人感染h7n9禽流感标本采集要求课件

人感染人感染H7N9H7N9禽流感禽流感 标本采集要求标本采集要求 吕昌武吕昌武 牡丹江市疾控中心微生物检验科牡丹江市疾控中心微生物检验科 国家流感监测网络实验室国家流感监测网络实验室 提提 纲（七个方面）纲（七个方面） 人感染H7N9禽流感病毒的病原学 人感染H7N9禽流感监测病例定义 标本采集种类 标本采集主要器材和试剂 标本采集方法 标本的保存、运送 标本采集要求 人感染人感染H7N9H7N9禽流感病毒的病原学禽流感病毒的病原学 禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属。禽甲 型流感病毒颗粒呈多形性，其中球形直径80 120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。 依据其外膜血凝素（H）和神经氨酸酶（N）蛋白 抗原性不同，目前可分为16个H亚型（H1H16） 和9个N亚型（N1N9）。 人感染人感染H7N9H7N9禽流感病毒的病原学禽流感病毒的病原学 禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马 、水貂和海洋哺乳动物。可感染人的禽流感病毒亚 型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3。 此次报道的为全球首次发现人感染H7N9禽流感病 毒。该病毒为H7N9和H9N2重配的新型病毒，其内 部基因来自于H9N2禽流感病毒，基因序列分析表 明为禽源病毒。 人感染人感染H7N9H7N9禽流感监测病例定义禽流感监测病例定义 同时具备以下4项条件 1、发热(腋下体温38)； 2、具有肺炎的影像学特征； 3、发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计 数减少； 4、不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎 。 除第4条不同于不明原因肺炎病例定义，以上三条均相符。不 明原因肺炎第4 条为：经规范抗菌药物治疗35天，病情无明 显改善或呈进行性加重。 标本采集种类标本采集种类 医疗机构应当及时采集病例相关临床样本。 1、上呼吸道标本（包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱 液和鼻洗液）； 2、下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本） 3、血清标本（发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复期血 清）； 4、尸检标本（如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及 时进行尸体解剖，采集肺组织、气管、支气管等组织标本） ； 5、应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道 标本）。”发烧72小时标本” 标本采集主要器材和试剂标本采集主要器材和试剂 1、拭子：WHO及美国CDC规定，鼻烟拭 子采集只能用塑料杆的涤纶或人造棉拭子 （如常用的聚酯纤维拭子），不能用藻酸 钙拭子或木杆拭子，因可能使某些病毒失 活或抑制PCR；脱脂棉含有荧光物质，影 响实时应荧光定量PCR结果。 标本采集主要器材和试剂标本采集主要器材和试剂 2、压舌板 3、3ml Hanks液螺口采样管 4、封口袋 5、冷藏运输包 6、油性标记笔或标签纸 7、样品登记表 8、真空采血管 9、个人防护装备 标本采集方法标本采集方法 鼻咽拭子采样是流感病原学监测中的一个重要环节, 操作简单,但在流感监测工作中却极为重要。标本采集的 时间、位置及质量对能否分离到病毒或提取到有活性的 RNA至关重要，而标本保存与运输不当，也会影响病毒的 分离。为提高病毒的分离率，在用于病毒分离样品的采集 数量、类型和地点方面，实验室技术人员应与流行病学人 员达成共识。一般来说，用于病毒分离的样品应与血样同 时采集，以便进行血清学诊断。 标本采集方法标本采集方法 1 鼻拭子 采集标本时，嘱咐病人头部尽量保持不动 ，将聚酯纤维头拭子轻轻转动缓缓插入病 人鼻孔至颚部(注意：不可太用力，但要尽 量深，通常5cm以上)，停留数秒吸取分泌 物，轻轻旋转取出拭子，置采样管折断手 接触部位的塑料柄，使拭子浸泡至采样液 中，旋紧管盖。 标本采集方法标本采集方法 2 咽拭子 嘱咐病人放松，发“啊”声， 立即用压舌板压 住病人舌前23，聚酯纤维头拭子适度用 力多次抹擦悬雍垂（腭垂或小舌，见图） 后部咽后壁及双侧扁桃体，避免触及舌部 ，取出后置采样管，折断手接触部位的塑 料柄，使拭子浸泡至采样液中，旋紧管盖 。 标本采集方法标本采集方法 标本采集方法标本采集方法 标本采集方法标本采集方法 3、切记：咽拭子与鼻拭子采到一个 Hanks管（23ml ）。如商品化采样管液 体过多，采样前倒掉一部分，以提高病毒 浓度及阳性率。聚丙烯拭子采样前不需用 生理盐水湿润，以吸收更多的分泌物。 标本采集方法标本采集方法 4、漱口液标本：在病人发热72小时内尽早 采集。先让病人咳嗽几声，将5-10ml无菌 生理盐水（不含青霉素）倒入病人口中， 让病人头向后倾并发出“噢”的声音，反复几 次。将漱口液吐入50ml带垫圈的螺口塑料 离心管中，旋紧管盖。 标本采集方法标本采集方法 5、尸检组织标本：病人死亡后应尽早进行解剖， 采集肺、气管、肾、脾、肝、心脏、脑、血凝块 等组织和淋巴结等重要器官标本。每一采集部位 分别使用不同消毒器械；每种组织应多部位取材 ，每部位应取2050g，淋巴结2个，分别置于 50ml带垫圈的无菌螺口塑料管中，立即置于-70 以下保存或冷藏（48）送至有关实验室。尸 检组织标本对于病原学研究非常重要，应尽量多 采集。 标本的保存、运送标本的保存、运送 标识：油性记号笔或标签纸在采样管上标记标本名称、姓 名、编号等； 包装：符合“生物安全相关规定” 所采集的标本首先用封 口袋密封，周围最好包裹吸水缓冲材料，用第二个封口袋 再次密封，放入带冰排的标本运输箱； 填写“不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表”，送检表 用另一个封口袋密封，不要与标本放到一起； 于24 小时内送当地国家流感监测网络实验室检测，最迟 不超过48小时，如果有-70冰箱，可长期保存。 标本采集要求标本采集要求 无菌操作：采样人员须以无菌操作采集各类标本 。采集标本所使用的容器、采样液等均应无菌。 标识：每份标本必须标明标本编号、标本种类及 采集日期。采集单位应指定专人负责标本信息的 登记、收集和管理，详细记录信息，并认真填写“ 不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表”。不明 原因肺炎病例标本送检表.doc 标本采集要求标本采集要求 所有标本的收集、运输和保藏都应装在有螺旋盖 的塑料管中