【毕业学位论文】（Word原稿）利用微卫星标记分析中国家兔的遗传多样性野生动植物保护与利用硕士论文

密级： 论文编号： 中国农业科学院 硕士学位论文 利用微卫星标记分析中国家兔的 遗传多样性 F F 国农业科学院硕士学位论文 摘 要 I 摘 要 本研究利用 10 个微卫星 记对七个家兔品种进行了遗传检测。利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测微卫星的 增产物，计算了七个家兔品种（ 9 个家兔群体）样本在 10 个微卫星基因座上的等位基因频率、微卫星的多态信息含量（ 各群体遗传杂合度、群体间的遗传距离、并根据遗传距离对这几个群体进 行了聚类分析。 结果表明：所选择的 10 个微卫星位点在所检测群体中均表现了较好的多态性，平均多态信息含量为 均杂合度范围在 明所研究的家兔品种的遗传多样性较丰富，还可以做进一步的选择利用。根据遗传距离所做的聚类分析图表明吉戎 系和吉戎 系、哈尔滨大白兔、塞北兔的亲缘关系依次较近，与它们的培育历史相吻合。 本研究采用的 10 个微卫星位点是在查阅国外文献筛选的，在国内鲜见报道。所研究的品种中密州黄兔、密州白兔也未见利用微卫星对它们的分析报道。本研究拓宽了微卫星在家兔 研究中的应用，为正确评价本试验所研究的培育品种的遗传多样性资源价值，制定合理可行的保护方案，预测杂种优势提供理论依据。从而为我国兔业做出贡献 。 关键词 家兔，微卫星，遗传多样性 中国农业科学院硕士学位论文 摘 要 of on 0 CR of by 0 in on in po of in is of to J to is in is r in of in of of in to 中国农业科学院硕士学位论文 目 录 录 第一章 畜禽遗传多样性的保护及方法 . 1 禽遗传多样性的保护 . 1 传多样性的概念 . 1 传多样性的保护和保存方式 . 2 畜遗传多样性保护的策略 . 3 传多样性的重要意义 . 3 遗传标记的发展 . 4 . 5 于 . 5 . 6 第二章 微卫星技术及其在遗传育种中的应用 . 8 卫星标记概述 . 8 卫星标记产生的机制 . 8 卫星标记的特点 . 9 卫星标记在动物遗传育种中的应用 . 10 定亲缘关系 . 10 传图谱的构建 . 10 量性状（ 位 . 11 传多样性估计 . 11 记辅助选择 . 12 第三章 家兔品种概述及微卫星在家兔中的应用 . 13 兔的生物学特性 . 13 兔品种概述 . 13 卫星在家兔遗传育种中的应用进展 . 15 内研究进展 . 15 外研究进展 . 16 第四章 研究意义和目的 . 19 第五章 材料与方法 . 21 料 . 21 验方法 . 23 性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离基因型 . 25 据统计 . 26 中国农业科学院硕士学位论文 目 录 六章 结果与分析 . 28 因组 . 28 卫星引物的 . 28 有家兔品种在各位点的等位基因分布及频率 . 33 种内遗传变异的检测结果 . 38 态信息含量 . 38 合度和有效等位基因数 . 38 遗传分化系数 . 39 传距离与聚类分析结果 . 45 传距离 . 45 类分析 . 46 第七章 讨论 . 50 于取样问题 . 50 于家兔基因组 . 50 物的选择 . 50 . 51 因组 . 52 于变性聚丙酰胺凝胶电泳及染色问题 . 52 型及“影子带”问题 . 53 于群体内的遗传变异 . 54 关群体间的遗传变异 . 55 第八章 全文结论 . 57 参考文献 . 58 致谢 . 62 作者简历 . 63 中国农业科学院硕士学位论文 V 英文缩略表 英文缩写 英文全称 中文名称 卫星 制性片段长度多态性 择区域扩增多态性 随机扩增多态性 单核苷酸多态性 量性状座位 合酶链式反应 多态信息含量 H 合度 记辅助选择 D 传距离 均非加权成组配对法 近结合法 丙烯酰胺 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 畜禽遗传多样性的 保护及方法 1 第一章 畜禽遗传多样性的保护及方法 我国地大物博，拥有十分丰富的动物遗传资源，这些资源作为生物多样性的重要组成部分，在生态、社会经济、科学教育和娱乐等方面具有重要的价值。经过选择的家养动物品种资源，构成了现代畜牧业的基础。据联合国粮农组织（ 1996）统计，在全世界 2191 个畜禽品种中，中国有 597 个，占世界总数的四分之一。但是，在世界范围内应用于畜牧生产的品种资源只占很小一部分，绝大多数地方品种在与高度培育的商业化品种 的竞争中处于劣势，数量在迅速减少，有至少 30%的动物遗传资源面临灭绝的危险。自改革开放以来，资源保护工作一直被政府和学术界高度重视，但专门化高产品种（系）的推广，对我国畜禽资源的保护带来的冲击也是十分巨大的，据有关部门统计，处于濒危状态的有 22 个，并有加速灭绝的倾向（曲鲁江， 2004）。 我国畜禽品种资源丰富多样，在长期的畜牧业生产实践中，培育出了一批适合当地自然条件而且生产性能良好、遗传性能稳定的畜禽品种。畜禽品种资源是一种珍贵的自然资源，又是畜牧业生产和可持续发展的基础和保证。建立配套完善的畜禽品种资源 保护体系，在此基础上进一步选育、利用、推广，发挥畜禽品种资源的潜能，对于促进畜牧业向高产、优质、高效及持续稳定发展，具有十分重要的意义和作用。 我国养兔的历史悠久，早在 2000 年前的先秦时代就已经开始，但仅供宫廷内享用。如今我国已经成为世界兔毛产量最多、兔毛出口最多、兔肉产量最多、兔肉出口最多的占四个世界第一的国家。在两千年的养兔历史中，祖先选育了许多优秀的地方品种，如福建黄兔、云南花兔、四川白兔、江西万载兔等。新中国成立后，养兔育种专家根据生产需要，培育了许多新品种，如吉戎 -系、吉戎 -系、哈尔滨大白兔 、塞北兔、豫丰黄兔等。另外，除了被鉴定的品种之外，我国还有一些未经过品种鉴定的具有优良性状的家兔群体，它们也是构成我国家兔资源的一部分，所以也要给予重视。近些年随着我国经济的发展及加入 ，与国外的贸易往来更加密切，许多国外家兔品种引进我国，与当地的品种大量杂交进行品种改良，加上家兔繁殖快的特点，导致在提高生产性能的同时，我国的一些品种资源受到了强烈的冲击，致使一些品种消失或数量急剧下降。众所周知，培育一个适合我国国情的新品种需要经育种专家经过数十年的辛勤努力。我国的这些品种资源是宝贵的基因库，如果它们 的某些特殊或未被发现的遗传基因或具有适应某些特定生态环境条件的遗传素材一旦消失，就永不复得。随着转基因技术的出现，地球上的全部物种实际上已经可作为一个对于改良具有潜在作用的基因库。因此在开发利用我国家兔品种资源的同时，也应该保护品种资源，即主要保护它们的遗传多样性，目的是为了我国家兔育种的可持续性发展，为我国未来培育新品种保存丰富的“基因库”。 1. 1 畜禽遗传多样性的保护 遗传多样性的概念 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 畜禽遗传多样性的 保护及方法 2 遗传多样性（ 广义上是指种内或种间表现在分子、细胞和个体三个水平的遗传变异程度， 狭义上则主要指种内不同群体和个体间的遗传变异程度。遗传多样性是生物多样性 (重要组成部分之一，是生物长期以来积累的宝贵财富，同时也是生物进化的物质基础，遗传多样性的研究与保护在生物多样性保护中占有重要的地位。 所有的遗传多样性都发生在分子水平。自然界中存在的变异源于突变的积累，这些突变都经过自然选择。一些中性突变通过随机过程整合到基因组中，上述过程形成了丰富的遗传多样性。遗传多样性体现在不同水平上：居群（ 译种群、群体）水平、个体水平、组织和 细胞水平以及分子水平 ( et 990)。通常，遗传多样性最直接的表达形式就是遗传变异性的高低。在自然界，由于个体生命的有限性，尤其特定分布格局的居群或群体系统（宗、亚种、种）才是进化的基本单位，故遗传多样性不仅包括遗传变异高低，也包括遗传变异分布格局，即居群的遗传结构，居群遗传结构上的差异是遗传多样性的一种重要体现，一个物种的进化潜力和抵御不良环境的能力取决于种内遗传变异的大小，也有赖于遗传变异的居群结构（ ， 1991）。 传多样性的保护和保存方式 1982 年 10 月 28 日联合国大会第 371 号决议通过的世界自然宪章已经明文规定的“地球上遗传活力不得加以损害；不论是野生或家养，各种生命形式都必须至少维持其足以生存繁衍的数量”。遗传多样性的保护的重要内容就是对遗传资源（物种），以及携带生命全部信息的精子、卵、胚胎和基因组等的保护。 （ 1）原地保护（ on or in 遗传多样性的原地保护是指设立国家公园、自然保护区和禁猎区等有效的就地保护措施。我国自然保护区的数目发展很快，迄今已建立了 800 多处，其中 70 多处为国家级自然保护区，占全国总面积的 7%。这些自然保护区若管理得当，无疑将在遗传多样性的保存工作中起到不可替代的作用。 （ 2）迁地保护（ or 遗传多样性的迁地保护是指采集遗传多样性中关键种类或其部分，将其带出原产地，设立专门地点集中保存管理。建立珍稀野生动物繁育中心和稀有畜禽保护中心是保存动物遗传多样性的常见方式。迁地保护区内动物繁殖所面临的最大的问题是由于种群过小所带来的遗传问题，即近亲繁殖降低个体适 应性的问题。圈养繁殖的种群只有保持了野外种群的原本性，才可能真正称为“保护繁殖 ”（ 因此，在必要时，应把这些繁殖动物重新返回大自然。为达到这一目标，圈养繁殖必须尽可能地保持遗传变化的可能性，即原来祖先基因的潜能。 （ 3）生物技术在畜禽遗传多样性保护中的应用 畜禽品种的遗传多样性的评估能确定其遗传资源的独特性、与其它品种的差别、遗传基础的宽窄，以及濒危与否等。由于微卫星 有数目多、在基因组中分布广且均匀，多态信息含量高、易于自动化检测等优点，而成为当前遗传多样 性评估的首选分子标记。联合国粮农组织（ 全球推荐了一套畜禽遗传多样性分子评估的方法，称为 划（ 畜遗传多样性评定）。 核心是利用 国际动物遗传研究会所推荐的基因组中的一套微卫星标记，中国农业科学院硕士学位论文 第一章 畜禽遗传多样性的 保护及方法 3 评估畜禽品种资源的遗传多样性。 另外，一些繁殖新技术以及胚胎工程技术的应用对动物遗传多样性的保护也具有重要 的作用，如人工授精、胚胎分割、胚胎冷冻、胚胎移植、卵的体外培养和成熟、动物克隆技术以及标记辅助选择等。在遗传多样性和资源保存过程中，建立有现代化管理和严格质量控制的动物种质资源库，收集并超低温保存野生和家养动物的精液、胚胎以及组织培养物等，这也是目前颇引人注目的保存措施。 畜遗传多样性保护的策略 （ 1）保护与改良相结合、有选择地保护 确定保种目标，尽量使保护与改进相结合，改中有保，既保护了多样性，又提高了品种的生产性能；既为未来的发展贮备能量，又提高品种的经济价值，使品种能适应当前社会经济的需 要，真正体现了“保护是发展的一部分”的原则。 （ 2）发掘、保护、评估和利用相结合 家畜遗传多样性的保护要不断发掘新的品种和新的特异性状，而新的特异性状有赖于对品种的深入评估。例如，我国很多地方品种具有某些抗逆和抗病的特性，如能对各品种进行深入研究，就能将这些宝贵特性开发出来加以利用，从而产生巨大的经济效益。发掘、评估、保护与利用四者相辅相成，缺一不可。 （ 3）系统保种与目标保种相结合 所谓系统保护，就是以每种家畜的全部遗传资源作为一个系统，利用系统论的方法对全国的遗传资源保存进行整体的规划，打破品种的界限， 统一规划保种目标，然后将这些保种目标经过系统规划分配到各品种，每个品种分担保护 3 5 个保种性状。在承担保种任务的各品种中，由于有明确的保种任务，就能够采取设立相对较小的保种群，结合地方品种的改良，实施适当的选育，从而能够有效地实施保种与选育的结合，进一步降低保种费用，这样更符合家畜遗传多样性保护的目的。 传多样性的重要意义 一个物种就是一个基因库，除了孤雌生殖和同卵双生子外，没有两个个体的基因组是完全一致的，遗传多样性蕴藏于每一个物种的每一个个体中。遗传多样性的存在是自然选择和生物体自发突变两 者动态平衡的结果。 遗传多样性的减少及丧失产生的有害影响是极其深远的。首先，遗传多样性是进化和适应的基础，丰富的遗传多样性使群体增强了对外部环境的适应性和对环境变化以及微生物侵袭的抵抗力。种内遗传多样性或变异性愈丰富，物种对环境变化的适应能力愈大，其进化的潜力也就愈大，有助于保持物种和整个生态系统的多样性。遗传的均一性威胁群体或物种的生存，尤其是在一些濒危物种中，如遗传多样性极度贫乏的大熊猫，物种的群体遗传结构和遗传多样性显得尤其重要。其次，遗传多样性的保护对于人类来说有着直接的经济意义。家养动物及其野生近 缘种的遗传多样性为畜禽遗传育种提供了许多不可缺少的基因材料，是畜牧业持续发展的基础，是未来畜牧业中国农业科学院硕士学位论文 第一章 畜禽遗传多样性的 保护及方法 4 不断适应新的需要而进行改造的原材料库。畜禽高产、抗逆和生产品质的大幅度提高，正是遗传多样性在家畜育种中应用的直接结果。离开丰富多彩的遗传基因的贮存，家畜的进一步改进将寸步难行，只能依靠自然和人工的突变来有目的的改进家畜，就像大海捞针一样困难，带有极大的盲目性和偶然性。可见人类的生存和健康得益于遗传多样性，遗传多样性的缩小和消失，将使我们自己和子孙后代失去许多获益的机会。 遗传多样性是生物多样性的核心内容，它包括种 间和种内不同群体、个体间的遗传变异程度。随着外来品种的引进，我国许多畜禽地方品种由于严酷的竞争和排挤而逐渐减少甚至濒临灭绝，数千年历史积累起来的丰富多彩的畜禽遗传多样性面临着迅速缩小的危险。采取细胞遗传、生化遗传和分子遗传学等多种措施对我国丰富的家养动物遗传资源进行评估、保护和利用，不仅是我国未来动物遗传育种工作的需要，而且也是我们对世界动物遗传资源保护应尽的责任。 在群体遗传学研究中引入分子生物学技术，给群体遗传学带来了革命性的变化。人们可以根据蛋白质中氨基酸的顺序以及 核苷酸的变化，并结合群体遗传 学的统计方法，对生物的进化机制以及生命的起源进行更深入的探讨（李宁， 2003）。 传标记的发展 遗传标记是指能够用以区别生物个体或群体及其特定基因型、并能稳定遗传的物质标志。与遗传学相伴而生的遗传标记，在相关学科发展的影响下，经历了从宏观到微观，从细胞外到细胞内，从外部表型到蛋白质再到 发展过程。 几千年来，我国人民通过体型外貌特征进行个体选择，培育了许多具有优良特性的地方动物品种。这种能够用肉眼识别和观察、明确显示遗传多样性的外观性状称为形态学标记（ 动物 形态学标记主要包括动物的毛色、角形、冠形、耳型、体型、外貌等。伯乐相马是人们利用形态标记进行个体优良特征鉴定的一个先例。形态标记简单直观，但标记数目少，多态性低，并且容易受到外界环境条件的影响，因此，依据它进行选择的准确性差，所需时间较长，选择效率较低。 1910 年以后，在细胞遗传学发展的基础上诞生了细胞遗传标记（ 细胞遗传标记主要是指染色体核型（染色体数目、大小、随体、着丝粒位置、核仁组织区等）、带型（ Q、 G、 C、 R）和数量特征的变异等，它们分别反映了 染色体在结构上和数量上的遗传多态性。细胞遗传标记克服了形态标记易受环境影响的缺点，呈孟德尔方式遗传，多态性集中表现在染色体高度重复 构的异染色质所在的部位。但是，它的生产需要花费大量的人力来培育和选择，细胞遗传标记经常伴有对生物有害的表型效应，有些物种忍受染色体结构和数目变异的能力较差，或者观测和鉴定比较困难，难以获得相应的标记材料，从而限制了细胞遗传标记的应用。 随着人类社会的进步和科学技术的发展，人们进一步认识到免疫遗传标记（ 生化遗传标记（ 免疫遗传学标记是以动物的免疫学特性为标记，包括红细胞抗原多态性和白细胞抗原多态性。动物存在不同的血液型，且多态性丰富。 生化遗传标记主要是指同一动物个体中具有相同功能的蛋白质存在两种以上的变异体。 1955中国农业科学院硕士学位论文 第一章 畜禽遗传多样性的 保护及方法 5 年 淀粉凝胶为载体进行电泳，成功地把血清蛋白、乳蛋白以及蛋清蛋白区分出多种成分，并发现个体间存在差异，此后，蛋白质多态性研究得以广泛开展，丰富了遗传标记研究的内容。 免疫遗传标记和生化遗传标记与形态学标记和细胞遗传标记相比，数量更丰富，受环境影响更小，检测手段简便，是一种较好的遗传标记。然而，两者仍有不足之处。血液型和蛋白质型都是基因表达的产物，局限于反映基因组编码区的遗传信息，且标记的数量还比较有限，不能很好的覆盖整个基因组。 20 世纪 70 年代以后，随着分子生物学的发展，相继建立了 多种分子遗传标记（ 测技术，开创了遗传标记研究的新阶段。分子遗传标记是一种新的以 态性为基础的遗传标记，与其他遗传标记相比，分子遗传标记具有无表型效应、不受环境的限制 和影响、普遍存在于所有生物、数量丰富等特殊优势，为动物遗传改良的研究提供了新的途径和方法，其重要性日趋明显。理想的分子遗传标记应具备以下特点：遗传多态性高；检测手段简单快捷，易于实现自动化；遗传共显性，即在分离群中能够分离出等位基因的种基因型 . 传标记的种类及其特点 20 世纪 80 年代后期是分子生物学飞速发展的时代，从分子水平上对基因结构和功能进行深入研究，以 多态性为标记进行遗传分析的分子遗传标记具有较为普遍、遗传稳定、准确度高等优点，被广泛应用于遗传的各个领域，具有广泛的应用前景。分子遗 传标记包括 制性酶切片段长度多态性）、 。目前，遗传标记突破了仅限于检测重组率方面的应用，已被广泛应用于动物个体和群体的遗传监测、基因定位、动物的选种、育种、疾病检测等。 于 交技术的分子标记 限制性片段长度多态性 ( m,记 是 20 世纪 80 年代初发展的第一代分子标记技术 。其原理是检测 限制性内切酶酶切后形成的特定 段的大小，因此凡是可以引起酶切位点变异的突变如点突变(新产生和去除酶切位点 )和一段 重新组织 (如插入和缺失造成酶切位点间的长度发生变化 )等均可导致 产生。 术主要包括以下基本步骤：基因组 提取、用特定的限制性内切酶酶切 产生的限制性片段与特异设计的接头 (接。按此得到的限制性片段称为“带标签的片段”。这种片段很容易在与接头互补 的引物存在时，进行标准的 增。 物经琼脂糖凝胶电泳或 色或银染后，清晰呈现片段长度的多态性。分开 段、把 段转移到滤膜上、利用放射性标记的探针显示特定的 段 (通过 交 )、分析结果。探针为单拷贝或低拷贝的 隆 (基因组 呈共显性遗传。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 畜禽遗传多样性的 保护及方法 6 遗传分析中得到了广泛的应用，它能在 平上直接测定遗传变异，与传统的遗传标记相比，其具有以下优点： 记无表型效应，其检测不受外界 条件、性别及发育阶段的影响； 记等位基因间是显隐性的，非等位基因间几乎不存在上位效应、互不干涉； 源于基因组 自然变异，这些变异在数量上几乎不受限制，可以选取足够数量能代表基因组的 记。其缺点是： 内切酶的选用密切相关，只能选用一定的内切酶，某个位点才可能表现出多态性；而且它不能检测出酶切后相同长度 断内的碱基变异；操作复杂，耗时费力成本高。 合酶链式反应 )为基础的分子标记 术问世不久，便以其简便、快速和高效 等特点迅速成为分子生物学研究的有力工具，尤其是在 子标记技术的发展上更是起到了人们始料不及的巨大作用。 选择区域扩增多态性 ( 1993 年由荷兰科学家 立的一种检测 态性新方法，即扩增的片段长度多态性，获得欧洲专利局专利。原理是基因组 酶切的限制性片段的选择性扩增，由于不同基因组 酶切片段存在差异，从而产生扩增产物的多态性。 析方法是：提取样本 行浓度和质量检测选择限制性内切酶 (一般为 在适宜的缓冲体系中酶切，酶切片断与接头相联 (在 作用下 )形成带有接头的特异性片断用磁珠 (粉 )在 盐溶液中反复清洗 2 3 次选择带有特定接头性状的片断 增利用同位素 (32P 或 33 P)标记 物选择扩增反应 性产物在聚丙烯酰胺变性胶 (含尿素 )上电泳把凝胶转移到滤纸上用干胶仪处理在 X 片上感光数周后清洗胶片分析结果。 术 主要应用于鉴定品种，检测品种质量和纯度。 率之所以高，主要因为它在一次 增中能够检测到大量的多态性位点，而不是因为每个位点具有丰富的等位基因形式。 显性标记，理论上每个位点仅有 2 个等位基因形式。 术结合了 术的特点，具有 可靠性和 术的高效性。由于 生的多态性远远的超过了 技术，因而被认为是指纹图谱技术中多态性较丰富的一项技术，其多态性丰富，一般可检测到 40 150 个 扩增产物；呈共显性表达，不受环境影响，无复等位效应；带纹丰富，灵敏度高，快速高效，如一个 品，可作 4000 个反应，获 8 万个标记， 650 万个条带纹。而且， 定性好，重复性强，由于 用的限制性酶种类很多，则标记数目多，故 常适合绘制品种的指纹图谱及分类研究。但由于 申请专利，使用起来较为昂贵； 析需要同位素或非同位素标记引物，必须具有放射性同位素操作过程的特殊防护措施以及配套的仪器装置，且对 度和内切酶的质量要求较高 ； 部分的标记呈共显性遗传，操作不如 便。 随机扩增多态性 记是美国 在 术基础上发展起来的一种 态标记，它利用一系列碱基顺序随机排列的寡核苷酸单链为引物，对靶基因组 行 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 畜禽遗传多样性的 保护及方法 7 增，扩增产物经凝胶电泳分离。其特点包括： (1)不需 针，设计引物也不需要知道序列信息； (2)用一个引物就可扩增出许多片段 (一般一个引 物可扩增 6 12 条片段，但对某些材料可能不能产生扩增产物 )，总的来说 检测多态性时是一种相当快速的方法； (3)技术简单，析不涉及 交、放射自显影或其它技术； (4)不同于 析， 析只需少量 品； (5)成本较低，因为随机引物可在公司买到，其价格不高； (6)记一般是显性遗传 (极少数是共显性遗传的 )，这样对扩增产物的记录就可记为“有 /无”，但这也意味着不能鉴别杂合子和纯合子； (7)析中存在的最大问题是重复性不太高，因 为在 应中条件的变化会引起一些扩增产物的改变；但是，如果把条件标准化，还是可以获得重复结果；(8)由于存在共迁移问题，在不同个体中出现相同分子量的带后，并不能保证这些个体拥有同一条(同源 )的片段；同时，在胶上看见的一条带也有可能包含了不同的扩增产物，因为所用的凝胶电泳类型 (一般是琼脂糖凝胶电泳 )只能分开不同大小的片段，而不能分开有不同碱基序列但有相同大小的片段。 线粒体 记 高等动物唯一的核外遗传物质，是一种约 双链超螺旋环状分子。其基因结构、遗 传密码和复制具有一些不同于核基因组的特点。遗传方式为母性遗传，比核 有更高的进化速度，采用滚环型半保留复制，也有特殊的 D 环 (制。由于碱基取代、长度变化和序列重排等造成了 多态性。故可用限制性酶切技术直接探察 态性。通过对 态性分析，可以了解群体遗传结构、基因流动及系统发育等方面情况。近年来对人类 疾病关系的研究发现，许多不遵守孟德尔遗传规律。这为该技术的应用提供了广阔前景。 单核苷酸多态性 (记 同一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异，因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测是很有意义的。目前 为一种新的分子标记，属第三代分子标记技术，已有 200 多个标记定位于人类染色体上，在植物上也在进行开发研究。可在胶上也可不在胶上就能检测出 检测 最佳方法是最近发展起来的 片技术。 总之，令人满意的理想的分子标记，须达到以下几个要求：（ 1） 具有高的多态性（ 2）共显性遗传即利用分子标记可鉴别二倍体中杂合和纯合 基因型（ 3）能明确鉴别等位基因（ 4）在基因组中频繁出现，甚至贯穿整个基因组（ 5）除特殊分子标记外，要求分子标记均匀分布于整个基因组（ 6）选择中性（即无基因多效性）（ 7）检测手段简单、快捷（ 8）开发成本和使用成本尽量低廉（ 9）重复性好，便于数据交换（ 10）容易获得探针或