实验室生物安全与防护课件

单击此处编辑母版标 题样式 单击此处编辑母版副标题样式 *1 实验室生物安全防护 检验科 聂庆东 生物危险 二 级 警告/WARNING 生物安全是一个重要的国际性问题 1. 美国于1900年至1976年共有3921例实验室感染。 2. 基因重组工作的需要。 3. “911”后生物恐怖事件的影响。 4. 2003年“SARS”疫情相关实验室感染事件的影响。 国际生物安全相关法律法规与技术指南 1.WHO的实验室生物安全手册 1988年第一版，1993第二版，2003年4月第三版征求意见稿。 2.欧洲经济共同体（EEC） EEC委员会指令93/88对微生物危险等级的分类。 3.美国的微生物和生物医学实验室生物安全手册 1983年第一版，1993年第三版，1999年第四版。 4.美国的生物危害主要防护：生物安全柜的选择、安装和使用 2000年第二版。 5.加拿大的实验室生物安全指南 1990年第一版，1996年第二版，2003年第三版(征求意见稿)。 6.英国的根据危害和防护分类的生物因子的分类(危险病原体咨询委员 会, ACDP) 1995年，第四版。 中国生物安全相关法律法规与技术指南 1.微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS233-2002） 2002年12月国家卫生部颁布。 2.实验室生物安全通用要求（ GB19489-2004） 2004年4月国家质量监督检验检疫总局和标准化管理委员会联合颁布 。 3.生物安全实验室建设技术规范 （GB50346-2004） 2004年8月 建设部与国家质量监督检验检疫总局联合颁布。 4.中华人民共和国传染病防治法 2004年8月第十届全国人民代表大会常务委员会第十一次会议修订通 过。 5.病原微生物实验室生物安全管理条例 2004年11月12日国务院正式颁布。 6.人间传染的病原微生物名录 2006年1月11日国家卫生部制定。 我国实验室生物安全技术的现状和需求 1.实验室生物安全技术和标准发展落后于欧美等发达国家。 2.主要的安全防护设备依赖于从美国和欧洲等国家进口， 如生物安全柜、正压服、风量控制阀等。 3.实验室生物安全的需求：从2001年以后，我国对生物安全 实验室需求逐年增加，特别是SARS和高致病性禽流感暴 发、流行后，国家对实验室生物安全技术更加重视。 生物危害的含义 1.广义上的生物危害： 指有害或有潜在危害的生物因子对人、环境、生态和社会 造成的危害或潜在危害。 2.狭义生物危害： 指在微生物和生物医学实验室研究过程中对工作人员造成 的危害和对环境造成的污染。 定义 n气溶胶（aerosol）：悬浮于气体介质中粒径为 0.0011000um的固体、液体微小粒子形成的胶溶 状态分散体系。 n生物安全柜（biosafety cabinet）： 处理危险性微生物时所用的箱形 空气净化安全装置。 生物安全柜的分级 I级生物安全柜：（class I biosafety cabinet） 保护工作人员和环境。 II级生物安全柜：（class II biosafety cabinet） 保护工作人员、环境和试样（产品）。 III级生物安全柜：（class biosafety cabinet） 采用手套箱更严格地保护工作人员、环境和试样（产 品）。 病原微生物实验室的安全防护 级生物安全柜（class biosafety cabinet） n至少装置一个高效过滤器对排气进行净化 ，工作时柜的正面玻璃推拉窗打开一半， 上部为观察窗，下部为操作窗，外部空气 由操作窗吸进，而不能由操作窗口逸出。 工作状态时保证工作人员不受侵害，但不 保证实验对象不受污染。 级生物安全柜（class biosafety cabinet） n至少装置一个高效空气过滤器对排气进行 净化，工作空间为经高效空气过滤器净化 的无涡流单向流空气。工作时柜正面推拉 窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作 窗。外部空气由操作窗吸进，而不能由操 作窗口逸出。工作状态时既保证工作人员 不受侵害，也保证实验对象不受污染。 级生物安全柜（class biosafety cabinet） n至少装置一个高效空气过滤器对排气进行 净化，工作空间为经高效空气过滤器净化 的无涡流单向流空气。正面上部为观察窗 ，下部为手套式操作口。箱内对外界保持 负压，可确保人体与柜内物品完全隔绝。 生物安全防护的基本原则 生物安全防护的内容：安全设备、个人防护装置和措施 （一级保护）；实验室特殊设备和建设要求（二级防护 ）；严格的管理制度和标准操作程序；设专门的生物安 全负责人。 安全设备和个体防护： 生物安全柜：最重要的安全设备，不能用超净台替代。 离心机：在生物安全柜内使用，否则需用安全密闭的专 用的离心杯。 配备必要的个体防护用品。 实验室管理：在实验室设清洁区，半污染区和污染区； 非实验室的物品、饮食、人员的进入限制。 生物安全防护的基本原则 n人员资格和培训： 上岗培训；安全教育；遵守实验室的所有 制度、规定和操作规程；三级和四级实验 室的工作人员在开始工作前必须留本底血 清进行有关检测，以后定期复检。如有疫 苗必须进行免疫注射。 生物安全防护的基本原则 q实验室特殊管理： 针对可能的危险因素，设计保证安全的工作程序 。 事前进行有效的培训和模拟训练。 对于意外事故要能够提供包括紧急救助或专业性 q保健治疗的措施，足以应付紧急情况。 实验室事故处理： 应填写正式的事故登记表，并按规定报告给国家 相应级别的卫生管理部门。 生物安全防护的基本原则 n微生物危害评估：当建设使用传染性或有 潜在传染性的实验室前，必须进行微生物 危害评估。确定对象微生物应在哪一级的 生物安全防护实验室中进行操作。制定相 应的操作规程、实验室管理制度和紧急事 故处理办法，必须形成书面文件并严格遵 守执行。 实验室的分类、分级及适用范围 n分类：一般生物安全防护实验室（不使 用脊椎动物和昆虫）。实验脊椎动物安 全防护实验室。 n分级：每类生物安全防护实验室根据所处 理的微生物及其毒素的危害程度各分为四 级。各级实验室的生物安全防护要求依次 为：一级最低，四级最高。 I级生物安全实验室： 英文缩写为SL-1 , 俄文缩写为1，为基础实验室。 级生物安全实验室： 英文缩写为SL-, 俄文缩写为，为安全实验室。 级生物安全实验室： 英文缩写为SL-, 俄文缩写为，为高度安全实验室。 级生物安全实验室： 英文缩写为SL-, 俄文缩写为，为最（高度）安全实 验室。 防护实验室-生物安全水平 （ BiosafetyLevel ） 一级生物安全防护实验室 n实验室结构和设施、安全操作规程、安全 设备适用于对健康成年人已知无致病作用 的微生物，如用于教学的普通微生物实验 室等。 二级生物安全防护实验室 n实验室结构和设施、安全操作规程、安全 设备使用于对人或环境中具有中等潜在危 害的微生物。 三级生物安全防护实验室 n实验室的结构和设施、安全操作规程、安 全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染 上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及 其毒素，通常已有预防传染的疫苗。 n艾滋病病毒的研究（血清学实验除外）应 在三级生物安全防护实验室中进行。 四级生物安全防护实验室 n实验室的结构和设施、安全操作规程、安 全设备适用于对人体有高度的危险性，通 过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前 尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物 及其毒素。与上述情况类似的不明微生物 ，也必须在四级生物安全防护实验室中进 行。待有充分数据后再决定此种微生物或 毒素应在四级还是在较低级别的实验室中 处理。 一般生物安全防护 实验室的基本要求 一级生物安全防护实验室 v安全设备和个体维护 一般无须使用生物安全柜等专用安全设备。 工作人员在实验室应穿工作服，戴防护眼镜。 工作人员手上有皮肤破损或皮疹时应戴手套。 v实验室设计和建造的特殊要求 每个实验室应设洗手池，易设置在靠近出口处。 实验室维护结构内表面易于清洁。地面应防滑、无缝隙，不得铺地毯 。 实验台表面应不透水，耐腐蚀、耐热。 实验室中的家具应牢固。为易于清洁，各种家具和设备之间应保持生 物废弃物容器的台（架）。 实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。 一级生物安全防护水平（BSL1） 1.BSL1适合于已知其特征的、在健康成人中不引起疾病的、 对实验室工作人员和环境危害性最小的生物因子的工作。 2.枯草杆菌、格氏阿米巴原虫和感染性犬肝炎病毒是符合这 些标准微生物的代表。 3.BSL1不需要特殊的一级和二级屏障、除需要洗手池外， 依靠标准的微生物操作即可获得基本的防护水平。 防护实验室-生物安全水平 （ BiosafetyLevel ） 1.防护服 实验室外套 手套 BSL1：安全设备 (一级屏障) BSL1：安全设备 (一级屏障) 2.个人防护设备 可能也需要 面部防护 眼睛防护 BSL1：实验室设施 (二级屏障) 二级生物安全防护实验室 n实验室设计和建造的特殊要求 生物安全防护二级实验室必须满足本一级 实验室各款的要求。 应设置实施各种消毒方法的设施，如高压灭菌锅、化学消 毒装置等对废弃物进行处理。 应设置洗眼装置。 实验室门宜带锁、可自动关闭。 实验室出口应有发光指示标志。 实验室宜有不少于每小时34次的通风换气次数。 二级生物安全防护水平（BSL2） 1.BSL2适合于从事对人和环境有中度危害（危险度2级）的生物因子 的工作。 2.麻疹病毒、沙门菌、弓形体和乙型肝炎病毒是符合这些标准微生物的代表。 防护实验室-生物安全水平 （ BiosafetyLevel ） BSL2：安全设备 (一级屏障) 1.在BSL-1的基础上增加 生物安全柜（II级） 适用从事感染性生物 因子工作，涉及气溶胶和 飞溅、大容量培养等情况 时使用。 BSL2：安全设备 (一级屏障) 2.在BSL-1 设施 的基础上增加 高压灭菌锅 眼睛清洗站 BSL2：实验室设施 (二级屏障) 一级生物安全防护实验室安全常规操作要点 禁止非工作人员未经实验室负责人批准即进入实验室。 接触微生物或含微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手 。 禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆和储存食物。 以移液器吸取液体，禁止口吸。 制定尖锐器具的安全操作规程。 按照实验室安全操作规程，降低溅出和气溶胶的产生。 每天至少消毒一次工作台，活性物质溅出后要随时消毒。 所有培养物、废弃物在运出实验室之前必须进行灭活，如高压灭活。 需运出实验室的物品必须放在专用密闭容器内。 制定有效的防鼠防虫措施。 二级生物安全防护实验室安全常规操作要点 n实验室入口处须贴上生物安全标志，内部 有明显的生物危险信息，包括使用传染性 材料，负责人姓名和电话号码。 n其它同一级生物安全防护实验室。 二级生物安全防护实验室安全特殊操作要点 进行感染性实验时，禁止他人进入实验室或必须经实验室 负责人同意后方可进入。免疫耐受或正在使用免疫抑制剂 的工作人员必须经实验室负责人同意方可在实验室或动物 房内工作。 实验室入口处须贴上生物安全危险标志，注明危险因子、 生物安全级别、需要的免疫、负责人姓名和电话、进入实 验室的特殊要求及离开实验室的程序。 工作人员应接受必要的免疫接种和检测（如乙型肝炎疫苗 、卡介苗等）。 必要时收集从事危险工作人员的基本血清留底，并根据需 要定期收集血清样本，应有检测报告，如有问题及时处理 。 二级生物安全防护实验室安全特殊操作要点 将生物安全程序纳入标准规范或生物安全手册，由实验室 负责人专门保管，工作人员在进入实验室之前要阅读规范 并按照规范要求操作。 工作人员要接受有关潜在危险知识的培训，掌握预防暴露 以及暴露后的处理程序。每年要接受一次最新的培训。 严格遵守下列规定，防止利器损伤： 除特殊情况（肠道外注射和静脉切开等）外，禁止在实验 室使用针、注射器及其它利器。尽可能使用塑料器材代替 玻璃器材。 尽可能应用一次性注射器；非一次性利器必须放入厚壁容 器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒。 二级生物安全防护实验室安全特殊操作要点 尽可能使用无针注射器和其它安全装置。 禁止用手处理破碎的玻璃器具。装有污染针、利器及破碎 玻璃的容器在丢弃之前必须消毒。 培养基、组织、体液及其它具有潜在危险性的废弃物须放 在防漏的容器中储存、运输及消毒灭菌。 实验室设备在运出修理或维护前必须进行消毒。 人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并 记录事故经过和处理方案。 禁止将无关的动物带入实验室。 防护实验室-生物安全水平 （ BiosafetyLevel ） 三级生物安全防护水平（BSL3） 1.BSL3适合于处理危险度3级微生物和大容量或高浓度的、具有高度气溶胶 扩散危险的危险度2级微生物的工作。 2.结合分枝杆菌、牛分枝杆菌、 鼠疫杆菌、 炭疽杆菌、 Q热病原体、 HIV（血清学检测除外）等是符合这些标准微生物的代表。 BSL3：安全设备 (一级屏障) 1.在BSL-1 and 2安全 设备的基