【毕业学位论文】（Word原稿）不同精粗比日粮泌乳奶牛氮素代谢及限制性氨基酸的研究动物营养与饲料科学博士论文

密级 论文编号 中国农业科学院 博士学位论文 不同精粗比日粮 泌乳奶牛氮素代谢 及限制性氨基酸的研究 on on 摘 要 本研究在调查我国奶牛养殖 模式 基础上， 研究 不同精粗比典型日粮 蛋白质 、 氨基酸营养供应 和利用 状况，分析限制性氨基酸种类和程度，为完善我国奶牛蛋白质营养需要体系 ， 提高奶业生产技术水平 ， 指导和推动奶业健康发展积累经验和数据。 本论文首先利用四头三位点瘘管奶牛研究了简单 T 型 十二指肠 瘘管食糜流量监测 方法 。结果表明通过简单 T 型瘘管所采集的十二指肠食糜样品不具代表性。可以将食糜分为两到三相，三种指示剂 纤维在不同食糜相中的分布差异显著， 要存在于液相食糜中， 要 与 小颗粒食糜 结合，而 大颗粒食糜中含量最高。利用单 相 指示剂计算食糜干物质流量变异很大， 其中 测值最低， 测值最高， 测值变异最大 ，利用 两相和三相指示剂估计的流量值处于中等。多相指示剂的使用可显著提高十二指肠酸性洗涤不溶灰分流量估测的准确度。 本论文第二部分主要研究了四种不同精粗比典型日粮条件下泌乳奶牛瘤胃氮素代谢、小肠蛋白质 的消化 吸收及其对生产性能的影响。试验动物为四头三位点瘘管泌乳奶牛，采用 4 4 拉丁方试验设计。结果表明 粗料为 70%羊草的日粮，氮源不足限制了瘤胃微生物生长。不同精粗比日粮瘤胃真可消化有 机物 （ 生成微生物氮的效率差异不显著，每公斤 生物氮。粗料的改善和精粗比 的提高 显著增加十二指肠非氨氮流量 ，增加的非氨氮主要是 瘤胃微生物氮 。 四种日粮 条件下， 进入 小肠 的微生物氮占 总非氨氮 的 比例为 进入小肠的非氨氮 消化率平均为 在各日粮间差异不显著。泌乳奶牛食入氮中，平均 粪氮 的 形式排出， 尿氮的形式排出 。食入氮转化为乳中真蛋白氮和体组织沉积氮的效率随精料水平的提高而提高。乳产量、乳蛋白率随日粮粗料的改善和精料水平的提高而 提高。乳蛋白率和小肠非氨氮流量相关显著。 本论文第三部分主要 研究了 四种 不同精粗比 典型 日粮 条件下 泌乳 奶牛氨基酸营养的供给状况及其对生产性能的影响。 试验动物为四头三位点瘘管泌乳奶牛，采用 4 4 拉丁方试验设计。结果表明日粮精粗比对瘤胃细菌、牛奶氨基酸组成没有影响。除精氨酸外， 其他 氨基酸 小肠消化率在各种日粮间 差异 不 显著（消化率为 。以乳蛋白 质 氨基酸组成为理想氨基酸模式 对 小肠可吸收氨基酸 进行评价， 结果表明赖氨酸 、 蛋氨酸为四种日粮的主要限制性氨基酸，支链氨基酸重要性仅次于赖氨酸和蛋氨酸。泌乳奶 牛在采食 3070粮后，血液中必需氨基酸出现累积，非必需氨基酸浓度 显著 低于其他三种日粮， 表明该日粮条件下，泌乳奶牛因能量不足导致必需氨基酸利用率降低。 本论文第四部分以四头三位点瘘管泌乳奶牛为试验动物，利用回撤灌注技术研究 了精粗比为 50:50 的典型 日粮条件下，赖氨酸、蛋氨酸和支链氨基酸对泌乳奶牛生产性能影响。试验采用4 4 拉丁方设计，通过十二指肠灌注不同 组合 氨基酸 ， 结果表明回撤赖氨酸后产奶量有降低趋势，乳蛋白率、非脂固形物显著降低。而回撤 支链氨基酸 对生产性能没有影响，回撤蛋氨酸后乳蛋白率显著降低，但乳蛋 白产量等其他指标没有变化。研究发现支链氨基酸和蛋氨酸之间 有颉抗作用。除苏氨酸、蛋氨酸和胱氨酸外，乳腺对其他氨基酸的摄取量与动脉血浆中氨基酸浓度存在显著的线性正相关关系。乳腺对动脉血液中必需氨基酸的摄取效率 在 13 55%之间。 关键词 ：泌乳奶牛 ， 蛋白质 ， 氨基酸 ， 乳腺 to of on of of of or as Co Yb in r at of in in of or of or of of at to of on in s in a 4 4 to of to of in 70% 0% no of of of at to of of to at no in of of in by of of in a in to of on of in of to of in on of in to In in a 4 4 to of on 050in p= 。不同精粗比日粮 十二指肠混合食糜、大颗粒相、固相中 含量 随精料水平升高而显著 降低 （ 而且 要 存在于大颗粒相 (在小颗粒相中氮含量显著高于其他各组份 (平均流量均处于六种组合的中游。 若利用不同指示剂估计结果判断四种日粮十二指肠干物质流量差异， 不同指示剂 所得结果并 不一致 。 b、 b 三种指示剂估计的流量表明不同精粗比日粮的十二指 肠 量差异极显著 (经统计，指示剂与日粮之间没有互作 效应 （ p 从 图 2070量估计变化幅度最大。 r o + o + Y b 7 0 C W 6 5 3 5 C C 5 0 C C A 3 0 7 0 C C g/不同指示剂及其组合对十二指肠食糜流量的估测效果 of 表列出了三项指示剂的重组因子。重组因子代表在重组一个单位食糜时，参与计算的某一相组份增加或减少的单位数，正值表示需要增加，负值则表示需要减少。从 表 20705050 6535粮条件下所采集样品中液体过多，重组过程中需要减少。3070糜重组过程中虽然 需要增加液相，但小颗粒相增加的更多。 表 2相指示剂重组食糜方法中液相和小颗粒相的重组因子（ 平均值和标准差） he of in 粮 1 相 颗粒相 均数 均数 D 070307050506535注： 3070粗比为 30:70，粗料仅由羊草（ 成； 3070粗比为 30:70，粗料由羊草、玉米青贮（ 苜蓿干草（ 成； 5050粗比为 50:50，粗料由羊草、玉米青贮及苜蓿干草组成； 6535粗比为 65:35，粗料由羊草、玉米青贮及苜蓿干草组成 中国农业科学院博士学位论文 第二章 不同精粗比日粮消化道食糜流量的监测 28 消化道内不吸收 ( , 1994)，且在食糜各 组分中分布相对均匀， 没有昼夜节律和不同采样 日期之间的波动 ( 1977)。根据本试验的测定结果， 十二指肠 食糜 小颗粒相、大颗粒相、固相和混合食糜中的平均含量分别为 由于没有更好的评判标准 ，本试验以对 量估计的量和 入量之间的接近程度作为评价各种指示剂应用效果的指标 （ 表 2图 2从 表 2 2项指示剂对 二指肠流量的估计明显偏高，而双相指示剂和三相指示剂的估测效果则更为准确。 表 2同指示剂组合对十二指肠食糜中 量估计 of IA in of 粗比1 to 3070070050535际食入量 表 2he of in 粗比 1 to 3070070050535o r b ： 1: 3070粗比为 30:70，粗料仅由羊草（ 成； 3070粗比为 30:70，粗料由羊草、玉米青贮（ 苜蓿干草（ 成； 5050粗比为 50:50，粗料由羊草、玉米青贮及苜蓿干草组成；6535粗比为 65:35，粗料由羊草、玉米青贮及苜蓿干草组成 中国农业科学院博士学位论文 第二章 不同精粗比日粮消化道食糜流量的监测 29 100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300350400A I A 实际摄入量 ( g / d )A I A 实际摄入量 ( g / d )A I A 实际摄入量 ( g / d )A I A 实际摄入量 ( g / d )A I A 实际摄入量 ( g / d )A I A 实际摄入量 ( g / d )100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300350400g/d)g/d)100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300g/d)g/d)g/d)100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300g/d)100 120 140 160 180 200 220 240- 5 0050100150200250300图 2心 标识 ） 和残差值（预测值 心 标识 ）的散点图 he of IA IA 国农业科学院博士学位论文 第二章 不同精粗比日粮消化道食糜流量的监测 30 3 讨论 在真胃和十二指肠部位，通过 T 形瘘管无法获得代表性的食糜样，为了能够很好的监测食糜流量， 975)建议将食糜分成两相，即液相和固相，通过两种指示剂分别标记并计算食糜流量。 986)进一步根据采集的食糜样品的代表性和指示剂的理想与否，综述了多种算法，并推导了采集的食糜样品没有代表性时的食糜重组和计算方案，该方法并不需要多相标记物体系中指示剂全部存在于某一相中，只要其在某一相存在绝对优势，就可应用于食糜流量的计算，这使得该种方法对指示剂的理想性依赖程度减小，提高了试验方法的准确性。本试验比较了单相、双相和三相指示剂对食糜流量的监测效果，为反刍动物营养消化代谢研究中指示剂的合理选择和应用提供了实验依据。 化道食糜样本的非代表性和食糜重组 利用过滤和离心将采集到的十二指肠食糜分成两相 或三相，各相的营养成份和指示剂含量显著不同（ 表 2表 2这进一步证实了十二指肠食糜确实存在多相；通过简单 T 型瘘管采集到的食糜样本代表性很差；各相食糜之间可以通过简单方法分离。 食糜中各相物理流动性和化学组成各不相同，使用能够与各相紧密相连的指示剂，监测各相食糜流动量，从而分析重组出真正代表性食糜 ( , 2003; 1975)。根据 986)的理论，各相指示剂并不需要完全和所标记相结合，只需要在所标记相中占有绝对优势即可。 表 2o 主要存在于液相，而通过液体形式注入瘤胃的 要吸附到食糜中的小颗粒相上，而与羊草纤维紧密结合的 主要存在于大颗粒相中。 (2003)比较了利用离心和过滤两种方法分离十二指肠食糜，利用过滤获得的液体食糜相中 浓度占绝对优势，但 该相中 含量 也 很高，这也符合 要结合食糜中细小食糜颗粒的规律，因为 相对于高速离心来说，过滤后的滤液中含有较多的小颗粒相， 这使得 滤渣（颗粒相）中难以保持优势，从而无法很好的应用 975)重组食糜的方法。本试验在两相分离时采用了食糜直接离心的方法，三相分离采用了先双层纱布过滤获得大颗粒相，然后用离心方法获得小颗粒相和液相，保证了各种指示 剂在所代表的相中处于绝对优势。 在 (2003)试验中求出的重组因子都小于或等于零，表 明与食糜代表样品相比，通过他们的 方法从真胃获得的食糜样品中，含有较多的液相和小颗粒相。本试验中基于三相指示剂法所计算的重组因子变异 较大 （ 表 2且 和日粮精粗比无关，这可能与本试验瘘管以及采样方法有关 。三种日粮的液相重组因子为负值，表明采集到的食糜样品中液体较多；但对于小颗粒相来说， 3070粮的重组因子为 明该日粮条件下获得的食糜样本中小颗粒相不足，重组 1 个单位食 糜需要额外添加 单位的小颗粒相；其他三种日粮的小颗粒相重组因子分别为 都表明本试验中应用的简单 T 型瘘管采集的样品中小颗粒相不足，液体过多。针对简单 T 型瘘管所采集的十二指肠食糜样品变化很大的问题，除增加采样次数、提高样品代表性外，多相标记分析 、通过 重组 获得 代表性食糜是较好的办法。 中国农业科学院博士学位论文 第二章 不同精粗比日粮消化道食糜流量的监测 31 示剂的选择 1955）首度提出 以作为液相指示剂使用。当 子量达到 4000 以上，其比重变大，无法代表液相，研究中一般选用分子量较小的 但 分析技术不够准确，而且根据在绵羊和兔子上做的试验， 回收率也仅为 95%，表明这种指示剂可以被吸收。早期应用于液相监测的还有 合物 ( 1964)，但 以被动物机体吸收， 1976)发现 瘤胃吸收受到瘤胃内渗透压的影响，最终可能引起 10%的误差。 (1980)研制了液相指示剂 论从制作方法和使用效果方面，均优于 经逐渐取代了 为最常用的液相指示剂。 食糜中实际是独立存在的，几乎和任何不可溶养分之间都没有结合，可以很好的监测食糜液体和可溶性养分的流量，但单纯使用 为食糜 流量监测显然不合适，应该结合其他固相食糜使用。即便是在双标记体系中， 使用也受到疑问， (2003)指出在双指示体系 中 不能很好代表液相，应该将固液两相改变为小颗粒相和大颗粒两相，从而采用 双相标记物体系，由于他的试验中液相食糜中 含量和固相食糜中含量几乎相等，其计算结果有待进一步验证。本试验中由于试验样品采用高速离心分离， 在固相食糜中占有绝对优势，这种情况下无法采用 双标记物计算食糜流量，也就无法进一步证实 (2003)的结果，但本试验采用的以 液相标记物的双标记物法仍然获得了比较好的结果。 相标记物 稀土元素 有很强的吸附性，可以紧密地与饲料颗粒结合 ( , 1984)，每克饲料可以结合 75 1984)。早期的研究认为 染饲料在酸性条件下可能发生 解离 ( , 1982)，但后来的研究证明这种解离很少，任何稀土元素媒染饲料均可以在 4 的乙酸溶液中保持稳定，而瘤胃中的 难低到如此程度 ( , 2002; 2002)。而且可以通过用乙酸等溶液洗涤去除结合不紧的 ，再投放到消化道，以便排除酸性条件下解离的影响 ( , 2000)。 (1985)研究结果表明 所结合饲料的瘤胃降解没有影响， 其 回收率为 通过瘤 胃投放液体乙酸镱后， 十二指肠食糜的大颗粒、中等颗粒和小颗粒中的含量分别为 够满足双标记法要求( , 2003; , 1985)。因此， 为指示剂应用越来越 广泛，尤其适用于双标记法中的固相指示剂 ( , 2003; , 1994; , 1990; , 2003)。本试验中 用瘤胃直接 液体 投放，分析十二指肠各相食糜 量表明 要存在于小颗粒相食糜中，其含量分别是大颗粒相和液相的 ，而食糜中的蛋白质主 要也存在于小颗粒相中（四种日粮条件下大颗粒、小颗粒和液相中氮平均含量分别为 ，这表明 很好应用于反刍动物蛋白质消化代谢研究中，这一研究结果与 (2003)的研究结果一致。 粪中的回收率为 本试验结果说明 较好的反刍动物固相食糜标记物。 铬标记纤维： 早开发了这种将 日粮纤维结合起来使用的指示剂方法，并被中国农业科学院博士学位论文 第二章 不同精粗比日粮消化道食糜流量的监测 32 （ 1974）使用 ( , 1980)。 (1989)研究表明 吸附性良好， 标记纤维在瘤胃培养后仍然能保持 98%的结合率， 记纤维在消化道内的流动主要和物理特性相近的大颗粒纤维类饲料相近。本试验通过纱布过滤后所获得大颗粒相中， 量是小颗粒相食糜的 （ 表 2食糜大颗粒相中 浓度是小颗粒相的 ，这也表明食糜中 内源固相标记物： 994)研究了以瘤胃不可消化中性洗涤纤维 （ 纤维素酶不可消化的酸性洗涤纤维为指示剂（ 外源指示剂的效果，结果表明 合于做指示剂，但 质素等不宜用做指示剂。994)用 288h 瘤胃培养后，认为没有消化的 以用做指示剂，但利用288h 的时间制作指示剂似乎过于费时费力。 ( 1977)的研究也表明 很好的内源指示剂，在粪中的回收率为 本试验在十二指肠部位以参照评价其他指示剂的使用效果，没有参与计算，但通过粪中回收率（ 分析，进一步证明 为内源指示剂比较合适。但是，本试验在全舍饲条件下进行，土壤、尘土和沙土垫料等外源性污染都不存在，这些污染都可能导致 使用出现偏差 (1975)，使用中需要注意。 相标记法应用效果评价 根据使用效果，现有的各种指示剂都不能完全满足 975)提出的理想指示剂的五点标准，应该根据试验目的择优而用。本试验的主要目的之一是为了测定十二指肠食糜流量，而试验动物安装的是简单 T 型瘘管，无法象桥式瘘管一样全量收集食糜，所以只 能借助于指示剂来测定食糜流量。试验中比较了单相指示剂（ 双相标记法（ 三相标记法（ 指示效果。单相指示剂中 测的十二指肠食糜量最低，而 测的量较高，双向标记法和三相标记法估测的食糜流量居于中等。根据测定的重组因子分析，本试验采集的食糜中液相较多，在重组过程中需要减去一些，这也说明主要存在于液相的所采集的非代表性食糜样品干物质中比代表性样品中的要高，利用 计算的食糜量则较低 ， 这和 1994)研究结果相同。相应地，利用主要存在于固相食糜中的 994)用 测十二指肠食糜流量也高于用双标记法和 监测结果。从十二指肠 量的估测来看（ 图 2双标记法和三相标记法获得了更准确和更一致的结果， 此 间接说明多相指示剂能够很好提高食糜流量监测的准确性。 结合 十二指肠食糜样品的非代表性，在利用指示剂监测十二指肠食糜流量的试验中，单标记法显然是不合适的，宜选用多标记法。本试验研究结果表明双标记法和三相标记法对食糜流量的监测没有差异，虽然后者的精确度确实有所提高，但双标记法能够满足大多数试验要求。在理论上，指示剂相数越多，监测越准确，但指示剂的准备、样品的处理和分析工作大量增加， 例如在氨基酸、脂肪酸等研究中，指标分析成本很高，这必然增加了大量人力、物力的支出。 和 975)研究结果一样，本试验证明 日粮精粗比和标记物之间没有互作效应。 中国农业科学院博士学位论文 第二章 不同精粗比日粮消化道食糜流量的监测 33 4 小结 试验研究表明， 不同精粗比日粮十二指肠食糜组成变化很大， 通过简单 T 型瘘管所采集的十二指肠食糜样品不具代表性 。 过过滤、离心等办法可以将食糜分为两到三相。其中含氮物主要存在于小颗粒食糜中，而纤维类物质在大颗粒相中含量较高。 过单项指示剂计算食糜流量变异很大， 测值最低， 测值最高， 测值变异最大，两相和三相指示剂的流量估计值处于中等。 用各种指示剂组合估测 十二指肠 量发现，单项指示剂估测值变异最大，两相指示剂和三相指示剂的使用显著提高了估测的准确度。 纤维 在不同食糜相中的分布差异显著， 要存在于液相食糜中， 要和小颗粒食糜结合，而 在大颗粒食糜中含量最高， 可以很好的应用到1975)的食糜重组方法中 。 试验 没有监测到日粮和不同标记物之间的互作效应，但该试验结果还需要更多的试验研究来证明。 中国农业科学院博士学位论文 第三章 不同精粗比日粮对泌乳奶牛瘤胃发酵、氮素消化吸收和生产性能的影响 34 第 三 章 不同精粗比日粮 对泌乳 奶牛瘤胃发酵、氮素 消化吸收 和生产性能 的影响 我国奶牛业发展很快，但是养殖水平参差不齐。对北京大兴区的调研发现，该区奶牛存栏量 26000 多头，其中集约化养殖约占 60%，小区养殖约占 10%，农村散户饲养约占 30%。不同模式不仅在养殖数量上有明显差别，而且在饲料来源、饲料加工配制、饲养工艺、管理水平等方面也存在巨大差异，而这种差异是影响奶牛健康、牛奶产量、质量和生产效率的根本原因 (王加启和李树聪 , 2004)。在这些不同养殖模式中， 可以归纳出 高粗料低营养水平型、粗饲料结构改善的低成本型、精粗比大致 相等的配合合理型和为盲目追求产量的高精料型等几种典型的日粮，其实质在于日粮中精粗比例的不同。低水平饲养常导致奶牛生产性能无法充分发挥，奶牛养殖效益降低。增加日粮中精料水平，可以提高奶牛产奶量和乳蛋白率 ( , 1991)，但精料过量又会引起奶牛 瘤胃发酵、小肠可吸收养分供给 紊乱，导致乳脂率降低、代谢性酸中毒等现象的发生 ( , 1983)，不仅造成资源的浪费，而且影响奶牛的健康和生产性能的发挥。 本试验通过研究不同精粗比例的四种典型日粮对奶牛瘤胃发酵、小肠可消化蛋白组成和数量以及奶牛生产性能的影响，目的是： 给不同饲养模式典型日粮的优化提供科学依据和实践指导； 获得瘤胃发酵、微生物合成效率、小肠可吸收蛋白消化吸收等营养需要参数，为建立具有中国特色的奶牛饲养标准奠定基础； 为进一步研究奶牛氨基酸营养的提供基础数据。 1 材料与方法 验动物、日粮及饲养管理 试验动物及其饲养管理同 第二章 。 四种日粮中精料组成相同，第一种日粮以全羊草为粗饲料，其余三种日粮粗料 组成 相同，由羊草、苜蓿和全株青贮玉米构成。四种日粮精粗比为 30:70,30:70,50:50,65:35，分别用307030705050 6535示 (表 3 验设计 同第二章 示剂的制备和 使用 同第二章，计算采用三相指示剂法。 本 章中涉及部分试验内容是 与 2004 年本研究室毕业的 王吉峰 博士共同完成，所以 瘤胃 氮数据 与该同志博士论 文相同，为保证本论文内容的完整性，在此引用和分析，特此申明 ！ 中国农业科学院博士学位论文 第三章 不同精粗比日粮对泌乳奶牛瘤胃发酵、氮素消化吸收和生产性能的影响 35 表 3of 目 粗比1 to 070070050535粮组成 苜蓿草粉 草 米青贮 米 麦麸 豆粕 粉 酸氢钙 盐 混料 养成分 2 P， %E， %a, % , % % % % 自粗料的 % 粉 % ： 1： 3070粗比为 30:70，粗料仅由羊草（ 成； 3070粗比为 30:70，粗料由羊草、玉米青贮（ 苜蓿干草（ 成； 5050粗比为 50:50，粗料由羊草、玉米青贮及苜蓿干草组成； 6535粗比为 65:35，粗料由羊草、玉米青贮及苜蓿干草组成 2： 主要养分含量以 基础 , P、 实测值 , 3： 每公斤含有 70 万 12 万 210075060000005002I 842 4： 100品采集 瘤胃液 样品采集 每期试验第 15 天 和 第 16 天的 07:30、 9:30、 11:30、 13:30、 15:30、 17:30 及 19:30 分别采集瘤胃液 100层纱布过滤后立即测定 ；同时取过滤后的瘤胃液 8入 2配制的 25%偏磷酸，封盖，倒置，摇匀，在 11,000g 离心 20 清液 用于 测定 度；另取 20液 ，低温 ()保存 待 测 量 。 中国农业科学院博士学位论文 第三章 不同精粗比日粮对泌乳奶牛瘤胃发酵、氮素消化吸收和生产性能的影响 36 每期试验第 16 18 天依照下述各时间点从瘤胃背囊、背盲囊、腹囊、腹盲囊四个位点采集瘤胃固体食糜 (用手挤出液体后剩余的食糜 )50g，液相食糜 100即冰箱冷冻保存 ()；三天采样结束后，采集的 600g 瘤胃固相食糜 解冻后 加入 600理盐水，搅动 5，经 4 层纱布过滤，收集滤液，将液相食糜解冻后经 四 层纱布过滤，混合两相食糜滤液，经 1000 g 离心 10除去原虫颗粒和饲料残渣，上清液再经 20,000 g 4下离心 20心弃去上清液，用 盐水洗涤沉淀，重复离心一次，小心弃去上清液，收集沉淀至洁净培养皿中，经冷冻干燥，作为瘤胃混合细菌样品， 4保存备用。 采样时间点如下： 第 16 天： 07:30， 13:30， 19:30， 01:30 第 17 天： 09:30， 15:30： 21:00， 03:30 第 18 天： 11:30， 17:30， 23:30， 05:30 料 、 剩 余 料 、 十二指肠食糜 、 粪样 、 尿样的采集及预处理 同 第二章 肠食糜的采集和预处理 在采集十二指肠食糜同时，采集 50肠食糜，采样结束后将每头牛不同时间点的样品混合 均匀，冻干， 粉碎并过 40 目筛， 4保存备 用。 奶样品采集 试验期 每 日挤奶两次，挤奶完毕立即称重，记录产奶量，将牛奶搅拌均匀后进行取样。取样时将乳样采样器垂直缓慢插入奶桶，封闭采样器一端，提起采样器取样，每头牛每次采集乳样约为乳产量总量 2%，立即用乳品分析仪测定 乳脂率、乳蛋白率 、乳糖率、 非乳脂固形物 率和冰点 。 然后分装为 50积的四份样品，立即低温 ()保存 备用 。 浆样品采集 试验期第 20 天，分别 于饲喂前