血型的鉴定方法

血型鉴定的原理,利用红细胞凝集试验，通过正（血清试验）反（细胞试验）定型准确鉴定血型。 正定型是用已知抗和抗分型血清来测定红细胞上有无 相应的抗原或和抗原。 反定型是用已知细胞和细胞来测定血清中有无相应的抗或抗 。,常见的鉴定方法有血凝试验和微柱凝胶试验,血凝试验是指抗体和红细胞在液体介质中发生肉眼可见的凝集反应. 根据操作方法的不同,主要分为3种方法： 玻片法 试管法: 全自动微板法:,玻片法,根据标准抗体血清与待测红细胞(或标准红细胞与待测血清)在干燥玻片上是否发生凝集反应来确定待测红细胞(待测血清)血型。 它仍然是目前临床常用的血型鉴定的初筛试验方法,具有操作简便,节省材料的优点。 但弱凝集反应需要借助显微镜观察确定. 步骤：清洁玻片一张（或白瓷版一块）。标明抗、抗和抗、,分别用滴管滴加抗、抗和抗、分型血清1滴，再加受检者35红细胞悬液1滴，混合。另取洁净玻片一张（或白瓷板一块）。标明细胞、细胞和型试剂，分别加红细胞悬液1滴。将玻片（或白瓷板）不断轻轻转动（在室温1822），使血清与细胞充分混匀连续约15分钟，以肉眼观察有无凝集（溶血）反应。如以玻片试验时，也可用低倍镜观察结果。,试管法,试管法是交叉配血试验中最基础的实验方法之一,其与玻片法原理相同,只是借助试管更大的反应空间,并对待测红细胞予以一定浓度的稀释(通常是用生理盐水稀释红细胞至2%5%)或加入更多的待测血清,通过低速离心后根据有无肉眼可见的凝集反应来判定结果。由于待测红细胞经过稀释,在一定程度上减少了血液中非特异性抗体的浓度,从而提高了试验的敏感性。相比玻片法具有更加准确可靠的优点。 步骤： 取洁净小试管3支，分别标明抗、抗和抗、,用滴管分别加抗、抗和抗、分型血清各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者35红细胞盐水悬液1滴，混合。另取洁净小试管3支分别标明，和型细胞，用滴管分别加入受检者血清12滴于底部，再分别以滴管加入、和型3试剂红细胞悬液1滴混匀。120g离心1分钟或1300g离心15秒。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜检查。观察结果时，既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于，亚型、类或cis的发现。,全自动微板法,检测技术产生于全自动血液样品系统以及用于凝聚实验的扫描酶标仪问世之后。通过标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止以及反应前后吸光度值增加数值的计算,从而达到对血型进行定型与反定型的目的. ,具有快速、准确（99.8%）、自动化程度高等优点,适合批量操作,但也将B3亚型伴抗-B误判为O型的个案报道。,微柱凝胶试验是在微柱凝胶介质中,红细胞与相应的抗体结合,经过低速离心,凝集的红细胞悬浮于凝胶中,而未与相应抗体结合的红细胞沉到管底。结果清楚明了，不用借助显微镜。 凝胶试验分为中性胶,特异性胶和抗球蛋白胶,分别用于血型血清学不同的试验: 在中性胶试验中,凝胶不含抗体（应该是含有细胞）, ABO血型反定型; 在特异性胶试验中,凝胶含有血型抗体,可用于血型抗原检测。（正定型）,其他体液的ABO血型检测,唾液、精液、痰、脓、鼻涕、乳汁 分泌型人 吸收试验（只精液）： 中和试验： 解离试验： 混合凝集试验： 非分泌型人 ELISA法：用抗A抗B及抗H单克隆抗体包被（唾液、 痰、脓、鼻涕） Lea凝集素做吸收实验（乳汁）,唾液取材及预处理：漱口，自然流出唾液置于干净容器，水浴中煮沸10min。灭活血型分解酶。,尿液：取检材用蒸馏水提取、浓缩、透析，作中和试验；也可将检材用酒精沉淀，再用生理盐水溶解沉淀物，做中和试验；尿沉淀物中含有上皮细胞，沉淀物涂片固定后，用混合凝集反应试验也可测定。 汗液：含量少，但可测。吸收试验 阴道液：可测，但由于阴道脱落细胞多为核细胞，含量多，现多采用dna分析法做个体识别。 粪便：含量与唾液相仿，取少量人粪，加10倍量16%酒精充分浸出，经100煮沸30min后，离心，再将上清液浓缩至1/5量，加3倍量纯酒精放置冰箱过夜后，离心沉淀，取沉淀制成干粉，用吸收或中和试验方法测。,组织的ABO血型检测,毛发 特征：1 血型物质含量少； 2 毛小皮没有血型物质，只有皮质和髓质才有 预处理：毛发洗净-乙醇脱色-充分压扁 检测方法：解离试验 混合凝集试验,指甲 特点：存在于所有的个体,成人和新生儿指甲中的ABH含量无明显的差异。 预处理：洗净-用肥皂水充分的洗涤，再用蒸馏水冲洗数次 软化-生理盐水中2小时，晾干 脱脂-丙酮或乙醇脱脂 压碎-加大抗血清接触的面积 检测方法：解离试验 混合凝集试验 骨及牙检验 预处理：用手术刀刮净骨表面和牙齿表面的污垢物，用蒸馏水冲洗2次，紫外线照射1小时后，用锤子将牙齿砸碎成粉末，或用电钻取出骨粉。 检测方法：骨粉经乙醇脱脂后，分别粘在透明胶布上-解离试验。,软组织（皮肤、浅筋膜、皮神经、浅血管） 检测方法：吸收试验 解离试验 混合凝集 免疫组化（ ELISA ）,吸收试验：当被检材料分别于已知的抗A、抗B标准血清充分作用后，血清中凝集素就与备件材料中相应抗原相结合，使血清中凝集素减少乃至消失，该血清再遇已知的响应红细胞则不再出现凝集，或凝集大为减弱。从而可以推断检材中所含的抗原，以确定血型。 注意：做吸收实验用的抗A和抗B两种抗血清，其效价（估计）必须与检材中所含凝集原的量相适应。 中和试验：检材中水溶性的A、B、H物质能特异的与相应的抗体结合，使抗体与指示红细胞的凝集反应能力降低或完全消失。红细胞不凝为中和试验阳性反应，证明检材中含有与抗体相对应的抗原。,解离试验：试验时，让检材中凝集原分别与抗A、抗B血清中的凝集素结合 后，清除未被吸收的凝集素，加热至5556，被吸收的凝集素又可解离出来。再加入A、B型红细胞悬液，观察有无凝集反应。如果加入A型红细胞悬液而发生凝集反应，说明检材中含有A凝集原，血型为A型。加入B型红细胞悬液而发生凝集者，说明检材中含B凝集原，血型为B型。均凝集者，说明检材中含A、B两种凝集原血型为AB型。均不凝集者，证明检材中不含A、B凝集原，血型为O型。 该试验灵敏、迅速，所需检材量少，但技术条件要求高，操作规程严格。 混合凝集试验：本试验采用双重结合的办法，让检材中凝集原与血清中抗A、 抗B凝集素充分结合后，清除游离血清，再加入相应的A型、B型红细胞悬液，则悬液中的红细胞与已结合的抗A、抗B血清重新结合，出现红细胞凝集或吸附反应。如