显微镜的使用与调式.doc

显微镜的使用显微镜在使用前，应进行必要的清洁，放置在显微镜前方的实验台上，离桌子边缘3-6 cm为宜，以便使用与观察。一 光学显微镜的构造光学显微镜的构造主要分为两部分：机械部分、光学部分。(一) 机械部分1 镜座 是整个显微镜的基座，用以支持整个镜体的平稳。现在的显微镜在镜座内通常装有照明装置（钨灯）。2 镜筒 连在镜臂前方的圆筒。在镜筒上端装有目镜，下端连接物镜转换器。3物镜转换器(旋转盘) 接在镜筒下端可自由旋转的圆盘，上面装有3-5个不同放大倍率的物镜，转动旋转盘可调换不同放大倍率的物镜。当物镜转到工作位置时，转换器上的卡锁会发出“咔嚓”一声，进入到卡锁内。否则在目镜中就可见光路不正常的图像，无法观察标本。4 调节器 是装在镜臂上的大小两种套在一起的旋钮，大的为粗调旋钮，小的为微调旋钮，转动时可使载物台上下移动，以调节物镜和标本之间的距离，即调节焦距。粗调螺旋转动时上下移动范围较大，能迅速调节物镜与标本的距离使物像呈现于视野中。细调螺旋转动时升降幅度小，一般在用粗调螺旋调焦的基础上或在使用高倍镜时，用它作比较精确的调节，从而得到完全清晰的物像，并能观察标本不同层次和不同深度的结构。5载物台 在镜筒下方的平台，用以放置玻片标本。平台中央有一圆形的通光孔，来自下方的光线经此孔照射到标本上。载物台上装有标本位置调节器，其左侧弯形的弹簧夹是用来固定标本片的，转动右侧两个螺旋能前后左右移动标本。有的推进器上还有刻度，可以计算标本移动的距离和确定标本的位置。(二)光学部分 1目镜 又称接目镜，装在镜筒的上端。在目镜里可安装目镜测微尺。一般常用的目镜倍数为10 X。 2物镜 又称接物镜，装在物镜转换器上，一般有3-4个。物镜是显微镜分辨性能高低的关键部件。通常在物镜上标有主要性能指标放大倍数和镜口率（数值孔径）(如100.25、400.65和1001.25)。 镜口率 (也叫数值孔径，缩写为N.A) 反映物镜分辨力大小的数值，数字愈大，表示分辨力愈高，如40倍物镜的数值孔径为0.65。目镜镜筒物镜转换器物镜载物台聚光器准焦调节钮标本位置调节钮基座视野光圈3聚光器 又称集光器，位于载物台下方的支架上，由聚光镜和孔径光阑组成。利用镜台下方的调节螺旋控制其升降，以调节光线的强弱。也可以用定心调节钮调整聚光器是否处在光路的中心状态。聚光器可以上下调节位置，达到控制光线强弱的目的。当把聚光器稍向下调节时，照片的反差会增加一些。(1) 聚光镜 其作用相当于一个凸透镜，具有会集光线成束以增强照明度的功能。有的聚光器上还安装有摇摆式消色差聚光镜，在使用10倍以上物镜时，不必摇下。在使用10倍以下物镜时，应摇下。否则，由于物镜孔大，聚光器把光路聚得太小，视野就会小，不利于观察。(2) 孔径光阑 位于聚光镜下方，用于调节光路大小的光圈调整环。将使用的物镜的数值孔径与孔径光阑的数值调至吻合状态，可以得到分辨率及反差极其良好的图像，此外焦点的深度也有所增加，即可以增加景深，也就是可以增加图像的立体感。4. 视野光阑 位于基座上，是光线首次进入显微镜时的调节照明范围的光圈。根据所使用的物镜，将光圈调节到与视野外接的程度，这样可以遮断余光，从而获得反差较好的图像。在进行拍照时，将光圈调到此拍照范围稍大的程度，所得效果更为良好。5. 电压调节开关 调节钨灯的电压（0-12伏）开关，用以调节光线的亮度（色温）。当使用的电压高时，照片颜色偏蓝，电压低时，照片颜色偏红。二 聚光器的定心（显微镜使用前的准备） 现在的的显微镜都具有可以卸下的聚光器，所以，在每次使用显微镜的时候，需要把光路的中心调整到视野的中心状态，即聚光器必须位于中心状态。方法如下：1. 用手转动粗调螺旋钮使载物台下降，然后转动物镜转换器使低倍镜（10倍）对准载物台的通光孔(此时物镜与基座应扣合)，把孔径光圈开到最小，同时把视野光圈开到最小。2. 两眼从目镜进行观察，同时，用手慢慢转动粗调螺旋，使载物台上升，当视野中出现光圈的8边形物像时，再调节细调螺旋，直至视野中出现光圈8边形的清晰物像为止。3. 旋转聚光器定心的2个调节钮，使光圈像移至视野的中心部位。4. 慢慢打开视野光圈，使其与视野内接，这表示聚光器已经定心。在实际观察时，可以调节至光圈与视野正好外接；照相时候，调节至光圈与视野正好内接，此时，照片的质量会较好。三、 显微镜的使用1. 打开电源开关ON。在打开电源开关之前要确保电源的电压控制器（调光钮）处在0伏的状态（最基部），然后，再逐渐调高电压到需要的位置，一般调到中间状态，即6伏左右或打开光预置开关ON。2. 转动物镜转换器，将10 X物镜转到工作位置，转换器上的卡锁会发出“咔嚓”一声，进入到卡锁内。3. 在载物台上放置标本片，转动标本位置调节器，是标本移入光路。4. 通过右眼，在右侧的目镜观察，同时调节粗调调节钮，来对准标本的焦点，大体对准焦点以后，再通过微调调节钮进行微调，是图像达到最清楚状态。调整两目镜的目距，使两眼都能够进行观察图像。5. 通过左眼观察，调节左侧目镜上的调整环，对准标本的焦点。此调节是为两眼视力不一致的使用者，调节到两眼都能清楚地观察标本的图像而设计的。6. 先低倍镜（10倍）观察，后高倍镜观察。在低倍镜下观察到标本物像后，如果需要，再把需要放大的部分移至视野正中，并通过微调器，把物像调节到最清晰的状态。7. 将使用的物镜放入光路后，将光量度再调节到最适合观察的程度，然后对准焦点。8. 调节视野光圈，将光圈调节到与视野外接的程度，这样可以遮断余光，从而获得反差较好的图像。9. 调节聚光器上的孔径光阑，使物镜的数值孔径与孔径光阑的数值吻合，一般是调到孔径光阑的数值为物镜数值孔径的60-70%。10. 显微镜使用完毕，转动粗调螺旋下降载物台，取下标本片，转动物镜转换器使物镜离开通光路，然后再上升载物台使接近物镜。11. 把电压控制器（调光钮）调到0伏的状态（最基部），然后，关闭电源开关。12 油镜的使用 （1） 在高倍镜下（40倍）找到所要观察的标本后将需要进一步放大的部分移至视野中心。（2） 把集光器上升到最高位置，孔径光阑开到最大。（3） 转动物镜转换器，移开高倍镜（40 X）。在要观察部位的盖玻片上滴加一滴香柏油作为介质(因香柏油的折射率和玻璃的折射率大致相问)。（4） 用眼观察目镜，转换到油镜位置，转动微调螺旋钮，稍微上升载物台，即能清楚观察到物像。切忌使用粗调螺旋，或在视野中看不到模糊的图像时，一直单方向转动细调旋钮使载物台上升，这样会压碎玻片标本或损坏镜头。 （5） 油镜使用完毕，必须把镜头上的香柏油擦净。先用擦镜纸蘸少许二甲苯将镜头上的大部分油去掉，再用干擦镜纸擦拭。擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周擦。13 显微镜的清洁保持显微镜的清洁，当发现有灰尘或操作使用不慎，使镜头和载物台沾上染料、水滴等，应及时用擦镜纸擦去。光学玻璃镜面只能用擦镜纸或用擦镜纸沾上少量的乙醚(7):乙醇（3）的混合液轻轻擦拭，以免磨损镜面。四、显微照片的拍摄(中成药显微鉴别研究与应用)1.照片清晰度的调节调节聚光镜的上下位置，可以调节照片的反差。太强的光线，会使图像反差减小，照相时光线稍暗一些，可以增加照片的反差，一般建议使用显微镜的拍摄预设设置为好。当观察薄壁细胞等一些较透明的组织特征时或照相时，可将聚光镜向下移动一些距离，使图像灰度变暗，可以增强细节的景深，提高照片细节的清晰度。此外，聚光器上的孔径光阑数值调小一些，也能增加照片的清晰度。如40倍物镜的数值孔径为0.65，孔径光阑数值设置为0.45，效果较好。2. 滤色镜的使用由于钨灯的温度比太阳低，所以钨灯的光线颜色比较红，导致照片颜色发红。此时需要使用滤色镜来消除红色光。建议使用蓝色滤色镜。显微镜的镜座上一般自带有，请把它插入即可。3.照片像素应大于200万尽量多拍摄每个特征的各形状、颜色与大小的照片，保证该显微特征图具有充分的代表性。即使药典未收载的特征，如果会影响成药的显微鉴别，也必须拍照，收入粉末特征中。如药典未收何首乌的木纤维，现在部分何首乌的中心具有较大的木芯，木纤维较多，所以建议增加木纤维的特征照片。4 Photoshop拼图为减少剪切特征的难度，建议使用多边形套索工具。并尽可能地沿显微特征的边缘（一般为细胞壁）挖出需要的显微特征部分，粘贴到Photo