药学专业毕业论文 外文翻译_2

本科毕业论文(设计)外文翻译学 院 专 业药学姓 名 学 号 指导老师 职 称 合作老师 职 称 外文题目（原文）Preclinical evidence for a beneficial impact of valproate on the response of small cell lung cancer to first-line chemotherapy译文：丙戊酸用于一线化疗治疗小细胞肺癌的有效性的临床依据Preclinical evidence for a beneficial impact of valproate on the response of small cell lung cancer to first-line chemotherapyRoland Hubaux , Fabian Vandermeers , Cecilia Crisanti , Veena Kapoor ,Arsene Burny , Celine Mascaux , Steven M. Albelda , Luc Willems 摘 要:小细胞肺癌（SCLC）的预知性特别低，处于蔓延期的病人能够一直活到两年后的比例不到5%。 我们假设小细胞肺癌化疗的疗效可以通过组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂来提高，是基于它们干扰赖氨酸乙酰化和如何改变基因表达的能力。这个研究的目的是通过结合标准化疗一线疗法（顺铂+依托泊苷）来评价组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂（丙戊酸钠：丙戊酸）在小细胞肺癌癌细胞上的抗癌功效。我们了解到，丙戊酸（VPA)能诱发小细胞肺癌细胞系的细胞凋亡并且能够提高顺铂联合依托泊苷的疗效，两者的线粒体和受体死亡途径都参与了VPA诱发细胞凋亡的机制。正如组蛋白去乙酰化酶所预期的效果，丙戊酸使组蛋白H3高度乙酰化。丙戊酸促进细胞凋亡的机制原理包括P21的诱导，Bcl-xL的诱导，投标的分裂，H2AX和蛋白质激酶的磷酰化，由于丙戊酸的存在，蛋白基因从细胞质到线粒体改变以及在18kDa同工型里裂开。细胞色素c是从线粒体中释放注入细胞质的。通过基因芯片分析转录组学表明了丙戊酸转录调节基因（Na+/K+ ATP酶, Bcl-xL）涉及顺铂和依托泊苷的药物抗性。最终，丙戊酸联合顺铂和依托泊苷的有效性得到了小细胞肺癌细胞嫁接到严重联合免疫缺损小鼠的临床潜伏期模型的支持。总之，这些数据表明，丙戊酸增加了顺铂和依托泊苷的抗癌活性，小细胞肺癌的标准一线化疗方案的两个组成部分。1. 介绍肺癌是世界范围内引发癌症相关性死亡的第一原因，每年有超过一百万的人死于此病。尽管在放疗和化疗上有所改善，但是五年来的生存率仍然低于15%。小细胞肺癌的发生率与以前的20-25%相比已经下降到低于15%。然而，小细胞肺癌蔓延期的病患，是任何组织学亚型中最低的一个生存整体存活两年及其以上的少于5%。由于癌细胞的快速散播性，手术治疗小细胞肺癌是极少有成效的，且极为罕见的。对于局限期的小细胞肺癌，标准的疗法包括将化疗和放疗联合起来同步使用，紧接着预防性头颅放射性治疗（经皮冠状动脉介入治疗）。广泛用于蔓延期疾病的方法是采用化疗方法治疗，当患者症状得到全部或部分缓解时采用预防性头颅放射疗法。对目前一线病人的黄金标准化疗是采用含铂方案包括顺铂（一种DNA交联剂）和依托泊苷（一种拓扑异构酶的抑制剂）。尽管极少被治愈，至少在一线治疗上，小细胞肺癌对化疗和放疗都是很敏感的，在广泛治疗期上起作用的比例达到60%和70%。然而，处于缓解期的癌细胞是短暂生存的，其二线疗法大约有20%的产量反应率，以及25周的半衰期。 在这种情况下，需要改善并提高小细胞肺癌的化疗疗效，这点是显而易见的，故将这个内容放在首位进行陈述则更为合理。在从学术著作和实验里得到证据的基础上，我们假设药物抗性可能由于表观遗传改变导致凋亡通路产生缺陷。因此，调控表观遗传变化，可能会提高小细胞肺癌化疗疗效，这可能是干扰了表观遗传修饰，例如组蛋白去乙酰化，使用相对特定的且可逆的抑制剂。在越来越多的组蛋白去乙酰化酶抑制剂中，丙基戊酸钠（丙戊酸）的最大优势是它作为治疗人类癫痫和双相性精神障碍已有确定疗效的药物已经被使用了数十年。此外，丙戊酸具有适宜的药代动力学特征且呈现出的仅有的中度毒性在这种抗癌治疗的背景环境下是可以被接受的。丙戊酸类似物的分析已经确定了抗肿瘤特性和组蛋白去乙酰化酶抑制剂之间的一种密切相关性。丙戊酸结合于赖氨酸去乙酰化酶的口袋催化，经由它的硝酸通道混杂着锌离子并且抑制他们的活动。通过抑制组蛋白去乙酰化酶，丙戊酸支持组蛋白氨基末端的高度乙酰化，还原DNA的负电荷和降低DNA的亲和力，导致其解凝并且激活转录。在细胞里，丙戊酸的调剂活动较广泛，包括增殖，凋亡，变异。以提高小细胞肺癌的一线治疗疗效为目标，我们通过细胞培养和异种移植小鼠模型来评估丙戊酸对于提高顺铂和依托泊苷的抗癌效果的能力。2. 材料和方法 2.1 细胞培养条件由芭芭拉坎普尔博士提供的BKT细胞是从病人身上分离得到的小细胞肺癌活组织切片。尽管这些细胞在小鼠瘤细胞的培养上增长速度非常缓慢。人小细胞肺癌细胞株（H146，H526，H69）均购自ATCC（弗吉尼亚州马纳萨斯）。所有细胞株培养在10%的RPMI 1640培养基中补充（5%的BKT）10%的胎牛血清（FCS），2毫摩尔谷氨酰胺，100 U/ml的青霉素和100 ug/ml的链霉素并保持其处于一个37摄氏度、5%CO2的湿润环境。细胞的培养是与丙戊酸（Sigma - Aldrich公司），顺铂和依托泊苷（施贵宝）单独或联合使用。2.2 细胞活性检测作为一种替代细胞的生长，其活性的评估使用检测法（CellTiter 96细胞增殖的一种解决方案，缓冲液）。肺癌细胞株（1.104细胞/毫升）分别培养于不同浓度的丙戊酸（0-10），顺铂（0-100）或依托泊苷（0-100）。经过48和72小时的培养，20的四唑试剂会被添加到每个井96孔板格式。在37经过2小时孵化，板块分析使用在490 nm波长比色酶标仪。2.3 细胞凋亡检测细胞凋亡是用乙醇固定后与碘化丙啶混合使用流式细胞仪定量。细胞接种在5*105每毫升并且用1mM丙戊酸，10uM顺铂和10uM依托泊苷单独或联合处理。经过24小时的培养，收集细胞500g离心10分钟，用磷酸盐缓冲液（PBS）的两倍 - 10胎牛血清冲洗干净，且用70的冷乙醇固定。在20摄氏度孵化至少1小时之后，细胞用PBS-10%FCS冲洗两次，并且用核糖核酸A（50ug/ml, Sigma - Aldrich公司）在37摄氏度处理30分钟。然后，细胞在暗处用PBS包含20ug/ml碘化丙啶（聚酰亚胺，Sigma-Aldrich公司）培养10分钟并用流式细胞仪（FACS Aria, Becton Dickinson公司）分析。细胞成对被排除在使用（FSC-H/FSC-W）浇注方法的分析。收集一万事项并用流式细胞仪软件分析。细胞在G1期被认为是处于凋亡时期的细胞。为了确定联合治疗诱导细胞凋亡产生的影响是否为相加，协同或拮抗，协同指数（SI）的计算公式如下：协同指数（SI）=特定细胞凋亡/单药治疗的特异性凋亡的总和。具体凋亡百分率使用下列公式确定：特定细胞凋亡=（药物诱导细胞凋亡-自发性细胞凋亡）/（100-自发性凋亡）。为了评价半胱天冬酶在凋亡通路中的作用，5*105细胞培养或没有20uM总蛋白酶抑制剂Z-缬氨酸，丙氨酸，天冬氨酸（甲酯）- CH2F（Z型VADfmk，Becton Dickinson公司），20uM培养阴性对照（Z型FAfmk，Becton Dickinson公司），40uM特定的半胱天冬酶8抑制剂Z -异亮氨酸，谷氨酸的LM（甲酯）-苏氨酸，天冬氨酸（甲酯）- CH2F（Z型IETD -芬兰马克，Calbiochem公司）或40uM特定的半胱天冬酶9抑制剂Z -亮氨酸谷氨酸（甲酯），他的-天冬氨酸（甲酯）- CH2F（Z型LEHD -芬兰马克，Calbiochem公司），所有的化合物被二甲基亚砜（DMSO）稀释。2.4 蛋白质印迹分析经过24小时的培养，2.106细胞用冷PBS冲洗两次，并在细胞内液（250mM蔗糖， 70mM氯化钾，137mM氯化钠，4.3mM磷酸氢二钠，1.4mM磷酸二氢钾溶液pH 7.2，100uM苯甲基磺酰氟，200ug/ml洋地黄皂苷和蛋白酶抑制剂用冰处理5分钟（完整迷你，罗氏公司）。取1000g在4离心5分钟，收集上清液（即上图可溶性部分，Fig.3）并在80左右储存。在50mM Tris - HCl（pH值7.5）中溶解，1的NP-40，0.5去氧胆酸钠，150mM氯化钠和0.1的十二烷基磺酸钠并且补充蛋白酶抑制剂的鸡尾酒（完整，罗氏）。肿瘤细胞裂解液是准备使用组织匀浆，并用50mM裂解缓冲液Tris - HCl（pH 7.5），150mM氯化钠，1的NP-40，0.5去氧胆酸钠，0.1的十二烷基磺酸钠并且补充蛋白酶抑制剂的鸡尾酒（完整，罗氏）。经过30分钟冰浴，取13000g在4离心五分钟，收集上清液含可溶性蛋白质且储存于80。蛋白浓度使用微BCA蛋白检测试剂盒（皮尔斯）来定量。二十微克的蛋白质被15的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶所迁移且转移到硝酸纤维素膜（通用电气医疗集团）。用TBS含4%非脂肪乳粉来阻塞之后，该膜在4用原发性抗体进行过夜培养。理想抗体浓度由制造商提供和测试实验：抗-乙酰化组蛋白H3（稀释1/10000，上州），抗-肌动蛋白（稀释1/1000，Sigma-Aldrich公司），抗- Bax蛋白（稀释1/250，Dako Cytomation），抗- p21基因（稀释1/500，圣克鲁斯生物技术），反出价（稀释1/500，Becton Dickinson公司），抗- Bcl- 2的（稀释1/ 100，Dako Cytomation），抗-磷酸-Bcl-2（Ser70）（稀释1/500，细胞信号），抗-Bcl-xL的（稀释1/ 500，细胞信号），抗蛋白酶8和抗蛋白酶9（稀释1/500，细胞信号），抗-细胞色素C（稀释1/1000，Becton Dickinson公司，Pharmingen公司），抗- ERK（稀释1/10000，Sigma- Aldrich公司），抗磷酸化ERK（稀释1/ 1000，细胞信号），抗-H2AX（稀释1/ 1000 ，Abcam）和反VDAC1（稀释1/100，Abcam）。细胞膜培养一小时用过氧化物酶标记的多克隆二抗体（或猪或山羊antimouse抗兔免疫球蛋白/过氧化物酶购自Dako Cytomation）稀释10000倍和显示使用的ECL加免疫印迹检测试剂盒（通用电气医疗集团）。2.5 蛋白酶活性分析人小细胞肺癌细胞株（H69，H146，H526）的培养与丙戊酸，顺铂和依托泊苷单独或合并使用24个小时。从肿瘤切除治疗免疫缺陷小鼠和细胞裂解液（50mM Tris - HCl（pH 7.5），150mM氯化钠，1的NP-40，0.5去氧胆酸钠，0.1的十二烷基磺酸钠并且补充蛋白酶抑制剂的鸡尾酒（完整，罗氏）。经过30分钟冰浴，取13000g在4离心五分钟，收集上清液含可溶性蛋白质且储存于80。蛋白浓度使用微BCA蛋白检测试剂盒（皮尔斯）来定量。然后，裂解产物培养在白色壁96口井的存在板块重组蛋白酶-球蛋白3-7和蛋白酶-球蛋白8或蛋白酶-球蛋白9试剂（样品试剂稀释：1:1）。经过1小时室温和黑暗中的培养，每个样品的发光程度可用一个盘子读光度计来测量。2.6 微阵列分析H526细胞在存在或缺少1mM丙戊酸的情况下培养4小时。经过两次PBS洗涤，用Trizol法提取RNA的方法来使细胞溶解（Ambion公司）。 RNA的提取照应着制造商的拟定，用异丙醇沉淀，乙醇75冲洗。水相和有机相之间的再次分离，进行第二相锁凝胶（5要素）以优化RNA的恢复和纯洁性。对于所有提取的RNA的数量和纯度的评估要使用ND-1000分光光度计（分光光度计技术）并保存于80直至扩增步骤）。通过合并等量的总RNAs得到的RNA参考系是来自4个不同的小细胞肺癌细胞系的。500ng样品和RNAs参考系进行反向并列使用相同的主引物组合和polydT莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶（MMLV-RT）和PCR扩增并行转录。cDNAs分别用Cy3（参考）或Cy5（样本）使用低输入的RNA线性扩增试剂盒（Agilent技术）染色标记。 RNA的穗中（安捷伦技术）被列入为监测样品扩增步骤，微阵列芯片加工阳性对照。数量及染料标记cRNAs纳入评估使用ND-1000分光光度计（分光光度计技术）。然后，标记的cRNAs杂交安捷伦寡核苷酸基因芯片17小时（两种颜色整个人类基因组4*44K表阵列，安捷伦科技）60在一个旋转炉（Agilent技术）。对样品进行了随机根据治疗和扩增运行。拆卸后的商会，切片洗净，用激光扫描共焦（Agilent技术）分析。网格定位，点定位，异常值标记，荧光强度的定量化，背景水平评价和根据线性和Lowess数据规范化遵循的背景值校正进行了相应的制造商的协议（GE2_v5_95_Feb07协议，特征提取软件，版本9.5。 3.1）安捷伦科技。进行了统计分析与Genespring GX的，版本7.3.1（Agilent技术）。附加正常化步骤进行：（1）每点（由控制信号司），（2）每阵列（正常化50百分位）和（3）每个基因（正常化，中位数）。成绩单中所没有的样品中至少有一个被排除在更多的分析。韦尔奇的t测试是用来评估在基因表达的差异统计学意义样本群体之间的不同观察，但不包括基因，其表达的跨越利益设置采样系数低于2不一。此外，我们使用了（CMT）的多个测试校正，根据Benjamini的测试仪（FDR：更正错误发现率）和审议了0.05的统计意义的门槛。基因的途径进行了分析与程序的聪明才智。2.7 在SCID小鼠疗法的疗效评价该机构动物照顾与使用委员会（IACUC 672号议定书）在宾夕法尼亚大学批准与照顾和实验动物使用指南均全部符合动物协议。SCID小鼠（杰克逊实验室）获得整个实验一标准的研究饮食。BKT（6.5 * 106）和H69（2.5 * 106）细胞中，50基底膜基底膜基质高浓度（Becton Dickinson公司生物科学）嵌入式，植入皮下的7周龄雌性SCID小鼠的侧翼。当肿瘤达到了300-400mm3，小鼠分别每日腹腔注射丙戊酸（400mg/kg/天）或作为PBS对照的。在第一次注射丙戊酸（用于H69和BKT，分别在9日和41日）是管理开始前三天配合化疗治疗药代动力学特性。腹腔注射顺铂（3mg/kg）和依托泊苷（40mg/kg）在12日，16日，22日进行，对于H69和BKT，在44日,49日，69日进行。注射的药物是第一个时间表初步确定剂量反应试验。每周进行两次肿瘤体积计算，使用的公式为：1/6 * * D * d2,且D是最大直径，d是最小直径。各个实验条件下至少有六只小鼠进行测试。 2.8 统计分析所有的细胞培养实验进行了至少三次，数据显示为平均值标准差。当p 0.05，p 0.01和P 0.001时，统计意义计算学生试验的t检验和数据被认为具有统计学显著意义（*），非常显著（*）和高度显著(*)。图. 1 - 顺铂和依托泊苷丙戊酸协同加强对小细胞肺癌细胞株诱导凋亡。三个小细胞肺癌细胞株（H69，H526和H146）在有或没有丙戊酸（VPA，1mM）与顺铂（P，10 uM）和依托泊苷（E，10uM）。细胞凋亡率，测定了固定和流动后，乙醇碘化法团（A组）术。在亚G1期细胞分裂产生的fromDNA被认为是细胞凋亡。细胞凋亡的发生比率，列均值和标准差作为三个独立实验（标准差）。 蛋白酶活性分析与蛋白酶-球蛋白3-7试剂（图B）。差异被认为是显著（* p 0.05），非常显著（* P 0.01）和高度显著（* P 0.001）根据配对t检验。3.结果 3.1 丙戊酸结合顺铂和依托泊苷且它能影响小细胞肺癌细胞凋亡我们首先决定使用可行性分析（MTS）来观察随着丙戊酸剂量（0-10mM）增加时的小细胞肺癌细胞的反应。半抑制浓度决定于72小时的培养，在H146，H526和H69细胞中丙戊酸分别加入0.4，1.5和1.0mM（数据不显示）。这些丙戊酸的毫摩浓度对病人而言显然是在治疗剂量可达到的范围内。因此，1mM丙戊酸被结合于顺铂（P，10uM）和依托泊苷（E，10uM）的临床相关剂量，且细胞在用碘化丙啶染色后通过细胞计数器来分析是为了找出典型凋亡的DNA碎片。在H69，H526和H146细胞中丙戊酸被明显诱导能增加细胞的凋亡（p0.05,p0.05且p0.01，分别根据学者实验配对，Fig.1A）。事实上，丙戊酸在联合治疗上是具有协同效果的（在H69，H526和H146细胞中的协同系数分别为2.69，1.25和1.84）。与此并列的，我们测定半胱天冬氨酸蛋白酶3/7的活动并且确认其单独应用会引发细胞凋亡发作（Fig.1B）。我们得出结论丙戊酸与顺铂和依托泊苷协同使用可以诱导小细胞肺癌细胞的凋亡 3.2 丙戊酸联合顺铂和依托泊苷可诱导细胞凋亡是依赖于它的外在和内在途径 为了确定丙戊酸/顺铂/依托泊苷诱导细胞凋亡是依赖于外在途径（即依赖于死亡受体）还是内在途径（即依赖于线粒体），包括半胱天冬氨酸蛋白酶8和9酶促活动分别用半胱天冬氨酸蛋白酶抑制剂来进行药物抑制。与抑制剂的自控相比较（类似物缺乏半胱天冬氨酸蛋白酶抑制剂的活动），总半胱天冬氨酸蛋白酶抑制剂能有效减少H526细胞的凋亡（p0.001 根据学者实验配对；Fig.2）。当外在或内在途径选择性的限制使用半胱天冬氨酸蛋白酶8抑制剂（Z-IETD-fmk,p 0.01）或者是半胱天冬氨酸蛋白酶9抑制剂（Z-IETD-fmk,p 0.01）时，也能得到类似的结果，尽管后者似乎更弱(* p 2来实现。如TNFRSF12A，TNFRSF19，BCL2基因绑定组件3和bcl-xl基因有牵连的细胞凋亡的调控。有趣的是，两个基因Bcl-xL的和Na+/K+ ATP酶也参与了顺铂+依托泊苷的药物抗性，分别为（补充文件2和参考）.他们的转录网理论的巧思分析，如图4所示。 图4 -丙戊酸在调节几个涉及细胞凋亡及药物敏感性的基因的表达。基因转录通过丙戊酸 修正（补充文件1），包括通过独创性软件对顺铂和/或依托泊苷（补充文件2）的抗性进行分析。两个已知类型的基因（Na+/ K+ ATP酶和Bcl-xL）的药物抗性通过丙戊酸处理H526小细胞 肺癌细胞（以*表示）可以激活。3.4 丙戊酸联用顺铂和依托泊苷处理SCID小鼠细胞可组织肿瘤生长最后，我们研究在两个SCID小鼠模型中丙戊酸抑制肿瘤生长的能力嫁接人类小细胞肺癌细胞。将BKT和H69细胞基底膜嵌入式的皮下植入7周龄雌性SCID小鼠的侧翼。当肿瘤达到了300-400mm3，分别给予小鼠每日腹腔注射丙戊酸（400mg/kg/天）或PBS作对照。三天后的第一个丙戊酸管理，腹腔注射顺铂（3mg/kg）和依托泊苷（40mg/kg）按照材料和方法里描述的那样进行。丙戊酸单独处理可轻微和适度降低H69和BKT肿瘤的生长，分别为（图5，图A）。正如所料，顺铂和依托泊苷联用的方案可以延缓肿瘤的生长，但小鼠最终还是会复发。然而，当到丙戊酸被添加到治疗中，这两种模型中顺铂和依托泊苷疗效均明显提高（*p 0.01 学生试验t检验，图5A），证实了切除肿瘤重量（图5B）。值得注意的是，丙戊酸处理过的小鼠肿瘤似乎很少有变形的，这表明丙戊酸影响血管新生。重要的是，这种联合治疗的方案不产生任何重量损失显著增加（即 0.05，图5D）处理小鼠肿瘤提取上有非显著意义，这表明细胞发生凋亡。总的来说，这些数据表明，在两个独立的SCID小鼠移植瘤模型中，丙戊酸能增加顺铂和依托泊苷的抗癌功效。4.讨论尽管治疗方法在不断改进，小细胞肺癌的预后性仍然较差。我们的报告支持一个潜在的新方法，通过组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸结合化疗以提高小细胞肺癌的疗效。令人惊讶的是，很少有研究已经探讨了对于小细胞肺癌的办法。以前的报导已经描述了单独使用组蛋白去乙酰化酶抑制剂时小细胞肺癌细胞的敏感性：FR901228，曲古菌素A，丙戊酸和LBH589。在当前的报导中，我们在细胞培养（图1）和动物模型（图5）中提供的实验证据表明，治疗小细胞肺癌的标准一线药物的疗效是通过丙戊酸改善的。目前的研究表明丙戊酸联合顺铂和依托泊苷诱导细胞凋亡的蛋白酶依赖机制，包含双方的内在和外在途径（图2）。事实上，蛋白酶8或/和蛋白酶9的抑制剂（或两者）撤销细胞凋亡的开始，暗示了这两个途径都是通过缩短t-投标的同工型而互相联系的。与此一致的是，蛋白谱实验表明，丙戊酸可以增加T投标（图3）的水平。该裂解羧基端的部分原因，投标膜电位下降，刺激细胞色素c从线粒体释放，如图3观察。投标不仅可以割断蛋白酶8，还可以通过其他蛋白酶（蛋白酶2和3）及其他蛋白质（颗粒酶B，钙激活酶和组织蛋白酶）。我们的数据显示，总蛋白酶抑制剂Z-VAD方案能完全抑制细胞死亡。如果其他蛋白酶裂解要求和其他蛋白裂解一样，蛋白酶因此似乎需要启动上游程序。抗凋亡蛋白Bcl XL的表达大幅减少，而Bcl2蛋白水平保持相对稳定。值得注意的是，像其他组蛋白去乙酰化酶抑制剂比如FR901228和帕比司他抑制BcL2在小细胞肺癌细胞的生长，表明可能涉及了略有不同的机制。由于耐顺铂处理小细胞肺癌细胞的抗药性已被下调至BcL2，这个观察对于设计最佳治疗方案可能是特别重要的，这个方案可能包括丙戊酸而不是FR901228和帕比司他。除了对Bcl-xL的抑制和Bid的裂解，丙戊酸也能刺激Bax蛋白从细胞质转运到线粒体（图3）。众所周知，Bax蛋白与抗凋亡的Bcl-xL蛋白相互作用以及整体的裂解激活了Bax蛋白的凋亡功能。有趣的是，我们同时还发现一种特定的18kDa能裂解Bax同工型，这个已经被描述为能有力的家督细胞凋亡进程。缩短了的Bax蛋白片段与抗凋亡的Bcl-xL蛋白没有相互作用且不受抗凋亡Bcl-2蛋白抑制。该裂解产品的数量在目前的综合治疗（相对于单独使用丙戊酸）中的运用明显增加，并可能在联合用药增加疗效的解释上尤为重要解释。由于在丙戊酸和丙戊酸+顺铂+依托泊苷的治疗方案上t投标和细胞色素C的水平是相似的且因为上游Bax蛋白裂解致使细胞色素C释放，这也可能是由于其他线粒体凋亡蛋白质的释放引起细胞死亡，如AIF或核酸内切酶。丙戊酸最直接的影响可能是感应组蛋白的高度乙酰化（图3），该进程导致染色质解凝和转录基因激活。一个开放的染色质构象可能也支持顺铂或依托泊苷进入DNA，增加他们的破坏活动。与这种模型一致的是，总所周知，p21细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）抑制剂在丙戊酸作用下能激活对DNA损伤的反应（图3）。 H2AX的广泛磷酸化作用的揭示了DNA双链断裂发生在目前顺铂+依托泊苷的治疗方案中而且存在于单独使用丙戊酸的方案中（图3）。虽然我们的结果支持了组蛋白乙酰化酶抑制剂之间，组蛋白乙酰化和凋亡基因转录调控三大环节相互关联，丙戊酸作为I类组蛋白去乙酰化酶抑制剂，可引起非组蛋白的乙酰化作用以及产生抗凋亡基质。例如，Ku70通过从线粒体中隔离Bax蛋白来抑制细胞凋亡。当发生乙酰化作用，它释放Bax蛋白，允许其转运到线粒体且引发细胞色素C的释放。Ku70通过/类组蛋白去乙酰化酶和类去乙酰化酶来以去乙酰化作用为目标的。我们观察到丙戊酸诱导活性氧可能会引发小细胞肺癌细胞DNA的损伤。虽然自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸不足以抑制细胞凋亡（数据未显示），这个机制提供了一个丙戊酸和DNA之间的嵌合剂如表阿霉素或阿霉素在肿瘤细胞株中诱导其凋亡的协同作用的机理。转录组（图4）表明，