（生物化学与分子生物学专业论文）人acat2基因表达的可变性剪接和组织特异性研究及猴acat1+cdna5utr的克隆分析.pdf

上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本 文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：曩呢，饩( 钗 日期刚年，u 月g 日 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密口，在年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密日。 ( 请在以上方框内打“4 ”) 学位论文作者签名堙q ，趁义 指导教师签名：孝术乏专 日期砂占年p 月e 1日期：伊辞c 。月豸日 人a c a t 2 基因表达的可变性剪接和组织特异性研究 及猴a c a t lc d n a5 u t r 的克隆分析 摘要 酰基辅酶a ：胆固醇酰基转移酶( a c a t ) 是细胞内唯一催化游离胆固醇和脂 肪酸合成胆固醇酯的酶，在细胞内胆固醇代谢平衡中起非常重要的作用。目前， 在哺乳动物细胞中发现两种基因编码a c a t ( a c a t l 和a c a l 2 ) 。a c a t l 几乎 在各种组织细胞中均有表达，与细胞胆固醇代谢平衡直接相关；而在肝肠细胞中 特异表达的a c a t 2 则与外源胆固醇的吸收和脂蛋白装配等密切相关。人类动脉 粥样硬化、阿尔海默氏病、胆囊结石等一些重要病变，都与a c a t 密切相关。因 此，a c a t 已成为分子筛药的重要靶蛋白。我们实验室与美国c h a n gt y 教授实 验室的合作研究，已首先报道了两种人a c a t 基因的基因组结构和a c a t l 基因 的表达调控。在这些基础上，本论文进行两部分工作，第一部分重点围绕人 a c a t 2 基因表达的可变性剪接和组织特异性进行研究，第- d , 部分是进行猴 a c a t lc d n a5 - u t r 的克隆分析。 首先，进行可变性剪接成熟的人a c a t 2m r n a s 及其编码的异构体酶活性 的分析研究。人a c a t 2 基因长约1 8k b ，包含1 5 个外显子，所有的外显子内含 子连接区序列均为经典的g t a g 序列。通过r t - p c r 、克隆和d n a 测序分析， 获得三种人a c a l 2 m r n a s 。序列比较表明，它们是从同一l o r e m r n a 通过可变 性剪接产生，外显子的缺失并未导致阅读框的改变；它们编码三种人a c a l 2 产 物，即a c a t 2 a ，包含所有的1 5 个外显子，编码5 2 2 个氨基酸；a c a t 2 b ，包含 除外显子4 以外的1 4 个外显子，编码5 0 2 个氨基酸；a c a t 2 c ，包含外显子1 - 3 、 6 7 、1 1 1 5 ，编码3 7 9 个氨基酸；其中a c a l 2 a 与文献报道完全一致，a c a t 2 b 与a c a t 2 c 为新发现的2 个a c a l 2 序列。利用克隆的三种大小不同的人a c a t 2 o r fc d n a s 构建相应的表达质粒，分别转染a c a t 缺陷的a c 2 9 细胞进行表达 研究，结果显示可表达出相应不同大小的a c a l 2 蛋白产物；同时在人肝肠细胞 株中也检测到了同样不同大小的内源表达a c a t 2 蛋白产物。这些表明，可表达 的内源性a c a l 2 b 和a c a t 2 c 蛋白可能是两种a c a l 2 异构体，而且它们的氨基 摘要 酸序列特征性变化还包括缺失一个潜在的c k 2 ( c a s e i nk i n a s ei i ) 磷酸化位点 s l l d ，其位于外显子4 编码的2 0 个氨基酸区域内。深入进行酶活性和体外磷酸 化测定结果表明，a c a t 2 a 可被磷酸化，其异构体a c a t 2 b 则不被磷酸化；而且 异构体a c a t 2 b 和a c a t 2 c 的酶活性仅为a c a l 2 a 的2 5 3 5 。对己报道的 a c a t 蛋白序列进行比较分析，发现该位点在多个物种的a c a t l 和a c a l 2 蛋白 中都高度保守，提示a c a t 在细胞内可通过磷酸化与非磷酸化形式调节这一多聚 变构酶的活性。这些可为a c a t 精细调节人细胞胆固醇代谢平衡研究提供重要的 分子基础。 接着，对人a c a t 2 基因表达的组织特异性进行深入研究。通过构建一系列 5 缺失的a c a t 2 基因启动子荧光素酶报告基因质粒，分别转染分化和未分化的 人结肠癌细胞c a c o 一2 ，结果显示人a c a t 2 基因启动子肠细胞分化依赖性的效应 区位于9 1 2 7 6 9b p 内；计算机分析显示，该区域含有4 个潜在的c d x 2 和1 个 h n f l c t 元件，其中5 端的2 个c d x 2 元件与h n f l a 元件完全重叠；凝胶阻抑实 验( e m s a ) 结果表明转录因子c d x 2 和h n f l a f l 特异地结合在人a c a t 2 基因 启动子上：缺失突变、定点突变、启动子荧光素酶报告基因活性分析和精细的 e m s a 结果显示a c a t 2 基因启动予中的c d x 2 和h n f l c t 元件是肠细胞分化依赖 启动子活性所必需；在未分化的c a c o 2 和n i h 3 t 3 细胞中，共转染表达的c d x 2 和h n f l c t 能协同增强野生型人a c a t 2 基因启动子活性。这些实验结果证明了转 录因子c d x 2 和h n f l c t 对人a c a t 2 基因启动子的活性起关键作用。进一步的 r t - p c r 和w e s t e r nb l o t 显示，c a x 2 、h n f l t x 和a c a t 2 的表达均随着c a c o - 2 细 胞分化而明显增加，并且在未分化的c a c o 2 细胞中共转染表达的c d x 2 和h n f l c t 能显著提高a c a t 2 的表达，在分化的c a c o 2 细胞中通过r n a i 技术抑制内源 c d x 2 和h n f l o 表达也非常显著地降低a c a l 2 的表达；这些结果表明，转录因 子c d x 2 和h n f l c t 对人a c a l 2 基因的肠细胞分化依赖性表达具有直接的功能作 用。在研究肠组织细胞中人a c a l 2 基因表达的基础上，深入探索人a c a t 2 基 因在肝组织细胞中的表达。r t - p c r 实验显示，人肝细胞株、肝组织、肝癌( h c c ) 及癌旁组织均表达h n f l c x ；人正常肝细胞株l 0 2 和肝组织中，均未观察到c d x 2 和a c a l 2 的表达；而在肝肿瘤细胞株h e p g 2 中，同时有c d x 2 的表达，则也有 a c a t 2 的表达；r n a i 实验结果揭示在h e p g 2 细胞中c d x 2 和m 吓1 磙达被抑 2 制，则可抑制a c a l 2 基因表达；在5 0 的h c c 病人( 1 4 例中的7 例) 中，癌 旁组织检测的结果与以上正常肝细胞株l 0 2 、肝组织的一致，而癌组织检测的结 果与以上肿瘤细胞株h c p g 2 的一致，说明肝癌中a c a t 2 基因的表达与c d x 2 的 异位高表达密切相关，提示a c a t 2 可作为检验肝癌的一种新的生物标记分子。 同时，r t - p c r 实验结果揭示不同人细胞株的内源c d x 2 、h n f l a 和a c a l 2 基因 的表达呈现不同的模式；转录因子c d x 2 和h n f l c t 调控a c a t 2 基因的表达具有 细胞特异性，l 0 2 、h e l a 和t h p 1 细胞中c d x 2 和m 师1 a 表达增加，能促进内 源a c a l 2 基因的表达，并且l 0 2 和h e l a 细胞中c d x 2 和h n f l o t 对a c a l 2 基 因的表达有协同增强效应，而在t h p 1 细胞中则不体现出协同增强效应；h e p 3 b 和h e k 2 9 3 细胞中c d x 2 和h n f lc 【表达增加并不能促进内源a c a r 2 基因的表达 增加。这些研究结果，首次详细阐明了a c a t 2 基因肝组织细胞特异性表达的分 子机制，为深入研究人a c a t 2 基因的组织细胞特异性表达调控奠定了基础。 最后，本论文还有小部分工作是对猴a c a t lc d n a5 - u t r 的克隆分析。 5 r a c e 和测序结果显示，克隆的猴a c a t lc d n a5 - u t r 也存在回文结构 c c g a a n g g 序列，提示该序列也可能来源于两条染色体。这些研究将为 a c a t l 在p r e m r n a 水平上的调控研究提供一定的基础。 综上所述，在本论文的上述两部分工作中，发现人a c a t 2 基因表达存在可 变性剪接，发现2 个新的人a c a t 2 异构体a c a t 2 b 和a c a t 2 c 、鉴定了一个在 a c 盯1 、a c a r 2 中均保守的、可磷酸化的位点；发现转录因子c d x 2 、h n f l a 协同增强人a c a 9 2 基因启动子的转录活性，首次揭示了入a c a t 2 基因的肠细 胞分化依赖性和组织特异性表达的分子机制；发现肠细胞特异转录因子c d x 2 的 异位表达引起人肝癌组织表达a c a t 2 ，为肝癌早期诊断提供潜在的新生物标记 分子；发现克隆的猴a c a t lc d n a 5 - u t r 也存在回文结构c c g a a t t c g g 序列， 提示该序列也可能来源于两条染色体。这些为深入研究阐明a c a t 基因表达的调 控及其在胆固醇代谢平衡中的生理功能和病理作用等提供了重要基础和研究线 索。 关键词a c a l 2 基因；可变性剪接；a c a t 2m r n a ：异构体酶；c d x 2 ；h n f l a ： 表达；c a c o 2 ：h c c 猴a c a t lc d n a5 - u t r 3 a b s t r a c t s t u d yo na l t e r n a t i v es p l i c i n ga n dt i s s u e s p e c i f i c i t yo fh u m a n a c a t 2 g e n ee x p r e s s i o na sw e l la sc l o n i n ga n da n a l y s i so f m o n k e ya c a t l c d n a5 - u t r y a o x i a o m i n ( b i o c h e m i s t r ya n dm o l e c u l a rb i o l o g y ) d i r e c t e db yp r o f e s s o rl i nz h i - x i na n dp r o f e s s o rl i1 3 0 l i a n g a b s t r a c t a c y l c o a ：c h o l e s t e r o la c y l t r a n s f e r a s e ( a c a t ) i sa ni n t r a e e l l u l a re n z y m et h a t c a t a l y z e st h ef o r m a t i o no fc h o l e s t e r o le s t e r sf r o ml o n g - c h a i nf a t t ya c y lc o e n z y m ea a n dc h o l e s t e r 0 1 a c a tp l a y sa l li m p o r t a n tr o l ei nc e l l u l a rc h o l e s t e r o lh o m e o s t a s i s s o f a r , i nm a m m a l s ，t w oa c a tg e n e sh a v e b e e ni d e n t i f i e d t h ea c a t lt h a ti sf o u n d i n a l m o s ta l lo ft h ec e l l sa n dt i s s u e se x a m i n e di sb e l i e v e dt ob ec r u c i a lf o rm a i n t a i n i n g c h o l e s t e r o lh o m e o s t a s i sw h i l ea c a t 2t h a ti ss e l e c t i v e l ye x p r e s s e di nl i v e ra n ds m a l l i n t e s t i n em a yb et h em a j o re n z y m et h a ti n v o l v e di nt h ed i e t a r yc h o l e s t e r o la b s o r p t i o n a n da s s e m b l yo fa p o b c o n t a i n i n gl i p o p r o t e i n a c a t sa l s o p l a yi m p o r t a n tr o l e si n s o m es e r i o u sh u m a nd i s e a s e si n c l u d i n ga t h e r o s c l e r o s i s ，a l z h e i m e r sd i s e a s e a n d g a l l s t o n e f o rt h e s er e a s o n s ，a c a th a sb e e nc o n s i d e r e da so n e o fm a j o r p h a r m a c e u t i c a lt a r g e t sf o rd e v e l o p i n gc e - l o w e r i n g , a n t i a t h e r o s c l e r o s i sa n d o r a n t i a dd r u g s i nc o l l a b o r a t i o nw i t hp r o f e s s o rc h a n gt y 7 sl a b o r a t o r y ( d e p a r t m e n to f b i o c h e m i s t r y , d a r t m o u t hm e d i c a ls c h o o l ，h a n o v e r , n e wh a m p s h i r e0 3 7 5 5 ，u s a ) ， o u rl a b o r a t o r y ( s t a t ek e yl a b o r a t o r yo fm o l e c u l a rb i o l o g y , i n s t i t u t eo fb i o c h e m i s t r y a n dc e l lb i o l o g y , s h a n g h a ii n s t i t u t e sf o rb i o l o g i c a ls c i e n c e s ，c h i n e s ea c a d e m yo f s c i e n c e s ，s h a n g h a i2 0 0 0 3 1 ，c h i n a ) h a sf i r s tr c p o n c dt h et w oh u m a n a c a tg e n o m i c d n a s ，a n di n v e s t i g a t e dt h ee x p r e s s i o n a lr e g u l a t i o no fh u m a n a c a t ig e n e b a s e do n t h ep r e v i o u ss t u d y , t h i sw o r ki sm a i n l yf o c u s e do nt h ea l t e m a t i v es p l i c i n ga n d t i s s u e s p e c i f i c i t yo fh u m a na c a t 2g e n ee x p r e s s i o n ，a n dc l o n i n ga n da n a l y s i so f m o n k e ya c a t le d n a 5 7 - u t r f i r s t l y , w es t u d i e dt h eh u m a n a c a t 2m r n av a r i a n t sf r o ma l t e r n a t i v es p l i c i n g 4 a b s t r a c t a n dt h e i rc o r r e s p o n d i n gi s o e n z y m e s t h eh u m a na c a l 2 g e n es p a n so v e r1 8k ba n d c o n t a i n s1 5e x o n s 砷ei d e n t i f i e de x o u i n t r o nb o u n d a r i e sa g r e ew i t ht h ec o n s e n s u s d i n u c l e o t i d es e q u e n c e sf o rs p l i c ed o n o r ( g t - ) a n da c c e p t o r ( - a g ) s i t e s t h r e eh u m a n a c a t 2m r n av a f i a n bw e r eo b t a i n e db yr t - p c r ，c l o n i n ga n ds e q u e n c i n g s e q u e n c ea n a l y s i ss u g g e s t e dt h a tt h e s et h r e em a t u r e da c a t 2 m r n a sw e r ep r o d u c e d f r o mt h es a m ep r e - m r n ab ya l t e r n a t i v es p l i c i n g , a n dw e r ed e s i g n a t e da sa c a t 2 a , a c a l 2 ba n da c a l 2 cm r n a s r e s p e c t i v e l y t h ef u l l - l e n g t ha c a t 2m r n a , d e s i g n a t e da sa c a i 2 am r n a , c o n t a i n e da l lt h e1 5e x o n s w h i l et h et w on o v e l m r n a v a r i a n t sa c a l 2 ba n da c j 钮2 cm r n a sd i f f e r e df r o mt h ea c a t 2 am r n a b y t h el a c ko ft h ee x o n4 ( a c a l 2 bm r n a ) ，o rt h el a c ko ft h ee x o n s4 - 5p l u s8 - 9 1 0 ( a c a t 2 cm r n a ) w i t h o u ts h i f t i n go r f , r e s p e c t i v e l y a c a t 2 am r n a w a st h es a m e a st h er e p o r t e da c a t 2m r n a ，e n c o d e da5 2 2a m i n oa c i dp r o t e i n ，w h i l ea c a t 2 ba n d a c a t 2 cm r n a s p r e d i c t e dt oe n c o d e5 0 2a n d 3 7 9a m i n oa c i dp r o t e i n sr e s p e c t i v e l y t h r e ee x p r e s s i o np l a s m i d sw e r et h e nc o n s t r u c t e db yi n s e r t i n gt h ec l o n e dh u m a n a c a t 2o r fc d n a si n t ot h ep c d n a 3v e c t o ra n dt r a n s i e n t l yt r a n s f e c t e di n t ot h e m u t a n tc h i n e s eh a m s t e ro v a r yc e l ll i n ea c 2 9w i t h o u te n d o g e n o u sa c a t w e s t e r n b l o ta n a l y s i ss h o w e dt h a tt h et r a n s f e c t e da c 2 9c e l l sh i g l l l ye x p r e s s e dh u m a na c a t 2 a , a c a t 2 ba n da c a t 2 cw i t hd i f f e r e n tm o l e c u l a rw e i i g i n s t h ee n d o g e n o u se x p r e s s i o n o fh u m a na c a t 2i s o f o r m si nh u m a nl i v e ra n di n t e s t i n ec e l ll i n e sw a sa l s oo b s e r v e d b yw e s t e r nb l o t t h i si n d i c a t e dt h a tt h ea l t e r n a t i v e l ys p l i c e dh u m a na c a y 2m r n a v a r i a n t sc o u l de n c o d et w on o v e li s o f o r m sa c a t 2 ba n da c a t 2 ci nt h ec e l l sb e s i d e s t h er e p o r t e df u l l l e n g t hh u m a na c a t 2 a a c o m p a r i s o nb e t w e e nt h en - t e r m i n a la m i n o a c i ds e q u e n c e so fh u m a na c a t 2i s o f o r m ss h o w e dt h a tt h et w on o v e li d e n t i f i e d i s o f o r m sa c a t 2 ba n da c a t 2 el a c k e dap o t e n t i a lc k 2 p h o s p h o r y l a t i o ns i t es l i d l o c a t e da tt h e2 0a m i n oa c i dr e g i o ne n c o d e db ye x o n4w h i c hw a si n - f r a m ed e f i c i e n c y i nb o t ha c a t 2 ba n da c a t 2 cm r n a s 1 1 l e p h o s p h o r y l a t i o na s s a yd e m o n s t r a t e dt h a t a c a t 2 ac o u l db eh i g h l yp h o s p h o r y l a t a b l eb u ta c a t 2 bc o u l dn o t f u r t h e r m o r e ， a c a t a c t i v i t ya n a l y s i si n d i c a t e dt h a tt h ee n z y m a t i ca c t i v i t i e so f t h et w on o v e l a c a t 2i s o e n z y m e sw e r el o w e rt h a nt h a to ft h ef u l l l e n g t ha c a t 2 a , a p p r o x i m a t e l y 2 5 - 3 5 o f a c a t 2 aa c t i v i t y t h i sp h o s p h o r y l a t i o ns i t es l l df o r t h ec k 2h a sb e e n 5 a b s t r a c t f o u n di na l lt h er e p o r t e da c a t s i m p l y i n gt h a tt h ep h o s p h o r y l a t i o na n d d e p h o s p h o r y l a t i o no f a c a t sm i g h t b ei m p o r t a n tf o r t h er e g u l a t i o na c t i v i t yo ft h e s e a l i g o m e r i ca n da l l o s t e r i ce n z y m e s t h e s er e s u l t sw o u l dp r o v i d em o l e c u l a rb a s i st o f u r t h e rs t u d yo nt h er o l eo f a c a ti nc e l l u l a rc h o l e s t e r o lh o m e o s t a s i s s e c o n d l y , w ei n v e s t i g a t e dt h em o l e c u l a rm e c h a n i s mr e s p o n s i b l ef o rt h e t i s s u e s p e c i f i c i t ye x p r e s s i o no fh u m a n a c a t 2 g e n e as e r i e so fc o n s t r u c t sc o n t a i n i n g t h eh u m a na c a t 2g e n ep r o m o t e rr e g i o n sw i t ht h ed i f f e r e n t5 - d e l e t i o n sw e r e g e n e r a t e da n dt r a n s i e n t l yt r a n s f e c t e di n t ou n d i f f e r e n t i a t e da n dd i f f e r e n t i a t e dc a c o 2 c e l l s ，l u c i f e r a s e ( h c ) a c t i v i t ya s s a y si n d i c a t e dt h a tt h er e g i o nr e s p o n s i b l ef o r d i f f e r e n t i a t i o n d e p e n d e n ta c t i v i t yo ft h eh u m a n a c a t 2 p r o m o t e rw a sl o c a t e da tt h e - 9 1 2 一7 6 9b pr e g i o n c o m p u t e ra n a l y s i sr e v e a l e dt h a tf i v ep o t e n t i a le l e m e n t s ，f o u r f o rc d x 2a n do n ef o rh n f l aw e r el o c a t e da tt h i sr e g i o n m o r en o t a b l y , t h ef i r s tt w o p o t e n t i a lc d x 2 e l e m e n t sc o m p l e t e l yo v e r l a p p e dw i t ht h ep o t e n t i a lh n f l ae l e m e n t e l e c t r o p h o r e s i sm o b i l i t ys h i f ta s s a y ( e m s a ls h o w e dt h a tt h et r a n s c r i p t i o nf a c t o r c d x 2a n dh n f l ac o u l df o r ms p e c i f i cb a n d sw i t hh u m a na c a t 2 g e n ep r o m o t e r r e g i o n as e r i a lo fd e l e t i o na n dm u t a t i o nc o n s t r u c t sw e r et h e nm a d e ，h c i f e r a s e a c t i v i t ya s s a y sa n de l a b o r a t ee m s a w e r ep e r f o r m e d ，t h er e s u l td e m o n s t r a t e dt h a t c d x 2a n dh n f l ae l e m e n t si na c a t 2g e n e p r o m o t e rr e g i o nw e r ec r u c i a lf o rt h e d i f f e r e n t i a t i o n d e p e n d e n tp r o m o t e ra c t i v i t y i nu n d i f f e r e n t i a t e dc a c o 一2c e l l sa n d n i h 3 t 3c e l l s ，c o e x p r e s s e dt r a n s c r i p t i o nf a c t o r sc d x 2a n dh n f l ac o u l d s y n e r g i s t i c a l l ye n h a n c et h ew i l d t y p ea c a t 2g e n ep r o m o t e ra c t i v i t y t h e s er e s u l t s t e s t i f i e dt h a tt r a n s c r i p t i o nf a c t o r sc d x 2a n dh n f l aw e r ec r u c i a lf o rh u m a na c a t 2 g e n e p r o m o t e ra c t i v i t y f a r t h e ra s s a y so fr t - p c ra n dw e s t e r nb l o ts h o w e dt h a tt h e e x p r e s s i o nl e v e l so fc d x 2 ，h n f l a a n da c a l 2w e r ea l lh i g l l l yi n c r e a s e dw h e nt h e c a c o - 2c e l l sd i f f e r e n t i a t e dt ob e c o m ei n t e s t i n a l 1 i k ec e l l s i nu n d i f f e r e n t i a t e dc a c o - 2 c e l l s ，t h eh u m a na c a t 2g e n ee x p r e s s i o nw a si n c r e a s e dw h e ne x o g e n o u sc d x 2a n d o r h n f l aw e r ee x p r e s s e db yc o - t r a n s f e c t i o n i nd i f f e r e n t i a t e dc a c o - 2c e l l s 。t h eh u m a n a c a t 2g e n ee x p r e s s i o ns i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e dw h e nt h ee n d o g e n o u sc d x 2o r h n f l c te x p r e s s i o nw a ss u p p r e s s e db yu s i n gr n a it e c h n o l o g y t h e s er e s u l t s 6 s u g g e s t e dt h a tt r a n s c r i p t i o nf a c t o r sc d x 2a n dh n f i a m a d eaf u n c t i o n a le f f e c to nt h e d i f f e r e n t i a t e d - d e p e n d e n te x p r e s s i o no fh u m a na c a t 2g e n ei nt h ei n t e s t i n a lc e l l s b a s e do nt h ea b o v er e s u l t so fh u m a na c a t 2 g e n ee x p r e s s i o ni nh u m a n i n t e s t i n a l t i s s u e sa n dc e l l s ，w ef u r t h e ri n v e s t i g a t e dt h eh u m a na c a t 2g e n ee x p r e s s i o ni nh u m a n l i v e rc e l l sa n dt i s s u e s r t - p c rr e s u l t ss h o w e dt h a th n f l a e x p r e s s i o nc o u l db e d e t e c t a b l ei nh u m a nf i v e rc e l l s ，l i v e rt i s s u e s , t h eh e p a t o c e u u l a rc a r c i n o m a ( h c c ) s a m p l e sa n dt h em a t c h e da d j a c e n tb e n i g nt i s s u e s i nn o r m a lh e p a t o c y t e l i k el 0 2c e l l s a n da d u l th u m a n l i v e r , b o t ht h ec d x 2a n dt h ea c a t 2g e n ee x p r e s s i o nw e r en o t d e t e c t a b l e i nt h eh e p a t o m ac e l ll i n eh e p g 2 ，t h ec d x 2 e x p r e s s i o nw a se l e v a t e d ， a c c o u n t i n gf o ri t se l e v a t e da c a t 2g e n ee x p r e s s i o n r n a ir e s u l t si n d i c a t e dt h a tt h e p r e s e n c eo fp c d x 2 - r n a ia n d o rp h n f l a - r n a is i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e dt h eh u m a n a c a t 2m r n ac o n t e n ti nh e p g 2c e l l s o u to ft h ef o u r t e e nh e p a t o m ac a s e se x a m i n e d ， ah i g hp e r c e n t a g e ( 5 0 ，s e v e no ff o u r t e e n ) o fl i v e rs a m p l e sf r o mp a t i e n t sa f f e c t e d w i t hh c c d i s p l a y e dac o r r e l a t i v er a l a t i o n s h i pb e t w e e nt h ee x p r e s s i o nl e v e l so fc d x 2 g e n ea n da c a t 2g e n e ，t h ee l e v a t e da c a t 2g e n ee x p r e s s i o n sw e r eo b s e r v e di ns e v e n c a n c e rt i s s u e s ，t h er e s u l t sw e r et h es a m ea st h a ti nh e p a t o m ac e l ll i n eh e p g 2 ，a n dn o a c a t 2g e n ee x p r e s s i o nw a sd e t e c t a b l ei nt h es e v e nm a t c h e da d j a c e n tb e n i g nt i s s u e s ， t h er e s u l t sw e r ec o n s o n a n tw i t ht h o s ei nl 0 2e e l li i n e sa n dl i v e rt i s s u e t h er e s u l t s i l l u m i n a t e dt h a tt h ee l e v a t e da c a t 2g e n ee x p r e s s i o ni nc a n c e rl i v e r sd i s p l a y e da c l o s ec o r r e l a t i o nw i t ht h ee c t o p i ce x p r e s s i o ni nl i v e ro fc d x 2 g e n e t h u s ，t h ee l e v a t e d a c a t 2g e n ee x p r e s s i o nm a ys e r v ea san e wb i o m a r k e rf o rc e r t a i nf o r m ( s ) o fh c c m e a n w h i l e ，t h ed i f f e r e n te x p r e s s i o np a t t e r n so fe n d o g e n o u sc d x 2 , h n f l c ta n d a c a t 2g e n ei nv a d o u sc e l l sw e r ei n v e s t i g a t e db yr t - 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