【毕业学位论文】（Word原稿）Nitazoxanide干混悬剂及伊维菌素复方干混悬剂的研究基础兽医学硕士论文

密级（ 秘密 ） 论文编号 ： 中国农业科学院 学位论文 伊维菌素复方干混悬剂的 研究 on on 要 论文 题目： 混悬剂 及伊维菌素复方干混悬剂的 研究 on 是 一种具有广阔应用前景的高效、广谱抗动物与人体寄生虫、细菌和真菌感染药物，在我国还没有 该产品 上市，为充分发掘其 兽医临床上的 应用潜力， 本文 进行了 混悬剂的研究。 初步探讨了 备方法 ： 以 25噻唑 和 邻 乙酰 水杨酰氯 作为合成起始原料，经酰化反应、 乙 醇重结晶而得。 得到的产物经过薄层色谱法、 、 、 、 1率为 35%45%， 通过建立的 量可达到 99%。 以沉降体积比、再分散性、 为考察指标，采用正交设计试验对 混悬剂处方进行筛选，并考察优选处方的流体性能、粒径分布及稳定性。 建立了一种简单快速、专属性强和灵敏度高的反相高效液相色谱法测定 混悬剂的含量，以控制该制剂的质量。色谱柱为迪马 18（ 00， 5m）柱，流动相为 酸水溶液：乙腈 =50： 50 （ V/V） ，检测波长： 346速 1mL/度 在 围内，浓度与峰面积线性关系良好（ r = 平均回收率为 n=8，方法简便，精密度良好。 将 50mg/混 液 ，常温放置，分别于 1h、 2h、 3h、 4h、 24h、 48h、 72h、 96h、 12044h 时取样，经 测定，发现 悬 液 室温放置 144h 后依然十分稳定。取三个不同批次的 混悬剂样品， 铝箔袋 包装在温度为 402 ，相对湿度为 75%5%的恒温箱中放置 3 个月。分别于 0、 1、 2、 3 个月各取样一次，每次按混悬剂稳定性重点考察项目检测该干混悬剂物理性状 (性状、色泽、沉降容 积比、再分散性 )和化学性状（含量、 和降解产物）的变化。结果表明该制剂经加速试验， 3 个月后含量仍在质量标准范围内，该制剂在常规温度加速试验条件下稳定。 制定了 料）、对照品及其干混悬剂质量标准（草案）与起草说明。 为考察 使用过程中的安全性， 用 料药进行 昆明系 小白鼠急性毒性试验。结果表明， 鼠经口 于低毒。 进行了 混悬剂对犬复孔绦虫的疗效试验。选择自然感染复孔绦虫的犬 6 只，按200mg/kg 剂量 一次 口服此干混悬剂 （按 100mg/kg 。结果表明，该制剂对犬复孔绦虫有良好的驱杀作用。 制备了一种 伊维菌素 复方干混悬剂，并建立了此制剂的 高效液相色谱 含量测定 方法，对其原料药和制剂进行小白鼠急性毒性试验， 并 对其临床驱除犬消化道线虫效果进行了初步观察。 关键词： 抗寄生虫药， 维菌素， 干混悬剂 ， 制备，临床 试验 on an As a on a of on TZ TZ a in R,S,as s. of of 5% 5% 8%. In to an TZ an by of pH of To a TZ in 18 (00,5m) 0： 50( V:V)， 46nm mL/r = n=to be a To TZ in at h,2h,3h,4h,24h,48h,72h,96h,120h TZ 02 ， 5% ,1,2,3 by TZ a 00mg/kg TZ 00mg/kg TZ)TZ in a 00mg/kg bw a in by of in 目 录 第一章 文献综述 1 1 引言 1 2 应用概况 1 3 理化性质 2 4 药代动力学研究 2 5 药理、毒理学研究 3 6 应用研究 5 7 常用兽药剂型及干混悬剂的特点 6 8 立题依据 6 第二章 料）的制备与研究 8 一 料）的制备 8 1 引言 8 2 材料与方法 8 3 结果 10 4 讨论 14 二 料）含量测定方法研究 15 1 引言 15 2 仪器与试药 15 3 方法与结果 15 4 讨 论 19 三 步稳定性试验 20 1 仪器与试药 20 2 方法与结果 20 3 讨论 22 四 小鼠急性经口毒性试验 23 1 引言 23 2 材料和方法 23 3 结果 23 4 讨论 24 第三章 混悬剂的研制 26 一 混悬剂处方的研究 26 1 引言 26 2 仪器设备与材料 26 3 方法与结果 26 4 讨论 30 二 混悬剂含量测定方法研究 32 1 引言 32 2 仪器设备与试药 32 3 方法与结果 32 4 讨论 36 三 混悬剂稳定性初步研 究 37 1 引言 37 2 混悬剂混悬于水稳定性考察 37 3 加速试验 38 4 讨论 40 四 混悬剂对犬复孔绦虫病的疗效试验 41 1 引言 41 2 材料和方法 42 3 结果 43 4 讨论 44 第四章 料）、对照品及其干混悬剂质量标准（草案） 45 一 料）质量标准 （草案） 45 二 照品质量标准 （草案） 51 三 混悬剂质量标准 （草案） 53 第五章 伊维菌素复方干混悬剂的初步研究 55 一 伊维菌素复方干混悬剂的制备 55 1 引言 55 2 仪器设备与材料 55 3 方法与结果 55 4 讨论 58 二 伊维菌素复方干混悬剂含量测定方法的建立 59 1 引言 59 2 仪器与试药 59 3 方法与结果 59 4 讨论 65 三 伊维菌素复方制剂对小鼠的急性毒性试验 66 1 材料和方法 66 2 结果 67 3 讨论 69 四 伊维菌素复方干混悬剂驱除犬消化道线虫试验 71 1 材料和方法 71 2 结果 72 3 讨论 72 第六章 结论 73 参考文献 74 附录 原始图谱索引 79 附图一 红外光谱图谱 80 附图二 紫外光谱图谱（甲醇为溶剂） 81 附图三 紫外光谱图谱（ 5%液为溶剂） 82 附图四 紫外光谱图谱（ 5%液为溶剂） 83 附图五 核磁共振氢谱图谱 84 附图六 核磁共振氢谱图谱（局部放大） 85 附图七 核磁共振氢谱（重水交换）图谱 86 附图八 核磁共振氢谱（重水交换）图谱（局部放大） 87 附图九 核磁共振碳谱图谱 88 附图十 核磁共振碳谱图谱（局部放大） 89 附图十一 质谱图谱 90 附图十二 质谱数据分析图谱 91 附图十三 质谱数据分析图谱（续） 92 附图十四 紫外光谱图谱（甲醇为溶剂） 93 附图十五 紫外光谱图谱（甲醇为溶剂） 94 附图十六 合溶液的紫外光谱图谱（甲醇为溶剂） 95 致谢 96 作者简历 97 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 1 第一章 文献综述 1 引言 寄生虫病种类繁多、散布广泛，是家畜极为常见、危害严重的疾病。寄生虫病给畜牧业造成的经济损失包括直接经济损失和防治费用。某些寄生虫夺取家畜所需的营养物，有 的在幼虫阶段在动物体内移行，引起动物组织损伤或释放毒素，对机体造成危害 ， 如导致家畜消瘦、衰弱、贫血，甚至造成死亡。因而，寄生虫病严重影响肉、乳、蛋的产量 ， 影响皮毛质量和役畜的使役能力 ， 某些人畜共患寄生虫病还直接危害人类的健康。因此 ， 寄生虫病不仅妨碍畜牧业的发展 ， 造成巨大的经济损失 ， 而且也是最普遍、最严重的公共卫生问题（赵辉元 ， 1996；孔繁瑶， 1981）。当前发展畜牧业的主要障碍是畜禽疫病。一些重大的畜禽传染病往往给一个国家或地区的国民经济带来致命性的打击，如欧洲的 “疯牛病 ”、香港发生的 “禽流感事件 ”、马来 西亚由 毒引起猪的脑炎等。在当今世界，我国是一个举足轻重的畜牧业生产大国，猪、羊、禽、兔饲养量均位居世界第一，牛的饲养量仅次于印度。但我国畜产品出口是小国，出口量不到总产量的 1。这不是产量问题，而 主要 是产品药物残留超标问题，药物残留超标归根到底是疾病问题。欧盟曾多次派兽医专家到我国考察，都因动物疾病的控制问题始终都没有达成进口我国肉类产品的协议。可见进行动物重大 疫 病和人畜共患病的研究与控制，对国民经济和人民健康具有举足轻重的作用。 近 10 多年来，对传播快、病死率高的烈性疫病，尤其对可能危及人类健 康及生命安全的畜禽疫病的监测、防治技术研究和体系建设等方面加大了投入，成效显著。相比之下，急性死亡率相对较低，而经济损失巨大的畜禽寄生虫病，由于科技和资金的投入不足，适合于生产的新技术不多，寄生虫病防治技术基本没有较大突破和创新，化学防治仍是目前主导的防治手段（ et 1999； 1997）。由于抗药性的日益严重和原有抗寄生虫药物本身的缺陷，新药的开发是寄生虫病化学防治中非常重要的问题，也是推动寄生虫化学防治的根本。抗寄生虫药物的发展趋势是：抗虫谱越来越广，抗虫活性越来越强， 毒副作用越来越小。 近年来 ， 为一种高效、广谱抗动物与人体寄生虫、细菌和真菌感染的药物被广泛关注 ， 它是美国药品和食品监督管理局（ 准的第一个和唯一的用于治疗隐孢子虫属的药物，也是 40 多年来批准用于治疗贾第虫属的第一种新药（ 2003；陈阜新等 ， 2004） ， 目前在澳大利亚、新西兰、美国、加拿大、墨西哥等国家上市，我国还没有该产品。 2 用于 治疗绦虫、线虫和鞭虫等胃肠道寄生虫感染的有效药物 (1982)，同时也是一种很有前景的抑制真菌剂和灭螺剂（ et 1976）。大量临床试验研究表明， 阴道毛滴虫（ 溶组织内阿米巴（ 犬复孔绦虫（ 豌豆形带绦虫（ 以及抗皮肤中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 2 真菌感染 (et 1998； et 1997； et 1998) 等。 3 理化性质 硝基噻唑酰胺化合物，化学名 是 252 ） 苯甲酰胺 2-（ 5其分子式是 子量为 点为 202 ，结构式见图 1（ a）。通常 一种稳定的淡黄色结晶状粉末（ et 1985)，纯度可达 98%；不溶于水，微溶于乙醇，可溶于二甲亚砜（ 有机溶剂。 a ) n i t a z o x a n i d e R = C C H 3O( b ) t i z o x a n i d e R = H( c ) t i z o x a n i d e g l u c u r o n i d e R = G l u c -( d ) t i z o x a n i d e s u l f f a t e R = O 3 S O - N H(e) H 2 C H(f) (g) 1in 药代动力学研究 目前 上市产品主要是口服制剂 (人用的混悬剂、包衣片剂及马用的糊剂等 )，现对口服给药后 其代谢产物的药代动力学研究作简要介绍。 （ et 1996）对 6 名健康志愿者的研究表明：口服 ，并不能在血浆与尿中检测到原形药物。这是因为 在水相介质中自发水解为 T（ 结构式见图 1b） 。研究表明，口服单剂量 500 衣片， 26h 后可检测到 T 的峰浓度 ，血药浓度 时间曲线下面积 h/L，半衰期为 （ et 2000）研究发现 口服 给药后并不能在诸如血浆、尿液或粪便等样品中检测到原形药物的存在。体外代谢试验结果表明，当不用微粒体或用热灭活的微粒体孵育 2h 后，大约 35 的 乙酰基转化为 T。有微粒体参与时，脱乙酰化的速率会快得多，孵育 15仅有痕量的 在。在体内血浆酯酶作用于 酰基水解速率将中国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 3 更快，并且受 、温度等因素影响。 37 时 血浆消除半衰期仅为 6 （ et 2002）报道进食同时服用 提高其生物利用度。 32 名男性健康志愿者随机分为 4 组，每组中有 2 人服用安慰剂， 6 人服用单剂量的 4 组分别服 1、 2、3 和 4g）。首先在空腹的条件下服药 1 次， 1 周后同时给予标准早餐再服药 1 次。两次分别于 24 和 一代谢产物，结构式见图 1c） )。结果显示，无论何剂量组， 食物同服后 T 和 血药浓度均比未吃早餐的情况提高了约一倍，同时达峰时间和表观半衰期也随给药剂量成比例增加。 口服给药后， 人体内迅速水解为活性代谢产物 T（ et 2000） 。而 T 通过 各种途径转化为其他代谢产物，如 、 、 以及 等，其结构式分别见图 1 （ c） 、 （ d） 、 （ e） 、（ f） 、 （ g） 。 T 经口服吸收后主要排泄于尿液、胆汁和粪便中 （ et 2000） ，并且为粪便中可检测到的唯一代谢产物 （ 2002） 。 T 与血浆蛋白结合率极高（ ）（ et 1997） ， 因而当 某种血浆蛋白结合率较高、治疗窗狭窄的药物同时服用时，应注意它们之间可能发生结合位点的竞争作用。但目前为止未见到关于 其他药物相互作用的报道（ et 2005） 。 尿中检测到的主要代谢产物（ et 2000），同时也存在于血浆、胆汁中。 单剂量口服 500 有给药剂量的 8 会以代谢产物的形式在尿液中被检出，其中5以 T 的形式存在， 3以 形式出现，而 占 （ et 1996）。 有研究（ 2003）将含有 32 抗原虫糊剂用于治疗由神经细胞肉孢子虫（ 引起的马原生动物脑脊髓炎（ 分别一次或多次 给 8 匹健康杂种马（雌雄各半） 连续 口服 7 天该糊剂。结果表明， 马体内很快代谢为活性代谢产物 T，给药 24h 后即检测不到 T。该法最低检测限（ 低定量限（ 次口服糊剂 50mg/ kgh ，多次口服 kgh。这些数据显示，在 28 天治疗 周 期内，多次给药血浆中活性代谢产物 T 的血药浓度始终可达到治疗神经细胞肉孢子虫的要求。 5 药理、毒理学研究 用机制 原生动 物的作用机制被广泛认为与其干扰丙酮酸盐 : 铁氧化还原蛋白酶（ 与的酶依赖性电子转移作用有关（ 国农业科学院硕士学位论文 第一章 文献综述 4 2002）。此作用对于厌氧能量代谢来说是必不可少的，而 坏了厌氧和微需氧有机体的能量代谢，从而有效地抑制了原生动物的生长，并且避免了传统用于抗原生动物药物的毒性（ 2002）。研究表明，在无铁氧化还原蛋白存在的前提下，蓝氏贾第鞭毛 虫 ( 直接通过电子转移方式还原了 小隐孢子虫( 化的 白序列与蓝氏贾第鞭毛虫的极为相似。但是干扰 依赖的电子转移作用并不是 挥抗虫活性的唯一机制，因有报道（ et 998） 可以表现为对 成的剂量依赖性作用 ， 但确切机制还不清楚。也有研究（ et 1995）显示， 挥抗菌活性的时候硝基在靶生物中被还原，与甲硝达唑相比， 需的氧 化还原电位至少比前者低 。 理学研究 据报道 (1976)， 小鼠急性毒性经口大于 4000mg/腹腔注射大于95mg/（ et 1985）曾对 一般毒理学作