体外诊断试剂生产质量控制要点ppt课件.ppt

体外诊断试剂生产和质量控制要点,主讲人:顾燕黎上海科华生物工程股份有限公司,体外诊断试剂产品介绍,一酶联免疫诊断试剂产品乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）二快速诊断试剂产品人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法）三PCR核酸诊断试剂产品乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）四临床化学诊断试剂产品葡萄糖试剂盒（液体单试剂）（氧化酶法）,一.酶联免疫诊断试剂产品,【产品名称】乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）【包装规格】96人份/盒【预期用途】本试剂盒采用酶联免疫法原理检测HBsAg，适用于血清或血浆类标本。,酶联免疫法反应原理,双抗体夹心法,双抗原夹心法,抗-HBs,抗-HBs-HRP,HBsAg,乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）的原理,采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。,试剂盒组份,主要生产设备,生产工艺流程图,合并,分装,纯化,包被,结酶,纯化,配制,配制,配制,抗-HBs血清,酶标用抗-HBs,抗-HBs-HRP,酶结合物,反应板,包板用单抗-HBs,单抗-HBs腹水,正常人血清、阳性血,阴、阳性对照,显色剂、终止液、洗涤液,TMB、硫酸、吐温20,成品,半成品,滴配,半成品检定,成品检定,外购原辅料控制,原辅料必须从合格供应商目录所载厂家购入。采购的生产用原辅料，均应符合药品的标准、包装材料标准、生物制品规程或其它标准，不得对产品的质量产生不良影响。,自制主要原料生产和质量控制要点,工艺用水抗原抗体酶标记物,基因工程HBsAg生产和质量控制要点,基因工程HBsAg质量标准,效价：ELISA纯度：采用SDS-PAGE功能性实验：阴性对照、阳性对照、阴性参考品符合率、最低检出量、精密性、稳定性蛋白浓度：用双缩脲法测定,单抗-HBs生产和质量控制要点,单抗-HBs质量标准,纯度：采用SDS-PAGE法蛋白含量：采用Lowry法效价：ELISA效价功能性检测：免疫活性、稳定性,多抗-HBs生产和质量控制要点,多抗-HBs的质量标准,纯度：SDS-PAGE法检定蛋白含量：Lowry法效价：对流电泳法测定效价功能性检测：免疫活性、稳定性,多抗-HBs-HRP生产和质量控制要点,辣根过氧化物酶质量标准,溶解性：应符合要求PH值：应符合要求活性测定：应符合要求RZ值：应3.0,多抗-HBs-HRP质量标准,免疫活性稳定性试验,反应板制备生产和质量控制要点,反应板制备,包被液配制质量控制点：包被缓冲液pH测定方法：用pH计测定,反应板制备,反应板的包被质量控制点：包被液量的准确性要求：100l/孔操作：将待包被的微孔反应板放置传送带上，开始包被，每块包被板应用目测法检查其96孔加液是否完整。前10块包被板检查加液量是否准确，检后的包被板放入报废专用盘内，作报废处理。连续100块包被板检查合格后，进入正常包被过程。正常包被过程中每100块包被板应抽1块作过程检查。,反应板制备,反应板的包被质量控制点：反应板包被放置的温度及时间的控制要求：2-8冷库包被过夜。操作：包被板应堆放整齐，并用一次性塑料布覆盖。注明产品名称、批号和时间，放入2-8冷库包被过夜。,反应板制备,反应板的洗涤、加封闭液质量控制点：液量的准确性要求:洗板液量：200l/孔封闭液量：250l/孔,反应板制备,反应板的封闭质量控制点：封闭温度：370.5封闭时间：2小时操作：将加好封闭液的包被板整齐堆放在托盘内，注明批号、封闭开始时间和结束时间，放入恒温房。到达规定时间后，迅速取出包被板，转入下一道工序的生产。,反应板制备,反应板的抽干质量控制点：抽干机的真空度、温度要求：真空度：低于100Pa，维持4小时以上温度：202,反应板制备,铝箔袋的热封质量控制点：房间的湿度：40%铝箔袋的密封性：端面刀封温度2105中封刀封温度2105操作：房间湿度控制：生产操作前提前2小时，打开去湿机进行工作场地去湿，使车间湿度达到40%以下。铝箔袋的密封性：在线袋袋检。,反应板制备,反应板的抽检质量标准：阴性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，不得出现假阳性。阳性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，不得出现假阴性。最低检出量：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，HBsAgadr、adw及ay亚型的最低检出量应符合要求。精密性：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，CV（%）应不高于15%（n=10）。,阴、阳性对照制备的生产和质量控制要点,阴、阳性血清的灭活,要求：灭活时间：1小时温度：60操作：将血清置水浴箱内。随时注意测量血清温度，当血清温度到达60时，开始计时至规定时间止。,阴、阳性对照的配制控制,阴性对照的配制质控点：阴性对照OD值要求：OD值0.050阳性对照的配制质控点：阳性对照OD值要求：OD值1.000,通用试剂制备的生产和质量控制要点,显色剂B的配制,质量控制点：1溶液配制的准确性用pH计测定溶液pH值应符合要求用电导率仪测定溶液电导率应符合要求2配制、分装环境：避光3配制后溶液分装的即时性：12小时内进行分装,显色剂A的配制,质量控制点：1溶液配制的准确性用pH计测定溶液pH值用电导率仪测定溶液电导率2配制后溶液存放：72小时内进行分装,终止液的配制,质量控制点：溶液配制的准确性：用婆美计测定溶液的比重应符合要求,洗涤液的配制,质量控制点：溶液配制的准确性用pH计测定溶液pH值用电导率仪测定溶液电导率,酶结合物制备生产和质量控制要点,半成品检定质量标准,物理检查试剂空白阴性对照阳性对照阴性参考品符合率阳性参考品符合率最低检出量精密性稳定性实验:,试剂的分装、贴签生产和质量控制要点,除菌过滤质量控制点：过滤膜的起泡点实验要求：滤器灭菌12130分钟；0.22m滤芯泡点3.5bar,分装,质量控制点：液量的准确性、试剂瓶的密封性要求：分装液量应大于等于标示量；分装好的试剂瓶应无漏液现象。,贴签,质量控制点：批号打印的准确性要求：批号等打印正确、清晰操作：贴瓶开始后，前30瓶应仔细检查瓶贴质量，包括瓶贴位置，批号等打印是否正确、清晰，粘贴是否牢固、平整等。合格后，每50瓶抽1瓶进行检查。,合并包装生产和质量控制要点,成品检定质量标准,物理检查试剂空白阴性对照阳性对照阴性参考品符合率阳性参考品符合率最低检出量精密性稳定性实验,成品入库,入库控制点：产品放行报告；入库数要求：凭由质量管理部经理签署的成品出厂合格报告，成品检定书办理入库手续，入库数应与成品出厂合格报告中所报数量一致。,P2生物安全实验室管理,人员卫生进入P2实验室必须加穿洁净防护服，带一次性乳胶手套和一次性口罩。只允许工作人员进入，禁止非工作人员进入实验室。生物安全柜实验室的操作严格按操作规程进行操作，对存在感染性或潜在感染性的操作须在生物安全柜内进行。做好相应的消毒、使用记录。消毒及灭菌所有直接或间接接触病原微生物的仪器、设备、器具，均需进行消毒处理，能高压的选择121高压灭菌30分钟处理，不能高压的选择1%次氯酸钠消毒。实验中产生的具有感染性或潜在感染性的穿透性利器废物置入黄色塑料利器盒中，其他非利器废物置入黄色医疗废物塑料袋中。实验室应指定专人负责感染性或存在潜在感染性材料的保藏，做好标识，建立台帐。,二.金标产品,【产品名称】人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗体诊断试剂盒(胶体金法)【包装规格】50人份/盒【预期用途】本试剂盒适用于对人血清/血浆或全血中的(HIV1/2)抗体的快速检测。,金标产品检验原理,本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预包被金标记HIVgp160和gp36抗原等，在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被HIVgp41、gp36混合抗原和抗体等，当检测进行时，样品中HIV抗体可与金标记HIV抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿试纸条向前移动。若样品中含有可被检测的HIV抗体，则与检测线预包被的HIV抗原结合形成“金标记HIV抗原HIV抗体HIV包被抗原”复合物而凝聚显色；若样品中没有HIV抗体或HIV抗体的含量低于检测限时，则不形成复合物而不显色。,主要组成成份,HIV(1/2)抗体胶体金试纸条/板50Tests样品稀释液（磷酸盐缓冲液）1瓶4.0ml/瓶说明书1份,2019/12/14,49,可编辑,金标产品主要生产设备,金标产品生产工艺流程图,氯化金,胶体金,标记抗原HIVgp36HIVgp160,金标记抗原,金反应垫,烧金,标金,喷金,干燥,包被抗原HIVgp36A抗原,检测线包被液,抗HIVgp160单抗,质控线包被液,配制,配制,反应膜,划膜,干燥,试纸大板,组装,试纸条,切割,试纸板,封装,氯化钠等,配制,样品稀释液,待检成品,合并,出厂成品,检定,滴配,滴配,检定,半成品检定,半成品检定,成品检定,分装、帖签,物料,质控点,工序,关键工序,gp160抗原制备的生产和质量控制,gp160抗原质量标准,物理性状：为澄清溶液纯度：采用SDS-PAGE分子量：免疫活性稳定性,gp36抗原制备的生产和质量控制,gp36抗原质量标准,纯度分子量功能性试验稳定性,gp41抗原制备的生产和质量控制,gp41抗原质量标准,纯度：采用SDS-PAGE法检定应符合要求分子量功能性试验稳定性,抗HIV单抗制备的生产和质量控制,单抗质量标准,纯度分子量功能性检测稳定性试验：37放置15天，检测上述标本，可达到上述功能性检测标准。,金反应垫制备的生产和质量控制要点,金反应垫的制备,胶体金的制备控制点：胶体金颜色、波长的控制要求：胶体金颜色：红色；波长：5284nm,金反应垫的制备,金标抗原的制备质量控制点：GP160和GP36抗原标记时pH值、颜色、波长的控制要求：用PH计测定，pH值：6-7；颜色：红色波长：5334nm,金反应垫的制备,滴配质量控制点：金标抗原的灵敏度和特异性要求：通过HIV快速诊断试剂国家参考品测定方法：适当地调整两种金标抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。用HIV快速诊断试剂国家参考品检验，应符合要求。,金反应垫的制备,喷金质量控制点：包被液量的准确性要求：2l/mm方法：将待包被的玻璃纤维放置于面板，开始包被，每张玻璃纤维应用目测法检查加液是否完整。连续5张玻璃纤维检查合格后，进入正常包被过程。正常包被过程中每100张金反应垫应抽1张作过程检查。,金反应垫的制备,金反应垫的抽干质量控制点：真空度、时间的控制要求：真空度：低于100Pa时间：维持2小时以上,金反应垫的保存质量控制点：金反应垫的存放要求：避光、干燥（湿度30%）操作：用目测法检测保存金反应垫的铝箔袋的密封性。存放金反应垫的干燥柜每天监测湿度2次。,金反应垫的制备,金反应膜制备生产和质量控制要点,金反应膜制备,质控线包被液的配制控制点：包被缓冲液pH值及包被浓度要求：包被缓冲液pH值：用pH计测定包被浓度：用核酸蛋白仪检测其蛋白浓度应符合要求,金反应膜制备,检测线包被液的配制质量控制点：包被缓冲液pH值及包被浓度要求：包被缓冲液pH值：pH计测定包被浓度：用核酸蛋白仪检测其蛋白浓度应符合要求,金反应膜制备,包被抗原滴配控制点：包被抗原滴配的灵敏度和特异性要求：通过HIV快速诊断试剂国家参考品测定方法：适当地调整抗原的浓度和比例，比较灵敏度和特异性结果，确定最佳的工作浓度。用国家参考品检验，应符合要求。,金反应膜制备,划膜包被控制点：点样量、质控线及检测线间距要求：点样量0.5-1.5l/mm；两线间距5-6.5mm操作：将待包被的硝酸纤维素膜放置于轨道，用卡尺检测质控线和检测线出样管的间距，符合要求后开始包被。观察包被液体出样情况，连续5分钟无异常，则进入正常包被过程。正常包被过程中每卷金反应膜抽1张进行检查。,金反应膜制备,金反应膜的抽干质量控制点：真空度、时间的控制要求：真空度：低于100Pa时间：维持2小时以上,金反应膜制备,金反应膜的保存控制点：金反应膜存放要求：避光、干燥（湿度30%）操作：用目测法检测保存金反应膜的铝箔袋的密封性。存放金反应膜的干燥柜每天监测湿度2次。,样品稀释液制备生产和质量控制要点,样品稀释液的配制质量控制点：pH值要求：用pH计进行测量,试纸大板的组装及分装生产和质量控制要点,试纸大板的组装及分装,试纸大板的装配质量控制点：加样垫、金反应垫、金反应膜、吸水纸等各组分应衔接紧密,试纸大板的组装及分装,试纸条的切割质量控制点：试纸条切割宽度要求：3002mm*8mm,试纸大板的组装及分装,CT盒的组装质量控制点：应检查试纸条的完整性,试纸大板的组装及分装控制,装铝箔袋质量控制点：铝箔袋应密封,样品稀释液的配制、分装及贴签,合并包装的生产和质量控制要点,质量控制点：1.包装盒的批号打印准确、清晰。2.合并组分的齐全性，物料的损耗是否符合规定要求。,成品检验质量标准,外观：试纸条外观平整，材料附着牢固。每条宽不小于3mm。物理检查：膜面无破损、划痕。阴性参考品符合率：应符合要求阳性参考品符合率：应符合要求最低检出限参考品符合率：应符合要求精密性试验：应符合要求滤血功能：应符合要求稳定性试验：试剂盒各组分置3715天，应符合性能要求。,三.PCR核酸诊断试剂产品,【产品名称】乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）【包装规格】32人份/盒【预期用途】本试剂盒采用PCR技术、实时荧光探针技术、用于对临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸DNA的定量检测。,PCR诊断试剂的原理,本品系由乙型肝炎病毒特异性引物、荧光探针、以及Taq酶等成分组成，采用PCR体外扩增的方法，用过荧光信号的变化，定量检测人血清或血浆标本中的HBVDNA。,【试剂盒组份】,生产工艺流程图,PCR产品生产和质量控制要点,工作标准品的定标,根据测定的HBV质粒含量，取适量HBV质粒用模拟血清稀释后，以质控参考品为标准进行标定，使最终稀释浓度为约107Copies/ml，即为工作标准品