抗生素对双歧杆菌影响的观察

抗生素对双歧杆菌影响的观察 提要本文观察了双歧杆菌对临床常用杭生素的敏感性及其 L 型形成和抗生素 对动物体内双歧杆菌的影响，发现双妓杆菌对多种杭生素耐药或易形成 L 型。动 物口服双歧杆菌同时给杭生素,6 天后其龚便中仍有大量双歧杆菌或双歧杆菌 L 型存在，表明双歧杆菌可通过多种机制逃避杭生素的作用，在机体肠道内长期存 在。 关键词双歧杆菌杭生素细菌 L 型 双歧杆菌是人类肠道中的正常菌群，其能合成人体必需的某些营养物质，调 整肠道菌群平衡，拮抗多种肠道病原菌进入肠道定植，具有抗感染，抗癌以及益 寿延年等作用，而成为微生态制剂的主要菌群， 。通常认为服用微生态制剂同 时使用抗生素，将影响双歧杆菌在机体肠道内的生存。但在服用微生态制剂的同 时若发生其他感染则导致治疗困难或担心使用抗生素后双歧杆菌不能在机体内继 续生存。我们通过体外和体内实验观察了临床常用的某些抗生素对双歧杆菌的影 响， 现报道如下: 1. 3 药敏纸片:杭州微生物研究所 提供。 1. 4 实验动物:小白鼠，昆明种，50 1 材料与方法 1. 1 菌种 青春双歧杆菌，贵阳科福药业中心 提供。接种 PG 液z 37 “C 振摇培养 24 小 时备用。 1. 2 培养基 1.2.1 双歧杆菌培养基:10%脱纤 维羊血布氏肉汤琼脂平板。 1. 2. 2 L 型平板:含 NaCI 浓度分 别为 2%或 5%的 LEMo 只雌雄各半，体重 25-30 克，贵阳医学 院实验动物中心提洪。 1. a 诱导剂:青霉素 G5 万/ml ,梭 节青霉素 30mg; ml，按文献 cap 制成抗生 素纸片。 1. 6 抗生素:麦迪.霉素、四环素，经 氨节青霉素，乙酞螺旋霉素口服剂。 1. 7 实验方法 1.7.1 药敏试验 取双歧杆菌菌液 0. lml 接种双歧杆 菌培养基平板并徐布均匀，放药敏纸片 后置厌氧罐(化学产气法)内 37培养 24 小时观察结果。 1.7.2 细菌 L 型的诱导和药敏试 验 取双歧杆菌菌液 0. lml 分别接种 2%或 50 0NaCI LEM 平板，涂布均匀，放 置诱导剂纸片，置:烛缸内 37培养。每 日显微镜低倍镜下观察 L 型菌落。L 型 生长后，取 L 型菌落(原代)作琼脂扩散 法药物敏感试验。 中国微生态学杂志 1996 年第 8 卷第 1 期 1.7.3 动物实验 50 只动物随机分为 5 组，分别标记 麦迪霉素、乙酸螺旋霉素、四环素、轻氨 节青霉素和对照组。按文献 c稀释抗生 素并喂饲动物，每日上午服双歧杆菌菌 液 0. 5m1/只，下午服抗生素。对照组只 给菌液，不给抗生素。 1.7.4 粪便双歧杆菌的检查 给药前和给药后第 4 天、第 6 天分 别取各组小鼠粪便，用灭菌生理盐水稀 释粪便至 10-5 (mg/ml)，取 0. lml 接种 双歧杆菌培养基，置厌氧罐内 37培养 48 小时观察结果。 1.7.5 粪便 L 型的检查 取用药第 6 天的轻氨节青霉素组和 对照组小鼠粪便稀释至，j 10-5(mg/ml), 取 0. lmi 接种 5 jIvacl LEM 平板，涂布 均匀，置烛缸内 37 C 培养。若有 L 型生 长，取 L 型菌落接种 LEM 传代返祖后 根据形态、培养及糖发酵特征鉴定菌种。 2 结果 2. 1 双歧杆菌药物敏感性 培养 24 小时测量各药敏纸片周围 抑菌圈直径，可见双歧杆菌对氯霉素、四 环素、乙酸螺旋霉素、洁霉素、麦迪霉素、 经氨节青霉素、红霉素敏感，对氨节青霉 素、庆大霉素、先锋霉素 5、痢特灵、多粘 菌素 B、丁胺卡那霉素、青霉素 G、新霉 素、环丙沙星、链霉素、复方新诺明、苯哇 青霉素耐药。 2. 2 双歧杆菌 L 型形成及药物敏 感性 培养 48 小时后，不同 N aCl 浓度的 LEM 平板上可见两种抗生素纸片周围 抑菌圈内密布典型的油煎蛋样菌落。L 型原代对庆大霉素、四环素、洁霉素、麦 迪霉素、氟嗦酸、复方新诺明敏感，对多 粘菌素 B、链霉素、青霉素 G 耐药。传 5 代的双歧杆菌 L 型对庆大霉素、四环 素、洁霉素、多粘菌素 B、麦迪霉素、氟嗓 酸、复方新诺明、链霉素敏感，对青霉素 G 耐药。 2. 3 动物粪便中双歧杆菌含量 用药前各组动物粪便中未检出双歧 杆菌。服药后不同时间各组动物粪便中 双歧杆菌平均菌落数分别为，麦迪霉素: 第 4 天 15 X 10个/g，第 6 天 9X10，个/ 8，无显著差异(P0. 05);四环素:第 4 天 12 X 10，个/g，第 6 天 9X10个旭， 无显著差异(0. 05);经氨节青霉素: 第 4 天 11 X 10个/g，第 6 天 6X10，个/ g，有显著差异 P 0. 05);对照组:第 4 天 13X10个/g，第 6 天 2=! X 10个/g， 无显著差异(0. 05)。用药 6 天后轻 氨节青霉素组和麦迪霉素组细菌数较对 照组细菌数明显减少，具有显著差异(P 0. 05)。 2. 4 粪便中细菌 L 型 对照组未见 L 型菌落。轻氨节青霉 素组可见大量颗粒样和油煎蛋样 L 型 菌落，返祖菌鉴定为双歧杆菌。 3 讨论 微生态制剂是以活的有益微生物及 其代谢产物为主要成分，故认为不宜与 抗生素同时使用，否则将杀灭微生态制 剂中的有益微生物而难以获得疗效。但 由于细菌具有变异性，其可通过发生耐 药性变异或细胞壁缺陷变异等机制逃避 抗生素的杀伤作用。本文结果表明，双歧 杆菌对多种抗生素形成了耐药性，以致 中国微生态学杂志 19ss 年第 a 卷第 1 期 这些抗生素不能影响双歧杆菌的生存。 虽然用双歧杆菌敏感的抗生素给动物喂 饲，亦不能影响动物体内双歧杆菌的生 存。可能同口服的双歧杆菌数量较大，药 物进入机体后被稀释以致不能有效杀灭 双歧杆菌有关。 细菌 L 型是细菌受日内酞胺抗生素 作用后最常见的变异生存形式。L 型的 形成使细菌能逃避某些抗生素的杀伤而 得以保留和菌种延续。受抗生素作用后 双歧杆菌形成了 L 型而对日内酞胺抗生 素不敏感，因此能够在动物肠道内生存。 这些 L 型在常规细菌学检查中通常漏 诊，成为轻氨节青霉素组细菌型检查数 量减少的原因。当机体内抗生素浓度降 低后，双歧杆菌 L 型重新合成细胞壁而 返祖，其经过一段时间的生长繁殖，可 重新建立正常优势菌群。因此我们认为. 临床常用剂量的抗生素短时期使用不会 对肠道内双歧杆菌的生存产生显著的影 响，双歧杆菌可通过多种机制逃避抗生 素的作用而在体内长期存在。在检查肠 道菌群时，还应当考虑到细菌 L 型的存 在形式。 参考文献 幻麦光大等。青春双歧杆菌及其酸乳剂型研 制。中国微生学杂志，1993;5(3):9-12. 2王和，等。用非高渗透压培养基从慢性胆 囊炎胆囊分离细菌 L 型。中华医学检验杂 志,1994;17(5):263-265. r3王和。L 型鸡蛋培养基的制备和细菌 L 型 的诱导。贵阳医学院学报，1988;13(i):q2_ 4J- C4)药理学实验编写组。药理学实验。第土版， 北京:人民卫生出版社,19a5:z4o, (收稿日期 95-9-13) OBSERVATION ON THE EFFECT OF ANTIBIOTICS UPON BIFOBACTERIi Chere Gheeghtmy，et al. Deartraeul of microbiology， Gri. 3-asag Medical College. Ghi 3a.g 550001 Abstract It was found that the Bifidobacteria adolescentis was resistant to many kinds of antibiotics and would be induced into L-forms enormously when exposed to some an- tibiotics in vivo. Both a great deal of Bifidobacterium and the L- forms derived from the bacterium could be isolated untill six days after the animals being given Bifidobacterium and antibiotics simultaneously.