【毕业学位论文】（Word原稿）肾结石形成机理研究钙敏感受体活性改变对大鼠泌尿系草酸钙结石形成的影响

第一章 前言 1 研究背景 泌尿系结石是一种 常见病， 它在发病率方面 仅次于泌尿系感染和前列腺疾病， 其中草酸钙结石约占了 80%1。 随着 人们生活条件的提高，以及全球饮食文化向发达国家靠拢，上尿路结石发病率明显高于下尿路。随着泌尿系腔镜和微创手术的快速开 展如 及 新 技术 在 临床 上 广泛的应用 ， 泌尿系结石的治疗取得突 破性的进展 。 经皮肾镜 取石术、 体外冲击波碎石术（ 钬激光碎石 、 经输尿管镜取石 碎石术 等 等能够给予 绝大多数患者得到 微创 而有效的治疗 结果 。不仅避免 了 一系列 由于 结石长期存在造成的 临床症状 ，例 如 感染、血尿 、 疼痛 ， 而且也 避免了 由于结石长期刺激引起的 鳞状上皮 癌。然而在临床 医疗 实践 过程 中， 这些微创技术也存在它们的不足和禁忌症，例如反复 的 进行 疗 极有可能 能会引起肾 功能 损伤， 严重 患 者甚至 出现肾功能 衰竭 和尿毒症。 长期的 遗 留 的 结 石碎片会 促使并发症的发生，例如 泌尿系 感染和结石 进一步复发 。此外，经皮肾镜 、 钬激光 碎石 也 伴随 有很多 严重 手术的并发症 ，例如 输尿管 急性 穿孔 、 狭窄、 结石 遗留、肾乳头 大 出血 等 等 。 相关 资料表明 ，如果 在 后有采取 相关的进一步 治疗 措施， 泌尿结石的治愈率会明显的升高 ，包 括一些肾盏内有高难度的结石也可以达到清除治愈的效果。 然而 虽然各个部位泌尿系的结石均可以得到很好的治疗 效果，但是我们知道无论何种 结石的复发率是很高的，如果结石复发，不仅会给患者带来 心里和生理上的痛苦，还会室再次 手术的难度 大大增加 。泌尿系畸形、 感染 、结石 家族史 、年轻 的 结石 发病年龄 、 代谢紊乱性疾病 都 与结石的复发有 相关性 。 因此看来无论是 微创手术的治疗还是传统手术的治疗都不能彻底消除它的根源和复发，所以要想从根本上治愈泌尿系结石，还是要从泌尿系结石的发病机制入手，彻底治疗泌尿系结石使其被扼杀在初始状态。 2 肾结石形成机理 石物质的过饱和 高草酸尿：对于草酸钙结石形成 的影响 ，最危险因素之一 是高草酸尿 。因为尿 草酸浓度与 草酸钙结晶的形成有 最 直接 的 关系，尿液草酸浓度 的提高 相对其他成石 物质的过饱和 对肾结石形成作用要大的多。另外高 草 酸可以诱使 肾脏 细胞产生活化氧，过 量活化氧便会导致肾小管上皮的损伤， 引起上皮细胞的坏死， 为结晶的粘附 和生长 提供了位 点 支持 2。 高钙尿症 ： 大约三分之一 到二分之一 的草酸钙尿路结石患者 中 伴有高钙尿症。 钙能增加很多离子的活性，以及草酸钙和磷酸钙晶体的过饱和浓度 ,但是增加到一定程度后 速度则会变缓，如果浓度继续增加，相反的效应就产生了。 这是由于尿钙过多 的 时 候则 会形成螯合物， 这 表明钙在成石方面的作用 要小于草酸 。另外钙可以与 尿路结石抑石物质相 结合，促使结石的 进一步 形成。 过饱和的 普遍性：在结石患者的尿液 分析 中，草酸钙浓度 要略 高于非结石患者，但是成石物质浓度在尿液中是随时可变 化 的。很多 正常人尿液中也会出现 草酸钙过饱和的 不正常 现象 ，但是并没有出现 结石 。因此，草酸钙过饱和只是结石形成的一个充分条件而非必要条件。 制成石物质的减少 / 促进物质的增多 小分子抑制物的减少：研究发现 枸橼酸可以抑制 草酸钙成核，聚集，大部分肾结石患者尿中枸橼酸 浓度 降低。 它的 主要抑石机理包括三个方面：与钙结合，使钙浓度下降；草酸钙的成核过程直接 受到 枸橼酸钾抑制，防止其生长并抑制已形成的草酸钙晶体 的 聚集；使尿 促使尿中其他抑制物活性加强 3。另外 4。并且多次 动物实验表明镁可以抑制草酸钙结石的发展过程 。 大分子抑制物的减少 ： 骨桥蛋白 ： 体外研究显示骨桥蛋白可抑制一水草酸钙结晶的形成和聚集、促进 上皮细胞的黏附能力大于 而发挥抑制结石形成的效应 。并且研究发现 骨桥蛋白 可抑制 肾上皮细胞黏附。 被证实 是正常人尿液中含量最多的蛋白。 由肾脏亨利袢升支粗段 上皮 分泌，从尿液中排出。现在普遍认为 双重性的 。 用，用 映人体形成草酸钙结石的危险系数 。当 1时，结石发生率高 5，反之亦然。 尿 凝血酶原片段1( 1991年 发现 立方上皮细胞、亨利氏袢升支粗段的 产生，分子量 约 30几 对 面的粘附 与这些谷氨酸的 7一羧基化程度有 一定关联 。其 在 参与蛋白质结合 生物矿化过程中起重要 的 作用。尿中 同， 从尿中提取的 1进行对比，发现两者电泳结果特征 有较明显的差别 ，提示 并非来源于血浆凝血酶原片段 6。 它 肾结石形成中的作用： 形成 主要在 于两个因素： 能。 度，另一方面也受 以看出肾 内合成的 能使其 氨酸羧化 ，从 而发挥抑制草酸钙结晶 形成 的能力。关键酶，在泌尿系结石中其表达明显增加 ，在结石的形成过程中起 到 重要作用。 肾钙蛋白 ( 一般特征： 而等电点不同的一 组蛋白质 混合物。从 动物尿中分离得到的种异构体 ，它 肾结石形成中的作用：正常人体尿液中， 度约为 16 ，他 能抑制 集 生长，而在结石患者尿 液 中， 少。在体内 长、 聚集 等过程 。正常人尿液中， 抑制性很 强，其次 便 是结石中的 石病人的 。 成 是 在高浓度下， 皮细胞表面有较强的结合 力 。 促进物质：促进 物的概念是相对的 ，有些物质可以在结石的形成 发展 过程中促进结石的形成，但在另外一些方面 则 又可以抑 制结石的形成，现在公认的促进物包括微量元素、坏死的细胞、细菌等 。 小管上皮细胞受损和有限的抑石能力 上皮细胞吞噬晶体能力下降：当晶体黏附后 ， 肾脏上皮细胞 也会吞噬晶体，用来 除细胞表面潜在的晶体生长点，保护了上皮细胞 ，形成了防御结石的机制 。在动物实验中，在光镜，电镜，聚焦显微镜可观察到上皮细胞对晶体的 吞噬和 摄取 7。然而这种抑石作用是有限的，当成石物质过多时超出上 皮细胞的分解结晶的能力时，则会损伤上皮细胞进一步导致结石的形成 8。 肾小管上皮细胞受损：高草酸及其他有害因素可 以 伤 及肾脏上皮 ，进一步引起炎性反应 ，可能会 导致上皮细胞的脱落，使基底膜暴露，为晶体的黏附生长提供了 便 利 的 条件。并且坏死的上皮细胞 ， 可以成为成核聚集的基础 9 德尔斑与尿路结石 发现 1000例人肾发现约有 20%的存在上皮下钙化斑，命名为 他 最早提出肾乳头炎症、坏死、 纤维化、 代谢障碍等因素均可以引 起上皮下钙化，逐渐发展为 为结石的形成提供了粘附位点 ，一旦上皮脱落 下来，与尿接触即可作为核团 长大成 大结 石。 要 原因 之一 ， 有人把它看做是首要原因。 反过来，结石、梗阻、感染、毒素 等外源刺激又容易导致肾乳头钙斑的形成 。 这是一个恶性过程，最近几年， 斑和肾组织结合点进行活检，确定了结晶形成的部位和起始成分 10。 在伴高 钙尿症草酸钙结石患者中，结晶的起始部位是髓袢细支上皮基底膜，成分是 磷灰石，结晶体还逐渐延伸至 终未集合管周围间质组织中。在大多数研究中，结晶最后出现在肾乳头。结晶从肾乳头处脱落 后进入尿路内， 由于尿路中的草酸钙浓度呈过饱和的状态， 导致了结石的形成。 然而 ,对于兰德尔斑在肾结石发病机制中的作用 研究并没有很大的进展。原因 可能是双重的。 1)小的兰德尔斑 已在非结石人群中发现 。 因此 ,2)最基本的缺陷是 研究者 尝试把所有结石的形成与这一假说相匹配。 兰德尔斑 的来源和 意义仍然 不清楚 。 他使用高分辨率射线对肾脏进行造影 ,结果 显示 一个位置 发展 到相关的乳头肾小管和乳头状血管 11。 内窥镜映射的研究显示斑块常出现 在草酸钙石和高钙尿患者中。 埃文 等人 已经 设计 出一组实验来描述 兰德尔斑的起源和意义。 这种研究为我们理解 的发病机理 中的作用提供了重要的依据 。 对 特发性草酸钙石的患者 进行术中乳头状活检， 发现肾结石可能与肥胖有关， 并且 显示 生物磷灰石 (钙 磷酸盐 )是兰德尔班的 主要成分 ， 它 起源于享勒襻的基底膜。 兰德尔斑 已被证实 是 人类肾结石的 形路径成是广泛的。郭等人用映射内镜研究发现 块覆盖率 显著高于对照 组的 (,斑块丰富度与 尿中尿钙排泄是正相关的，与尿量 利用 数字视频记录 ,微型计算机断层扫描和乳头状活检 ,发现结石 粘附率至少在 75%以上 ,支持兰德尔斑的是 石机制 。 除了这些 代谢和 临床数据 ,埃文等人研究兰德尔斑粘附部分的超微结构。发现一旦乳头状上皮受损，尿液蛋白质如 骨桥蛋白和 会粘附受损上皮。 磷灰石晶体 进一步覆盖 ,最后草酸钙积累形成一块石头。草酸钙积累形成一块石头。 没有一个发病机理可以正确地解释所有人 的肾脏结石。然而 , 研究者 在理解兰德尔斑在结石的发病机理 中作 用已经 取得了 重大进展。寻找一个合适的兰德尔斑动物模型仍然在继续 。 3 钙敏感受体在泌尿系结石中的作用研究 钙敏感受体（ 1993 年由 2首先在牛甲状旁腺中发现。人 一种 G 蛋白耦联受体由三个部分组成 13:（ 1）位于细胞外的由 612 个氨基酸组成的亲水末端；（ 2）由 250 个氨基酸构成的 7 次跨膜结构；（ 3）由 217 个氨基酸残基构成的细胞内 C 末端。 它主要存在于肾脏和甲状旁腺等脏器中。在肾脏中，它广泛分布在肾单位的各个部分，尤其是在远曲小管14，对调节水和电解质的排泄有重要的作用。研究发现在远曲小管 以减少钙离子的重吸收，在集合管可以减少水和 质子的的重吸收 15。并且 因的多态性和含钙结石有密切的关系 16。在甲状旁腺中，血清钙浓度升高时可以激活 而抑制甲状旁腺激素（ 释放进而调节骨组织和肾脏内钙的代谢。 理状态下 功能 免疫组化结果研究证实， 胞内的 近端小管和髓质集合管， 布在它的顶部；皮质集合管的 可见分布于基底外侧；而在远曲小管和连接管，则可能存在有种族差异性，不同的种族可分别表达在基底外侧或细胞内 ，顶部 17. 当甲状旁腺细胞内环境 的钙离子浓度升高时， 、 3、 4、 三磷酸肌醇和 进胞内的钙离子动员、 胞外的钙离子内流，致使细胞内的钙离子 浓度 迅速升高，导致抑制 血液内的 使 溶骨作用下降，血浆钙离子下降；反之，当细胞外的钙离子下降时， 胞钙离子内流减少，使 骨作用加强，血钙升高，从目前的的研究看来，它的作用主要是防止人体细胞外的 钙 过度存在 18。 对 细胞分泌 降钙素 有明显 调控 作用。 脂酶 放非特异性离子通道 (、 胞膜去极化，电压依赖性钙通道 (开放，促使 19。 对 维生素 在肾脏，当细胞外游离的 会与肾细胞膜 制 生素 17。 现，细胞外生理水平的高钙能直接诱导 肾近端小管维生素 达升高，这一诱导机制需要 20。 理状态下 机体的作用 相关的研究发现， 其是单核苷酸多态性的研究 会导致体 内钙代谢平衡紊乱，例如甲状旁腺功能亢进、家族性良性低尿钙高钙血症 (新生儿甲状旁腺机能亢进 (常染色体显性遗传的高尿钙低钙血症 ( 21。 对肾功能的影响 : 研究证实， 肾功能调节上可能起到关键的作用，990定 相关性 22;也有人发现在 986S、 990G、 和 1011结果并不是完全一致的。 人 对 一位切除了 甲状旁腺后 ， 仍有严重的高钙血症 妇女进行了相关研究 发现 ， 变是其高钙血症的 重要因素 。即因位于 339位的密码子 ，它 由原来的 下游的酶发生 跟随 改变，最终导致 敏 感性下降，进一步 导致严重的高钙血症。 组共计 12 865名个体进行 分析，发现血钙 和 3核苷酸多态性 有关，其中最相关的为个 钙 相关性最强，与亚洲后裔最相关的则是3。上述差异可能导致 导致血钙水平 异常 或是调节异常 ，从而 重点 突出了 猜测 细胞外钙离子的过度存在。 肾结石形成关系的关键结合点 ： 研究发现 等位基因的多态性可以导致肾脏内 达的下降， 达的下降进一步影响肾脏内离子的分泌及重吸收和水的代谢，从而促进了结石的尤其是含钙结石的形成，这些代谢紊乱可能会导致肾小管内钙磷结晶的沉淀，进一步导致结石的形成 24。还 会在肾乳头区形成钙磷沉淀，促使兰德尔斑的形成，兰德尔斑的形成为含钙的结晶的黏贴提供了粘附位点。并且有些研究发现 以抑制钙磷盐的沉积 25。免疫组化和果显示 达下降 出现 在钙化的动脉中 ，因此 降也可能出现在钙化的肾脏中 。在大鼠试验中， 促进剂可以抑制动脉粥样硬化的发生。很多实验数据都表明 以保护人体器官免受钙化， 前体可以检测到周围环境中离子强度的变化。 抗钙化作用在肾脏中是非常的复杂的由于他的在肾脏内对水和电解质的代谢作用。 第二章 材料与方法 1 试剂 乙二醇、氯化铵、 于 司）、 10%甲醛（体积分数）、水合氯醛、 体（购于 司）、二步 法免疫组化检测试剂 于中杉金桥）、浓缩型 剂盒（购于北京中杉金桥）、 免试剂盒（购于北京原子高科公司）。 叠氮化钠、水合氯醛、甲醛、浓盐酸、溴化钾、溴水、高锰酸钾、 30%过氧化氢、石油醚（ 90）、硫脲（ 硼沙、浓硫酸、枸橼酸、三氯乙酸、乙醇、溴麝香酚蓝、无砷锌粒、变色酸、一水草酸钾 。 2 仪器 恒温水浴锅（北京） 型低温高速离心机（日本） 光分析天平（上海） 石蜡切片机 (上海 ) 外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公 司） 自动生化分析仪（日本） 微量移液器： 2001005010法国 大鼠代谢笼 光学显微镜 (日本 ) 3 实验动物及饲养 体重 180200g 健康雄性 鼠（ ，由兰州大学实验动物中心提供）饲养于鼠笼中，每笼五只，饲养温度 ： 202 、相对湿度为 45% 55%。光照：12h/d,常规 大鼠饲料及水 喂养。 4 实验动物造模及分组 待大鼠适应环境一周后给予干预因素，造模选用 1%乙二醇（体积分数）自由饮水 +2%氯化铵 2胃。 制剂为 6,选用尾部静脉注射的方式进行给药。自然喂养 1 周后将 鼠随机分为 4 组每组 10 只。 A 组：空白对照组，喂养大鼠食料及水 ； B 组：成石对照组， 1%乙二醇自由饮水 +2%氯化铵 2 /只灌胃； C 组（低剂量 制剂干预组）：结石造模（ 1%乙二醇自由 饮水 +2%氯化铵 2 /只灌胃） +0 /天尾部静脉注射；D 组（高剂量 制剂干预组）：（ 1%乙二醇自由 饮水 +2%氯化铵 2 /只灌胃） +0 /天尾部静脉注射。 上述四组大鼠给予干预四周后处死。 5 尿液样本收集及指标分析 处死大鼠前 1 天收集 24h 尿液，用于测定 24h 尿量、尿 、尿草酸、尿钙，磷、镁。生化自动分析仪测定尿钙、磷、镁、比色法测定尿草酸。 6 尿草酸测定原理及步骤 原理 比色法：尿草酸与硫酸钙 和 76%乙醇溶液 于 ， 可 形成草酸钙 的 沉淀， 然后在沸水中用锌粒 以新生态氢还原 成乙醇酸， 后者 与变色酸在热浓硫酸条件下作用 下 显色。 试剂 （ 1）变色酸 在使 用前配制成 2%的水溶液。 （ 2）溴麝香草酚蓝指示剂 精确称 取溴麝香草酚蓝 于 10醇中， 缓慢 加水 至 40断振摇， 待溶液 澄清后使用。 （ 3）无砷锌粒 约 44约 200在使 用前去除 其表面的 氧化层方法为 滴加适量硝酸 （ 10） ， 缓慢 摇 晃 ， 待其 产生 大量 棕红色 的 气体（ ， 即 刻用自来水冲洗， 沥净 多余的硝酸， 然后用 蒸馏水 冲洗干 净 待用 。 （ 4） 草酸标准 贮存液的配制 用 一水草酸钾 配制，具 体方法为： 称取一水草酸钾 （含 1 分子结晶水） 于水至 蒸馏水中并稀释至 100其 含无水草酸钾 （ 5mg/，置于 4 C 冰箱保存。 （ 5） 草酸 标准 应用液 取草酸标准贮存液 1后用蒸馏水 精确稀释 100倍作为应用液，置冰 箱内保存；应用液欠稳定，较长时间 放置后 测得 的 光密度 会有所下降， 因此，时间较长后 应重新配制。 步骤 ： 精密吸 取酸化尿 10管中，空白管取蒸馏水 准管取 草酸 标准应用液 蒸馏水 至 别加 入 溴麝香草酚蓝指示剂 1 滴 ，用 氢氧化钠或 盐酸（ 酸、碱）调节 至 色为 蓝绿色 ） ， 其中加入的 酸碱总量不得 超过 饱和硫酸钙 1匀 ，再加 95%乙醇至 10口，于室温放置 3h 以上 或 4 C 冰箱 过夜。 然后 2500r/心 10 分钟， 小心 倾去上清液，将试管 倒置于滤纸上 数分钟 吸净残液， 在沉淀物中 加入 1 入一粒锌粒，于沸水 浴中约 30 分钟 ， 蒸 发至剩余液体少于 出待冷，用玻匙将锌粒移至管 口， 加 入 %变色酸洗净 锌粒 并尽量沥干弃去， 加入 热 30 分钟。冷 却后 ，加入 5 硫酸至 10匀，澄清后比色， 1色杯， 波长 570长测吸光度 。 计算 ： 尿草酸 (样品光密度 /标准光密度 鼠血标本的留取及相关指标的测定 10%水合氯醛对大鼠进行腹腔注射，待大鼠肌肉松弛后，腹部正中切口切开腹腔，找到下腔静脉， 5针抽取血液约 4入无抗凝管中，依次抽取所有大鼠。 3000r/心 10抽取上清血清，全自动生化分析仪 测定尿素氮、肌酐、钙、磷、镁。放免法测定甲状旁腺素（ 8 肾脏标本的收集及病理切片和免疫组化 完整切取双肾用生理盐水冲洗干净后放入 20%福尔马林溶液中固定，固定 3天后石蜡包埋常规做 色病理切片及免疫组化切片（ 4 m） ，免疫组化采用两步法。光学显微镜下观察蛋白的表达情况及草酸钙结晶的形成情况。 肾结晶评分标准为： ( )：高倍视野中未见草酸钙结晶； ( )：视野中少部分管腔管腔内有结晶，有结晶的管腔占一半以下； ( )：高倍视野中一半左右的管腔内有结晶。 ( )：几乎每个管腔内均有结晶，满视野的结晶 。 9 肾组织 钙敏感受体 免疫组织化学 试剂 (1)克隆抗体（ ; (2)二步法免疫组化检测试剂 (中杉金桥生物技术有限公司 ); (3) 色试剂盒 (中杉金桥生物技术有限公司 ,批号： (4) 离子 防脱载玻片 (中杉金桥 ); (5) 和 ; (6) 二甲苯 ; (7) 作液 ; (8) 苏木素 ; 试验方法 : (1) 取材：大鼠 一侧肾脏标本放入 20%甲醛溶液中固定 3 天 。 (2) 固定： 20 福尔马林固定 ； (3) 切片：厚度 4 操作方法 (1) 石蜡切片脱蜡后依次至二甲苯 (35 分钟 )， 100酒精 (35 分钟 )70酒精 (12 分钟 )， 50酒精 (11 分钟 )，蒸馏水中水化 (11 分钟 )， (1。 (2) 热修复抗原： 将准备好的 枸橼酸盐 加入容量瓶内并加入蒸馏水2000摇摆容量瓶使枸橼酸盐彻底溶解，倒入高压锅内 加热至沸腾后， 放入切片至溶液沸腾 1钟，取下高压锅并冷却至 30 摄氏度， 后 放入 (洗涤 10 分钟。 (3) 3% 一滴 在切片上 ，在 室温 下 5右， 阻断内源性过氧化物酶， 洗涤 2。 (4) 吸水纸 切片上 的 ，。每张切片滴加第一抗体（ 140:1）， 4冰箱过夜。 (5) 洗， 2 分钟 3 次 ，滴加二抗， 37孵育 30 分钟。 (6) 洗 ， 2 分钟 3 次 ， 吸 去 ，每张切片滴 加现制备的 钟。 (7) 苏木素轻度复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 对照组 的 设定 :阴性对照用 代替一抗。 阳性结果 的 判定 :用 学显微镜（ 200）观察各组免疫组化切片 ：“ +”表示肾小管上皮细胞胞 膜轻度染色 (淡黄色 )；“ +”表示肾小管胞膜中度染色 (黄色 )；“ +”表示肾小管胞膜明显染 色 (深棕黄色 )。 10 统计学分析 血尿检验结果用 均数 标准差 ( )表示，每组间的差别用单因素方差（ 验中的 重比较法进行显著性检验； 达的情况和 结晶 形成情况 组间比较用秩和检验 验 。计软件进行分析。 表 1。 表 1 各组大鼠模型尿标本生化指标的结果 ( ) 组别 例数 尿量 4h 4h 镁 4h 磷 草酸 4h A 10 9 C 8 D 8 *仅扩张的肾小管内皮细胞表达略有增强， 颜色呈黑棕黄色，我们 考虑 可能 是 扩张的肾小管内的 结晶诱导达所致 。 评分多为 。 C 组：该组与成石对照组相比 表达减弱（ 表 4 各组大鼠肾草酸钙结晶沉积情况 组别 数量 草酸钙结晶 成石率 + + + _ A * 10 0 0 0 10 0% B#* 9 2 2 3 2 C# 8 5 3 0 0 100% D# 8 6 2 0 0 100% 注： #与 低剂量抑制组 高剂量抑制组。 在甲状旁腺中 ， 与结石对照组相比抑制剂干预组（尤其是高剂量干预组） 明抑制剂在甲状旁腺中发挥了作用，抑制了 活性，从而促进了 分泌。抑制剂干预组较成 石对照组相比尿 加，尿草酸增加，血钙、血 高。肾脏内草酸钙结晶生成的量： D 组 、 C 组 B 组 根据本实验结果我们考虑 鼠草酸钙结晶的形成，并导致血尿中生化指标的明显变化，从而损害肾脏功能。关于 性的降低导致草酸钙结石形成增加的机制结合本实验我们认为主要有这几个方面，一方面在甲状旁腺中我们知道 当胞外 促进剂 作用于甲状旁腺的细胞的 活 过特定的 G 蛋白（ 活磷脂酶 C。一旦磷酸化，该酶就表现出酶的活性， 以特异性的水解膜成分而生成 成后仍留在质膜上， 膜上扩散到胞浆内与内质网和肌织网上的受体结合， 受体其实就是钙离子通道，从而促进这些钙库里钙离子的迅速释放，使胞浆内的钙离子浓度升高，抑制细胞释放 时还促进它在胞内的降解 30，所以 活后，血 平迅速下降，溶骨作用下降 ，血钙下降，尿钙也随之下降，当我们加入 抑制剂 ， G 蛋白介导的 1， 4， 5 三磷酸肌醇 ()和二乙酰甘油 (成减少，胞浆内钙下降， 泌增加， 血 高后可以加强溶骨作用，导致高血钙，尿钙排泄增加从而和草酸结合促进草酸钙结石的形成。但是我们知道， 在结石患者的尿液中，草酸钙浓度要稍高于非结石患者，但是成石物质浓度在尿液中是随时可变的。很多正常人尿液中也常出现尿液草酸钙过饱和的现象。因此，草酸钙过饱和只是结石形成的一个充分条件而非必要条件。因此我们考虑 肾脏 中 激活诱导尿 液 酸化和减少水的重吸收，能在一定程度上增加尿 子 排泄而并不增加肾结石形成的风险 。 在集合管中 存在可以减少水的重吸收，稀释钙磷盐，这个效应出现作为一个整合系统阻止钙磷盐在肾小管的沉积，从而抑制了钙磷盐的结石的形成。所以在本实验中当 性降低时 肾小管内尿浓缩，并且酸化溶结晶作用减弱， 促进了结石的形成 ;之前有报道表明 性高的人可以抑制成石物质对肾小管上皮细胞的粘附，并且我们知道 机体内是广泛表达的，它对细胞的功能 和内环境的维持有很重要的作用，当它缺失或者是表达下降时可能会使细胞的功能形态发生变化，一旦细胞的形态发生变化，肾小管上皮不再光滑，抑石的屏障受损，从而导致结石对肾小管上皮的粘附导致结石的形成。结合本实验，肾小管内的 性明显下降， 性降低导致草酸钙钙结晶对功能受损的上皮细胞的粘附增加，为过饱和的成石物质提供了很好的成核位点，进一步激化了一系列的成石步骤，最终促进了本实验中的草酸钙结石的形成；在肾脏的髓质性降低使钙磷盐沉淀从而导致兰德尔斑的形成。综合考虑我们认为 多个方面 促进草酸钙结石的形成， 能像很多肾脏内的大分子一样可以抑石的作用。然而 草酸钙结石的形成机理是复杂的，其明确的作用机制有待我们进一步细致的研究。 第五章 结论 1. 大鼠肾脏内草酸钙结晶的形成可以诱导 表达， 能像其它的大分子抑石物质一样在结晶增多时可以相应的表达而发挥抑石作用 。 2. 性降低时可以促使肾脏内结晶的增加，可见 有抑石的作用 。 参考文 献 1. 陈志强 , 特发性草酸钙结石研究现状 . 临床泌尿外科杂志 , 2005. 20(5). 2. 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