药物的含量测定方法与验证

1,第四章 药物的含量测定方法与验证,药物分析教研室,2,内容提要,第一节 定量分析方法的分类与特点第二节 样品分析的前处理方法第三节 药品质量标准分析方法验证,3,第一节 定量分析方法的分类与特点,含量测定常用的方法 容量分析法(滴定法) 光谱分析法 色谱分析法,4,一、容量分析法（滴定法）方法：特点：方法简便易行：价廉、简便、快速；方法耐用性高准确度高（RSD0.2%）：适用于对准确度要求较高的试样分析。专属性差适用范围：化学原料药物的含量测定。,第一节 定量分析方法的分类与特点,5,一、容量分析法有关计算滴定度T （mg/ml）：每1 ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量。 被测物 WA=TVB,第一节 定量分析方法的分类与特点,6,1、滴定度的计算滴定反应：aA (被测药物)+bB(滴定剂)cC+dD,m:滴定剂摩尔浓度；M被测物摩尔质量；a/b:反应摩尔比,第一节 定量分析方法的分类与特点,7,2. 含量测定,直接滴定法,生成物滴定法,剩余量滴定法,(1),(2),(3),第一节 定量分析方法的分类与特点,8,(1) 直接滴定法,注意掌握滴定反应的原理, 药物与滴定剂在反应中的摩尔比，正确计算滴定度和百分含量,浓度校正因子,9,例：阿司匹林的含量测定,精密称取本品0.4018g，加中性乙醇20ml溶解后，加3滴酚酞指示剂，用NaOH滴定液（0.1002mol/L）滴定，消耗体积为22.20ml，求阿司匹林的含量？（ch.p每1ml 0.1mol/L 的NaOH滴定液相当于18.02mg的阿司匹林）,(1) 直接滴定法,10,解：精密称取供试品Ws=0.4018g,NaOH实际浓度0.1002mol/L，则F=0.1002/0.1=1.002,消耗的NaOH滴定液体积：V样=22.20ml,阿司匹林含量=,(1) 直接滴定法,11,(2) 生成物滴定法,注意药物与生成物B，生成物B与滴定剂之间的化学计量关系，正确计算滴定度。,药物与A作用生成B, 用滴定液滴定B,百分含量计算方法与直接滴定法相同,12,（3）回滴定（剩余滴定）法,（a）不做空白试验时百分含量计算,VA 定量加入滴定液A的体积(ml)VB 滴定液B在回滴中消耗的体积(ml)FA 滴定液A的浓度校正因数FB 滴定液B的浓度校正因数TA 滴定液A的滴定度W 供试品称取量,13,（3）回滴定（剩余滴定）法,（b）做空白试验时百分含量计算,VB0 空白实验消耗滴定液B的体积VBS 样品实验消耗滴定液B的体积FB 滴定液B的浓度校正因数TA 滴定液A的滴定度W 供试品称取量,14,司可巴比妥钠含量测定: 本品约0.1g, 加水10ml溶解, 精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml, 再加盐酸5ml, 放置15分钟, 加碘化钾试液10ml, 用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定, 滴定的结果用空白试验校正,W=0.1022g; 硫代硫酸钠滴定液 F=1.038; 供试品消耗硫代硫酸钠滴定液15.73ml;空白23.21ml,15,滴定度,司可巴比妥钠M=260.27, 与溴摩尔比为1:1,16,（一）紫外-可见分光光度法（二）荧光分析法（三）红外分光光度法（四）原子吸收分光光度法（五）火焰光度法,二、光谱分析法,17,（一）紫外可见分光光度法,根据物质对波长为200760 nm这一范围的光吸收特性建立起来的一种定性、定量和结构分析的方法。,二、光谱分析法,18,1. 基本原理,Lambert -Beer定律,百分吸光系数( )：当溶液浓度c为1%(g/ml)、液层厚度(l)为1cm时的吸光度(A)。,物质对光的选择性吸收波长及相应的吸收系数是该物质的物理常数。,二、光谱分析法,19,2.特点与适用范围,特点：简便易行：仪器价格低廉、操作简便、易于普及灵敏度高，10-4 10-7g/ml准确度高,RSD=2-5%专属性较差适用范围：多用于药物制剂的定量检查，如片剂的溶出度或含量均匀度检查。,二、光谱分析法,20,（1）波长准确度校正标准汞灯中的较强谱线237.83、253.65、275.28、296.73、313.16、334.15nm等氘灯中:486.03nm,656.10nm,3. 仪器的校正和检定,二、光谱分析法,21,（2）吸光度的准确度校正60mg重铬酸钾用0.005mol/L的硫酸溶液稀释至1000ml，在规定波长处测定并计算吸收系数，与规定值比较。规定值：235nm 123.0126.0 257nm 142.8146.2 313nm 47.050.3 350nm 105.5108.5,二、光谱分析法,22,（3）杂散光检查规定试剂、浓度及在规定的波长处测定相应透光率。 碘化钠1.00（1g/ml）220nm 0.8%（透光率） 亚硝酸钠5.00（1g/ml）340nm 0.8（透光率）（4）吸收池校正 两吸收池测定的差值小于1%,二、光谱分析法,23,4、测定条件,（1）对溶剂的要求：注意溶剂的截止波长。,（2）测定波长的确证,（3）供试品溶液浓度应使测得的吸光度在0.30.7之间,二、光谱分析法,24,5、含量测定,(1) 对照品比较法,Cx：供试品溶液的浓度Ax：供试品溶液的吸光度CR：对照品溶液的浓度AR：对照品溶液的吸光度,A. 待测物与对照品在相同条件下测定(仪器、溶剂、波长)B. 供试品溶液与对照品溶液浓度相近,二、光谱分析法,25,5、含量测定,(1) 对照品比较法,原料药百分含量的计算公式：,D：稀释体积W：供试品取样量,二、光谱分析法,26,5、含量测定,(1) 对照品比较法,制剂含量测定结果的计算公式：,D：稀释体积W：供试品取样量,27,5、含量测定,(1) 对照品比较法,制剂含量测定结果的计算公式：,W(V)：平均片重(装量)W：供试品取样量B：制剂的标示量,固体制剂,液体制剂,28,5、含量测定,(2) 吸光系数法,Cx：供试品溶液的浓度Ax：供试品溶液的吸光度 ：对照品溶液的浓度,A. 用本法测定时，吸光系数通常应大于100；B. 注意仪器的校正与检定,29,5、含量测定,(2) 吸光系数法,原料药百分含量的计算公式：,30,精密称取贝诺酯0.1500g，置于100ml的量筒中，加无水乙醇适量，振摇微热溶解后放冷，加无水乙醇稀释至刻度摇匀，过滤，精密量取5ml至1000ml量筒中加水至刻度，用紫外分光光度法在240nm波长处测定吸收度为0.5585，已知本品240nm处标准给定吸收系数 为745。求贝诺酯百分含量,31,32,盐酸氯丙嗪片剂的含量测定：取本品20片，精密称定为8.100g，研细，精密称取0.4800g片粉，置于500ml量瓶中，加酸及水溶解并稀释至刻度，取上清液5.00ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，在254nm测得吸收度为0.540，另取盐酸氯丙嗪对照品，配成6.0g/ml的对照品溶液，同法在254nm处测的吸收度为0.564，标示量为50mg/片，计算标示量百分数？,33,B=50 mg/片=0.050g/片,34,维生素B1注射液含量的测定：精密量取本品（规格2ml：50mg）2ml，置200ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，照紫外-可见分光光度法（附录 A），在246nm的波长处测得吸光度为0.521，按维生素B1 的吸收系数（ ）为421，计算本品相当于标示量的百分含量,35,36,（二）荧光分析法,利用物质的荧光特性进行定性与定量测定的方法称为荧光分析法。,荧光发射光谱（荧光光谱）,荧光激发光谱（激发光谱）,37,1.特点与适用范围,特点：高灵敏度：10-12 10-10g/ml，较UV-Vis高荧光自熄灭：溶液中荧光物质浓度太大时，会有“自熄灭”作用，因此荧光分析法应在低浓度溶液中进行易受干扰：干扰因素多，必须做空白试验适用范围：,（二）荧光分析法,38,2.干扰及排除,(1)溶剂空白试验(2)溶液： 药物浓度不宜过高，悬浮物过滤，溶氧通惰性气体除去溶液pH。(3)玻璃仪器及测定池高度洁净 (4) 温度：控制测定温度,（二）荧光分析法,39,3.测定方法与含量计算,在一定实验条件时，在较稀浓度范围内药物的荧光强度与溶液中该物质的浓度成正比。,对照品比较法,（二）荧光分析法,40,利用物质在流动相与固定相两相中分配系数差异而得以分离，并在检测中能检出其信号，从而达到分离、分析的一类分析方法。,色谱分析法是分析混合物的最有力手段。,三 色谱分析法,41,1.特点与适用范围,特点：高灵敏度：10-15 10-12g/ml，高专属性：高效能与高速度：适用范围：广泛应用于药物制剂的含量测定，尤其是复方制剂含量测定的首选方法。,三 色谱分析法,42,2.分类,依据分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与分子排阻色谱等。依据分离方式：HPLC、GC、TLC等,三 色谱分析法,43,Ch.P各品种项下的色谱条件,固定条件,固定相种类,流动相组成,检测器类型,可变条件,色谱柱内径、长度,流动相各组成的比例、流速,检测器的灵敏度,柱温、进样量,系统适用性,（一）高效液相色谱法(附录),44,1. 对仪器的一般要求,填充剂常用十八烷基硅烷键合硅胶（C18）离子交换色谱离子交换填充剂分子排阻色谱凝胶或高分子多微球填充剂检测器：紫外检测器最常用。荧光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器等。,（一）高效液相色谱法(附录),45,1. 对仪器的一般要求,流动相：反相色谱系统首选甲醇-水系统；采用紫外末端波长检测时，首选乙腈-水系统。,（一）高效液相色谱法(附录),46,2. 系统适用性试验,指用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液对色谱系统进行试验，应符合要求。包括理论板数（n）、分离度（R）、拖尾因子（T）和重复性等四个指标。,（一）高效液相色谱法(附录),47,2. 系统适用性试验,（1）色谱柱的理论板数(n)：用于评价色谱柱的分离效能。一般为待测组分或内标物质的理论板数。,色谱柱的理论板数越多，柱效越高。,（一）高效液相色谱法(附录),48,2. 系统适用性试验,（2）分离度（R）：用于评价待测组分与相邻共存无或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能的关键指标。,除另有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5。,（一）高效液相色谱法(附录),49,2. 系统适用性试验,采用外标法时，取对照溶液，连续进样5次，峰面积RSD应2.0%；采用内标法时，配制相当于80%、100%、120%的对照液，加入规定的内标，分别进样3次，计算平均校正因子，RSD亦应2.0%。,（3）重复性：用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复性能。,（一）高效液相色谱法(附录),50,2. 系统适用性试验,（4）拖尾因子(T)：用于评价色谱峰的对称性。,除另有规定外，用峰高定量时T应在0.95 1.05之间。,（一）高效液相色谱法(附录),51,（1）内标法,对照品+内标物对照溶液，进样，测定，计算校正因子,3. 测定法,供试品+内标供试品溶液，进样，测定供试品和内标物质的峰面积或峰高，计算含量,（一）高效液相色谱法(附录),52,（2）外标法,供试品供试品溶液对照品对照品溶液进样，测定，计算含量,缺点：不易精确控制进样量，宜用定量环或自动进样,（一）高效液相色谱法(附录),53,HPLC主要用于抗生素、生化药品及含杂质干扰测定的化学药品。广泛用于药物制剂及多组分的含量测定。 在药典中收载率呈大幅度上升趋势。,（一）高效液相色谱法(附录),54,（二）气相色谱法,GC 用于本身具挥发性，或加热气化的供试品的测定。如维生素E,1. 对GC仪器一般要求 载气为氮气；色谱柱为填充或毛细管柱固定液：甲基聚硅氧烷、聚乙二醇检测器：氢火焰离子化检测器 进样方式：溶液直接进样或顶空进样。,55,2. 系统适用性试验,除另有规定外，应照HPLC项下的规定。,3. 测定方法手动进样内标法定量自动进样外标法定量标准加入法可消除基质效应的影响,（二）气相色谱法,56,小结,化学原料药的含量测定容量分析法；制剂的含量测定色谱分析法；制剂的定量检查(溶出度、含量均匀度的检查)光谱分析法；,57,第二节 样品分析的前处理方法,概述分析前要采用一定的方法，使待测药物或待测元素转化为适宜的状态后再进行分析测定。前处理的目的是消除干扰，保护仪器，提高方法的准确度、精密度、选择性和灵敏度。样品前处理是分析检测的关键环节 。,58,前处理对象：1. 含金属（Ca、Fe、Hg、Zn）2. 卤素（F、Cl、Br、I）、N、P、S等,第二节 样品分析的前处理方法,59,1.含卤素有机药物1）卤素与脂肪链的碳原子相连，结合不牢固； CCl3C(CH3)2OH2)卤素与芳环相连，结合牢固。,样品前处理分类,泛影酸,第二节 样品分析的前处理方法,60,2.含金属的药物1)有机金属药物：金属原子直接与碳原子以共价键相连，结合比较牢固，如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利,样品前处理分类,第二节 样品分析的前处理方法,61,2.含金属的药物2)含金属的有机药物：金属原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物，溶液中能直接离解出金属离子。 如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁,样品前处理分类,第二节 样品分析的前处理方法,62,根据卤素或金属在分子中结合牢固程度不同处理方法而异。,不经有机破坏结合不牢固经有机破坏结合牢固,前处理方法,样品前处理方法,第二节 样品分析的前处理方法,63,1.直接测定法； 2.经水解后测定法； 3.经氧化还原后测定法。,不对药物分子的有机结构部分进行完全破坏通过选用适当溶剂溶解或经简单回流处理，使待测元素电离、离解，转化为无机离子进行测定，适用于含金属有机药物或结合不牢固的含卤素药物的分析。,一、不经有机破坏的分析方法,64,1.直接测定法适用于金属离子药物溶解后，可直接进行滴定如：葡萄糖酸钙的含量测定,一、不经有机破坏的分析方法,65,2.经水解后测定法（1）碱水解后测定法 适用于卤素原子与脂肪链的碳原子相连，结合不牢固的药物。,一、不经有机破坏的分析方法,66,CCl3C(CH3)2OH 三氯叔丁醇溶于NaOH溶液加热回流使其水解，将有机结合的卤素，经水解作用转变为无机的卤素离子，然后选用间接银量法进行测定。,一、不经有机破坏的分析方法,67,2.经水解后测定法（2）酸水解后测定法 将含金属的有机药物与适当的酸共热，将不溶性的金属盐类，水解置换为可溶性盐，然后用配位滴定或剩余酸碱滴定法,一、不经有机破坏的分析方法,68,硬脂酸镁硬脂酸镁与定量硫酸共沸，水解生成硬脂酸和硫酸镁，剩余的酸以氢氧化钠滴定,一、不经有机破坏的分析方法,69,3.氧化还原后测定法 卤素结合于苯环，结合牢固，在碱性(或酸性) 条件下加还原剂锌粉，加热回流。形成无机卤化物后用测定。如：泛影酸含量测定。,一、不经有机破坏的分析方法,70,曙红为吸附指示剂,黄色,玫瑰红色,例：泛影酸的含量测定,银量法,71,含氮、硫、磷有机药物及有机金属药物中待测离子与碳原子结合牢固，用上述方法难以成为无机的化合物，此时必须采用有机破坏的方法，使之转变为无机化合物，方可进行测定。,二 经有机破坏的分析方法,（一）湿法破坏法（二）干法破坏法,72,（一）湿法破坏法 主要采用强酸进行有机破坏，将有机结合的待测元素转变为可测定无机化合物。本法可用于生物制品中氮、磷或金属元素的测定。 根据所用试剂试剂不同，可分为： 1）硝酸高氯酸法 2）硫酸硫酸盐法 3）硝酸硫酸法 4）其他湿法,二 经有机破坏的分析方法,73,例：凯氏定氮法以硫酸-硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量分析方法。 适用于含氮有机药物的前处理。,二 经有机破坏的分析方法,74,1.原理：供试品,NH4HSO4+(NH4)2SO4,2NaOH+(NH4)2SO4,Na2SO4+2NH3+2H2O,NH4HSO4+NaOH,NaHSO4+NH3 +H2O,H2SO4,吸收：2%硼酸溶液吸收液,凯氏定氮法,75,（1）消解（凯氏烧瓶中进行）操作将样品、H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凯氏烧瓶中一起加热，使被测有机物含氮化合物中的N全部转化为铵盐的形式 (NH4)2SO4、NH4HSO4,2.测定法分为3个步骤消解、蒸馏吸收、滴定,凯氏定氮法,76,消解中各试剂作用H2SO4氧化剂和炭化剂，生成SO2和H2OK2SO4提高H2SO4沸点缩短消解时间CuSO4催化剂，使消解速度加快消解产物(NH4)2SO4、NH4HSO4分解完全的依据是分解液应为无色或绿色,凯氏定氮法,77,（2）蒸馏与吸收蒸馏：消解液加入40%的NaOH溶液后蒸馏,凯氏定氮法,78,（3）滴定直接滴定法滴定液：H2SO4滴定液（0.05mol/L） 每1ml的0.05mol/L H2SO4=1.401mg的氮指示剂：甲基红溴甲酚绿混合指示剂 终点颜色：蓝绿色灰紫色,NH3+H3BO3,NH3H3BO3,(NH4)2SO4+2H3BO3,NH3H3BO3+H2SO4,传递作用,凯氏定氮法,79,（3）滴定剩余滴定法吸收液 将蒸馏出来的NH3用定量、过量的标准盐酸或硫酸吸收，过量的酸用标准碱溶液滴定。,凯氏定氮法,80,81,凯氏定氮法可分为： 第一法（常量法）含氮量2530mg H2SO4滴定液（0.05mol/L） 第二法（半微量法）含氮量1.02.0mg H2SO4滴定液（0.005mol/L）,凯氏定氮法,82,（二）干法破坏 适用于含卤素、硫、磷等有机物的前处理，亦可用于含硒、砷盐药物的测定。1、高温炽灼法2、氧瓶燃烧法,三 经有机破坏的分析方法,83,1、高温炽灼法主要用于含卤素药物的鉴别。本法将有机药物经高温灼烧灰化，使有机结构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性的无机盐。将适量样品置坩埚中，常加入无水Na2CO3、Mg(NO3)2、Ca(OH)2、ZnO等辅助灰化，混合均匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入高温炉中灼烧，使其灰化完全。,（二）干法破坏,84,（1）原理 将有机药物放入充满氧气的密闭烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的待测物质吸收在适当吸收液中，然后根据待测物质的性质，采用适当分析方法进行鉴别、检查或含量测定。 适用于含卤素及硫、磷、硒等药物的鉴别、检查和含量测定。,2、氧瓶燃烧法,85,（2）仪器装置,86,容量大小随样品量而定，一般500ml、1000ml。取样量通常为1020 mg，使用500 ml燃烧瓶。含氟药物用石英或聚氯乙烯制成的燃烧瓶。,硬质玻璃碘瓶,2、氧瓶燃烧法,87,铂丝瓶塞底部熔封一根铂丝，铂丝下端做成螺旋状，长度约为瓶身的2/3；铂丝作用 a.固定样品 b.催化作用使样品分解完全,2、氧瓶燃烧法,88,无灰滤纸,样品研细后放中间，按照虚线折叠固定于铂丝下端螺旋处。,2、氧瓶燃烧法,89,称样用材料及称样 A. 固体样品 无灰滤纸 B. 液体样品 纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹,2、氧瓶燃烧法,90,（4）操作取样1020mg，放入滤纸包好,加吸收液、通氧,燃烧,吸收,测定,2、氧瓶燃烧法,91,（5）注意事项 氧气要充分使样品燃烧完全，燃烧完全时没有黑色炭化物。,样品燃烧时，温度很高，燃烧瓶内压力很大，有爆炸的可能性，必须采取防护措施。,防爆,2、氧瓶燃烧法,92,吸收液定量吸收待测元素各种价态并转化为单一价态。 根据被测物种类及分析方法选择: H2O、H2O-NaOH、H2O-NaOH-H2O2吸收完全:一般振摇30min，燃烧瓶看不到烟雾。,吸收液选择,Cl-、F- 白色烟雾Br- 棕色、I- 紫色,2、氧瓶燃烧法,93,含卤素药物的燃烧产物氟化物、氯化物,氟或氯以离子状态存在，可选用水或水-氢氧化钠吸收后可直接测定。,2、氧瓶燃烧法,94,含卤素药物的燃烧产物溴化物,燃烧后以溴化氢和单质溴的混合物存在，可在水-氢氧化钠吸收液中加SO2饱和溶液还原Br2Br-,2、氧瓶燃烧法,95,含卤素药物的燃烧产物, 碘化物,银量法 I-+Ag+ AgI 水-氢氧化钠-SO2饱和溶液碘量法 I2+2S2O32- S4O62-+2I-水-氢氧化钠溶液吸收，用溴-醋酸溶液氧化为IO3- 再用KI还原为I2,2、氧瓶燃烧法,96,含硫药物的燃烧产物,2、氧瓶燃烧法,97,含磷药物的燃烧产物,2、氧瓶燃烧法,98,含硒药物的燃烧产物,与二氨基萘反应生成绿色荧光物质 比色法测定含量,2、氧瓶燃烧法,99,实例碘苯酯的含量测定,原理：有机碘化物，用氧瓶燃烧分解为碘化物，再 被氧化为游离碘后被吸收液吸收,2、氧瓶燃烧法,100,燃烧吸收（NaOH+H2O）,加入溴醋酸氧化剂,将I-、I2氧化为IO3-,2NaI+Br2=2NaBr+I2,I2+5Br2+6H2O=2HIO3+10HBr,2、氧瓶燃烧法,101,加入甲酸除去过量的溴,加KI还原,滴定,至淀粉指示剂蓝色消失,2、氧瓶燃烧法,102,第三节 药品质量标准分析方法验证,分析方法验证目的：证明采用的分析方法准确、可靠。（能反应真实测定结果）,分析方法验证应用对象1.研究新药制定质量标准需对分析方法进行验证；2.药物生产工艺变更、制剂组分变更、原分析方法修订时需对质量分析方法进行验证；3.发表研究论文对建立的分析方法进行验证。,103,需验证的项目,验证的内容,准确度,定量限,防腐剂溶出度,释放度,鉴别试验,杂质检查,含量测定,精密度,专属性,检测限,线性,范围,耐用性,重复性中间精密度重现性,第三节 药品质量标准分析方法验证,104,一、准确度（accuracy） 测量值与真实值接近的程度 表 示: 回收率 测定方法：回收试验 加样回收试验,105,（一）含量测定方法的准确度 1、原料药,回收试验：,空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M,一、准确度（accuracy）,106,加样回收试验：,已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。,（一）含量测定方法的准确度 1、原料药,一、准确度（accuracy）,107,原料药 （1）可用已知纯度的对照品或样品进行测定（2）用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。,一、准确度（accuracy）,108,制剂空白辅料加入已知含量的对照品，加入量为已知制剂浓度的80%、100%、120%；每一浓度测3份 n=9,2、 制剂（1）模拟处方法: 即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。,一、准确度（accuracy）,109,（2）标准添加法: 如不能得到制剂的全部组分，可向已知含量制剂定量中加入被测物对照品进行测定。,加入已知纯度对照品量为已知含量制剂浓度的80%、100%、120%，每一浓度测3份 n=9,一、准确度（accuracy）,110,（2）标准添加法: 如不能得到制剂的全部组分，可向已知含量制剂定量中加入被测物对照品进行测定。（3）另一个已建立准确度的方法比较结果。,一、准确度（accuracy）,111,3. 中药分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在95105%范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在90110%范围内。RSD一般在3%以内。,一、准确度（accuracy）,112,（二）杂质定量测定的准确度,（1）可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。 （2）如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。,一、准确度（accuracy）,113,（三）数据要求,规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。,一、准确度（accuracy）,114,二、精密度(precision),精密度(precision) 在规定的测试条件下，同一个均匀样品经多次（n5）测定所得结果彼此符合程度。主成分含量测定杂质定量,115,方法的精密度以三种形式表达 1. 重复性； 2. 中间精密度； 3. 重现性,二、精密度(precision),116,1. 重复性（repeatability） 在相同条件，由同一个分析者连续测定所得结果的精密度。也称批内精密度或日内精密度。,二、精密度(precision),117,2. 中间精密度指同一实验室，不同的时间由不同分析者或使用不同仪器进行测定所得结果的精密度。由同一分析者用同一设备在不同时间测定所得结果的中间精密度通常称为批间精密度或日间精密度。中间精密度是考察随机变动因素对精密度的影响，根据方法使用的环境，变动因素一般包括日期、分析者、仪器等。,二、精密度(precision),118,3.重现性（reproducibility）指在不同实验室由不同分析者测定结果的精密度。通过实验室之间的试验来评价。法定标准采用的分析方法，应进行重现性试验。,二、精密度(precision),119,精密度的评价以标准差SD；相对标准差RSD表示,二、精密度(precision),120,精密度实验结果的RSD允许值 容量分析法 0.2% 重量分析法 0.5% 氧瓶燃烧法、凯氏定氮法 0.5% 紫外、原子吸收分析法 1% HPLC、GC、TLC分析法 2%,数据要求同“准确度”,二、精密度(precision),121,(一) 鉴别反应 空白, 结构相似物或有关物质呈负反应,(二) 含量与杂质测定 含杂质或降解产物的试样中各峰能获得分离,在其他成分(杂质,降解产物,辅料等)可能 存在下,方法能正确测定出被测物的特性 鉴别,杂质检查和含量测定方法,定义与应用,三、专属性(specificity),122,指HPLC法含量测定专属性试验图谱,对照品,样品,空白,三、专属性(specificity),123,四、检测限(limit of detection, LOD),检测限(limit of detection, LOD)指试样中被测物能被测出的最低浓度或最小量LOD是一种限度检验的效能指标，它既反映分析方法与仪器的灵敏度和噪音大小，也表明样品经处理后空白值的高低。杂质的限度检查和鉴别试验。测定数据大于6样本。,124,杂质斑点,点样原点,5g/ml,10g/ml,20g/ml,适用于可用目视法直接评价结果的分析方法, 非仪器分析法通过对一系列已知浓度的对照品进行测定，试验出能被准确地检测出最低浓度或最小量。 鉴别的显色法;杂质检查的TLC,1.目视法,四、检测限(limit of detection, LOD),125,2. 信噪比法适用于能直观显示信号与基线噪声水平的分析方法, 如HPLC法 。信噪比S/N=3(2)时的相应浓度或注入仪器的量确定。通过比较含已知低浓度被测物的样品与空白样品的测试信号，确定被测物可以检测出的最低浓度或最小量。,四、检测限(limit of detection, LOD),126,2. 信噪比法,四、检测限(limit of detection, LOD),127,f: 校正因子C样: 低浓度样品溶液的浓度值A样：低浓度样