医学课件兴奋剂的分析研究报告

兴奋剂的分析研究 报告 兴奋剂的有关概述 兴奋剂的定义 兴奋剂的历史和现状 兴奋剂的分类 检测基质的多样化趋势 尿液 血液 发样 体液 （汗液、唾液） 兴奋剂检测的发展 兴奋剂检测生物芯片 我国已处于领先技术 基因兴奋剂 2008 的新挑战 最新消息，我国已自主研制成功兴奋 剂检测生物芯片， 这是一种蛋白芯片 ，可同时对 9种刺激剂和麻醉剂进行检 测。经过对 1300多例运动员的实际尿 样检测表明，该蛋白芯片与经典方法 的符合率达到 100%。 北京博奥生物芯片公司将在 2005年进 一步丰富兴奋剂检测生物芯片的检测 指标， 2006年在世青赛上初步投入使 用并积累经验和数据， 2007年完成国 产化兴奋剂检测生物芯片装置的最终 定型和批量生产，以期在 2008年北京 奥运会大范围兴奋剂筛查中应用。 * 兴奋剂的英文为 Dope，一说原为南非黑人 方言中的一种有强壮功能的酒，一说起源 与荷兰语 Dop 。 兴奋剂药物并不都具有兴奋性（如利尿剂 ），甚至有的还具有抑制性（如 b-阻断剂 ），国际上对禁用药物仍习惯沿用兴奋剂 的称谓。因此，如今通常所说的兴奋剂不 再是单指那些起兴奋作用的药物，而实际 上是对禁用药物的统称 。 有的可抑制和减轻疼痛， 从而增强运动员的自信心 ；有的可以增加心率、肌 肉血流量、肺通气量，从 而提高循环系统和呼吸系 统的机能，加强能量代谢 ；有的可以增加肌肉块头 和力量，有助于增加训练 强度和时间，从而提高速 度和耐力；等等 。 * 1886年，一位自行车运动员因为过量 使用兴奋剂而致死，成为第一例史上 记录。 20世纪 50年代，兴奋剂在体坛上已被 广泛使用，尤其是苯丙胺，曾经风靡 一时。 据有关方面估计，目前世界各国一流 选手中有 6%的人使用兴奋剂。 * 外源性： 是人体自身不能分泌，由外部引入的 物质，如刺激剂、麻醉剂、合成蛋白 剂、 利尿剂 、 b-阻断剂。尿样中一 旦 查出就可判断为阳性。 分析方法相对内源性药物简易很多。 内源性： 自身能分泌，体内本身含有的物质。 主要有 肽类激素 和 甾体类固醇激素 。 由于要区自身分泌与人为引入，所以 分析难度较大。 # 同位素比质谱的应用 原理：碳元素在自然界中存在的规律 ，同一来源化合物中碳的两种同位素 13C和 12C的丰度比是相同的。商品化 的类固醇激素来源于大豆等植物的提 取，其 13C/12C比值较低，而人体内的 该比值比较高。 程序：先利用 气象色谱 将目标化合物 分离，经 燃烧炉 氧化成 CO2，并进入 质谱 分析仪，记录 m/z=44， 45， 46的 强度，分别对应于 12C16O16O， 12C16O16O+13C16O16O， 13C16O16O的 丰度，校正后可计算出 13C/12C值。 仪器： GC/C/IRMS gas chromatography / combustion / isotope-ratio mass spectrometry 分析方法改进后 更加公正 我过某著名乒乓球运动员，曾因为脑 垂体腺体瘤导致尿样中表睾酮异常增 高而被怀疑使用了兴奋剂，后来正是 因为同位素比质谱的分析方法，为其 洗去了冤屈。 * 尿液 尿样检测是兴奋剂检测的理想样本。其优 点在于：取样方便；对人无损害；尿液中 的药物浓度高于血液中的药物浓度；尿液 中的其他干扰少。 尿样进入实验室，首先进行尿样 ph和尿比 重测定，然后按药物的化学特征分为四组 进行筛选分析，主要是化学提取和仪器分 析两步，最后由计算机打出检测报告。 * 血样 血样检测的目的主要是补充尿样分析方法 的 不足，目前尚处于研究探索阶段，目前 仅用于血液回输，红细胞生成素，生长激 素，绒毛膜促性腺激素，睾酮等的测量。 * 发样 在法医，毒性分析中已有较长历史，但在 兴奋剂研究中是才兴起研究方向。 有采样容易，无损伤，不易作弊的特点， 备受关注。 样品处理 ：有机溶液 -去离子水 -有机溶液洗 涤；剪碎或磨成粉末，以增加提取时的表 面积；药物与头发中的角蛋白结合牢固， 需预先消化。 Fabien Bevalot等将 50mg的发样用甲醇处 理并用固相柱处理以后， HPLC-ESI-MS检 测，灵敏度达 110-7。 优势 ： 皮质类固醇在体内消除很快，如果 赛前停药，尿液分析就检测不到，而发样分 析仍可检出。 # 体液 虽然药物含量浓度低，但可提供有益的互 补信息，仍不失为一种值得研究的基质。 * 利尿剂，顾名思义，此类药物有稀释尿液 的功能。主要用于掩盖或 “清洗 ”体内其它违 禁药品的存在，以逃避兴奋剂检查。 高效液相色谱法 （ HPLC） * 基因兴奋剂将挑战 “北京 2008”： 随着科学和医疗的发展，高科技手段将进 一步挑战 WADA一向引以为傲的口号 “玩真 的（ playtrue） ”，目前最先进且已经迫在 眉睫的当属基因兴奋剂（ genedoping）。 与经典液相色谱法的主要区别 流动相改为高压输送、采用高效固定相、 具有在线检测器及仪器化等。该法具有分 离效能高、分析速度快及应用范围广等特 点。根据这些特点，人们又称该法为高速 液相色谱法、高压液相色谱法、高分辨液 相色谱法等。这些名称都是在发展过程中 人们根据该法的某些特点而命名，高效液 相色谱法是当前色谱工作者认同的名称。 高效液相色谱法与气相色谱法比较 高效液相色谱法分析对象广，它只要求样 品能制成溶液，而不需要气化，因此不受 样品