了实验测定,从 多种抗体来源的克隆中筛选出反应特异性 好,交叉反应程度小,信号明显的抗体, 并且还要保证信号与抗原浓度有着良好的 线性关系。优化的抗体探针才可以保证反 应的特异和灵敏(可检测 20pg/ml的抗原浓 度)。芯片的检测是用荧光报告分子,常 用的荧光扫描仪都能够完成。 l 芯片上抗体的选择不但根据其特异性,也 根据抗体的结合亲和力,在验证实验中特 异性低、交叉反应高、或者信号强度低的 抗体都被排除,另外所有抗体都经过检验 保证得到的信号与抗原浓度有良好的线性 相关,那些没有良好的线性剂量关系的抗 体都被排除。因此抗体芯片能够检测到样 品中很低的 pg/ml浓度的抗原。 Ab Microarray 380抗体芯片并不要求 特殊的实验操作,只要一般常规的操作就 可以完成以往极为复杂耗时的工作。整个 操作流程包括:从 50200mg 组织或细胞 、体液中进行蛋白质抽提 用 Cy5和 Cy3 两种不同颜色的荧光分子分别标记两个样 品 洗去多余的标记分子 与芯片杂 交孵育 扫描分析结果。整个过程从样 品制备到结果分析只要一天即可完成,你 只要准备好样品、荧光染料、脱盐纯化柱 (处理体液样品时用)和荧光扫描仪,其 他的试剂全部由试剂盒提供。 * 整个分析过程可以在一天内完成 * 适用于包括组织、细胞系、体液在内的多 种生物样品 * 试剂盒提供完整的样品抽提制备、标记, 特别设计的样品制备的过程能保持样品的 完整性和溶解性,保证制备样品具有代表 性和一致性。 *芯片上的抗体包含针对信号传导、癌症、 细胞周期调控、细胞结构、凋亡和神经生 物学等广泛的生物功能的相关蛋白,跨度 大、适用范围广。 * 芯片上的抗体分别经过特异性抗原、细胞 系和组织的检测,灵敏度高 . * 开放性的芯片平台设计,可以用各种型号 DNA芯片荧光扫描仪进行检测。 还有一点值得注意 ,由于抗体抗原结合 的差异、标记差异等原因,根据芯片结果 信号的强弱判断同一样品中两种不同蛋白 的多少是不恰当的。 l A:蛋白质相互作用的检测 当发现一种新的基因时,需要知道这个基 因和它编码的蛋白在细胞中起什么作用, 这时需要确定此基因编码的蛋白在信号通 路中的作用,抗体芯片 AntibodyArraysTM 提供了一种非常经济实惠且操作快速的方 法,使用抗体芯片可快速筛选出此编码蛋 白和信号通路中其它蛋白的相互作用。抗 体芯片筛选方法具有以下优点:实验周期 短;耗费低;假阳性率非常低;操作简便 一般实验室均很容易完成。 l B:蛋白质磷酸化的检测 某制药公司研究人员,她领导的小组已经 发现了某一化学物质作用的靶点,但是她 需要了解这些化学物质是否对其它蛋白有 影响,这样她才可以知道药物的选择性和 毒性如何。她选择使用 AntibodyArraysTM 来进行评估,比较了药物处理和没有处理 的细胞蛋白质磷酸化水平的改变,由此对 该化学药物的专一性有了进一步了解。 使用 AntibodyArraysTM研究者可以快速得 到关于哪些蛋白

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论