10.氯尼达明片质量研究

1、氯尼达明片质量研究试验资料及文献资料氯尼达明片为已在国外上市销售的制剂， 目前国内尚未有厂家生产销售，本 品属于化学药品注册分类3类。按照相关要求，我们在原料药研究的基础上，对 本品制成片剂的工艺进行了试验，并对研制的3批制剂进行了质量研究工作，总 结如下：中文名称：氯尼达明片英 文名：Lonidamine Tablets 汉语拼音：L midami ng Pia n 化学结构式：分子式：G5H0C2NQ分子量：321.161、试样与对照品氯尼达明片，批号：100501、100502、100503。氯尼达明对照品：由原料精制而成，批号：100404,含量：99.72% （供含量 测定用）。2、

2、性状氯尼达明原料为淡黄色粉末，每片只含150mg主药，考虑到制粒过程或不同批次原料之间可能引起的颜色的微弱变化，故描述“本品白色至淡黄色片剂” 三批样品（100501、100502、100503）性状均为淡黄色片剂3、 鉴别 氯尼达明原料采用紫外色谱法、IR法、高效液相色谱法鉴别。由于辅料的干扰，IR法鉴别制剂中不采用。沿用 HPLC法和UV-法。3.1 HPLC 法本品制剂中含量测定采用HPLC法，因此直接采用含量测定项下供试品与对 照品主峰的保留时间一致性作为鉴别，简单方便。在含量测定项下记录的色谱图中，三批样品供试品主峰的保留时间与对照品 主峰的主峰保留时间的一致。均符合规定，因此定入标

3、准正文。3.2 UV-法取本品细粉适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1ml含氯尼达明0.025mg的溶液；另精密称取氯尼达明对照品适量，同法制成对照品溶液；照中国药典 2005年版二部（附录W A）测定。结果：三批样品供试品溶液与对照品溶液的 最大吸收波长一致，均在 278nm的波长处有最大吸收峰，空白辅料溶剂在此波 长下无吸收。因此列入标准正文。4、检查4.2溶出度药物的溶出直接影响药物在体内的吸收和利用，为了保证药品的疗效，我们对溶出度进行了考察，并进行了方法学研究。4.2.1仪器RC-6D智能溶出度测定仪（天津市国铭科技有限公司）TU-1810型紫外可见分光光度计（北京普析通用）。4.2.

4、2溶出介质的选择氯尼达明片每片含主药氯尼达明 150mg,在水及0.1mol/L的盐酸溶液中不 溶，所以选择十二烷基硫酸钠溶液作为溶出介质。我们考察了氯尼达明片在不同浓度的十二烷基硫酸钠溶液中的溶出情况， 考 察浓度：0.1%、0.2%、0.5%、1.0%，照溶出度测定法（中国药典 2005年版二 部附录X C第二法），转速：75转/分钟，取样时间：45分钟，在278nm波长处 测定吸光值，计算溶出度。结果在上述溶出介质中，溶出度结果见下表：表1溶出介质选择试验结果溶液浓度123456平均值0.1%60.364.266.866.155.367.963.40.2%75.077.574.274.4

5、76.594.878.70.5%85.085.486.984.475.987.684.21.0%94.393.197.195.495.396.695.3以上结果表明：不同浓度的盐酸溶液对氯尼达明片的溶出度影响较大，因此选择1.0%的十二烷基硫酸钠溶液作为溶出介质。423测定方法的选择每1ml中含氯尼达明25 g的1.0%的十二烷基硫酸钠溶液，紫外图谱显示均 在278nm波长处有吸收峰，因此采用紫外-可见分光光度法测定氯尼达明溶出度， 选择278nm波长为测定波长（见附图），取处方量的辅料同法制成阴性样品溶液， 于190400nm处扫描，结果在278nm处无吸收峰，说明处方中辅料对主药的测 定不

6、影响，专属性好。且滤膜在此溶剂和测定波长下不会产生干扰。溶出介质体积为900ml，取溶液滤过，精密量取 3ml，置10ml量瓶中，加 介质稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。4.2.4转速的选择照溶出度测定法（中国药典 2005年版二部附录X C第二法），以900ml的 1.0%的十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质，测定时间为 45分钟，考察50转/分钟 和75转/分钟的溶出情况，结果见表2表2 转速考察试验结果转速（转/分钟）123456平均值5094.393.794.995.692.894.794.37595.195.396.694.195.897.795.8结果：50转/分钟和75转/分钟条件下

7、，6片的平均溶出度分别为 94.3%和 95.8%，两者相近，因此选择50转/分作为测定的转速。4.2.5滤膜的吸附试验溶出液通常经过滤膜（中国药典规定滤膜孔径不大于0.8 m滤过以得到澄清的溶液，试验所用滤膜应是惰性的， 不能吸附溶出液中的有效成分，也不能被 溶出介质溶出干扰测定的物质。所以又考察了试验所用滤膜对主成分是否有吸 附：取本品1片，以1.0%的十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质，转速为50转/分钟， 取样时间45分钟，得到的液体分为两份，一份以滤膜滤过，一份离心滤过，取 清液于278nm下测定其吸收度分别为0.492和0.491。RSD为0.3%,表明滤膜对 主药无明显吸附。4.2.6

8、溶出度线性关系考察精密称取氯尼达明对照品约16.52mg,置100ml量瓶中，力卩乙腈50ml溶解， 加1.0%十二烷基硫酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，振摇溶解得含氯尼达明浓度为 165.2卩g/m的溶液，精密吸取1、2、3、4、5ml分别置10ml量瓶中，加1.0%十 二烷基硫酸钠溶液稀释至刻度， 摇匀，分别制成浓度为16.52卩g/ml 33.04卩g/ml 49.56卩g/ml 66.08卩g/ml 82.6卩g/m的溶液，在278nm下测定其吸收度。并以吸 收度对浓度作图，得回归方程，结果见下表3。表3溶出度线性试验结果试验号123456浓度（卩g/m）16.5233.0449.5666.

9、0882.616.52吸收度（A）0.1680.3320.4920.6640.8060.168回归方程Y = 0.0097X + 0.095相关系数R2=0.9993结果表明：氯尼达明测定浓度在16.5282.6卩g/m范围内，吸收度与浓度线性 关系良好。氯尼达明线性关系图427精密度试验取线性试验项下，浓度为49.56卩g/ml的溶液重复测定6次，结果见下表。表4精密度试验数据编号123456吸收度（A）0.4920.4920.4910.4910.4910.492平均值0.492RSD (%)0.11结果表明，本方法精密度良好。4.2.8重复性试验取本品（批号100501）细粉适量，精密称定

10、，共6份，分别加1.0%十二烷 基硫酸钠溶液制成每1ml约含50pg氯尼达明的供试品溶液，照紫外-可见分光 光度法（中国药典2005年版二部附录W A），在278nm的波长处测定吸收度。 结果见表5。表5溶出度重复性试验数据编号123456称样量（mg）47.2547.8347.0547.8747.1347.39吸光值0.4930.4950.4930.4980.4960.488W / A95.84296.62695.43696.12495.0297.111平均值96.027RSD%0.8结果表明RSD为0.8%，说明本测定方法重复性良好。4.2.9稳定性试验取428（重复性试验）项下一份供试品

11、溶液，分别于0、0.5、1、2、3小时测定吸收度，结果见下表。表6溶液稳定性试验结果时间（小时）00.5123吸收度0.4930.4930.4910.4920.488平均值0.491RSD（ %）0.42结果表明： 氯尼达明的1.0%十二烷基硫酸钠溶液在3小时内稳定性良好。429回收率试验称取处方量的辅料，分别加入处方量的60%、80%和100%的氯尼达明原料,混匀，以原料为对照，照6.4项下方法操作，计算回收率。结果见表7表7回收率试验结果编号处方量加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（ %）110.1210.0899.6260%10.039.9899.5310.2

12、110.22100.1413.3513.3399.9580%13.6213.67100.499.80.15613.5413.499716.7616.78100.18100%16.7416.81100.4916.5516.4899.6试验结果表明，氯尼达明的平均回收率为 99.8%, RSD为0.15%。表明本方 法准确度良好。通过对氯尼达明溶出度的线性、精密度、重复性、溶液稳定性、及回收率试 验的考察，结果均符合方法学验证要求，表明本方法准确、可行。4.2.10累积溶出度试验取本品6片，以脱气后的1.0%十二烷基硫酸钠溶液（900ml）为溶出介质， 转速为50转/分钟，按预定时间，分别于 5、

13、10、15、20、30、45和60min取样 5ml （取液后补加同量介质），过滤，取续滤液3ml，置10ml量瓶中，加溶出介 质稀释至刻度，测定，计算累积溶出度。结果见表810。表8累积溶出度试验结果（100501）时间（min）溶出量（）平均值（%）RSD(%)123456521.029.023.221.724.625.624.212.11053.047.757.253.247.752.251.872070.167.871.873.473.668.570.93.53087.582.889.684.085.486.085.92.84598.596.592.094.996.4100.096.4

14、2.96098.999.2100.996.297.8100.9991.8表9累积溶出度试验结果（100502）时间(min)溶出量（）平均值（%）RSD(%)123456522.020.826.117.620.422.721.6131054.846.857.253.639.954.451.112.72075.972.372.370.081.871.974.05.83086.790.085.882.987.788.186.92.84593.594.894.195.498.798.795.92.46095.897.097.396.7100.1100.097.81.8表10累积溶出度试验结果（100

15、503）时间(min)溶出量（）平均值（%）RSD(%)123456521.124.027.729.725.019.824.615.41049.045.844.749.749.650.948.35.12073.365.172.465.172.770.869.95.43085.185.786.588.081.985.985.52.44595.895.096.194.994.391.594.61.76097.698.397.195.995.694.796.51.4取上述三批样品的溶出度平均值，绘制溶出度 一时间曲线，见下图三批样品的累积溶出曲线图4.2.11溶出度均一性试验取3批样品中1批（100

16、501）中6片的累积溶出量数据，在同一坐标上分别绘制各自的溶出度曲线，结果见下图均一性试验数据及曲线图根据三批样品的累积溶出曲线及均一性溶出曲线显示，氯尼达明片在 30分 钟溶出度约为75%以上，其中40分钟和60分钟溶出度相近，因此溶出时间定为 45分钟。4.2.12三批样品溶出度测定取本品，照溶出度测定法（中国药典2005年版二部附录X C第二法），以1.0%十二烷基硫酸钠溶液900ml为溶出介质，转速为50转/分钟，依法操作，经30分钟时，取溶液滤过，作为供试品溶液。另取氯尼达明对照品16.7mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙腈50ml溶解，加溶出介质溶解并定量稀释制刻度， 摇匀，

17、精密量取该溶液3ml置10ml量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，制成每1ml 约含氯尼达明50他的溶液，作为对照品溶液。照紫外-可见分光光度法（中国药 典2005年版二部附录W A ），在278nm波长处测定吸收度，以氯尼达明计算溶 出度，限度为标示量的75%，应符合规定，测定结果见下表。表11溶出度测定结果批号溶出量（）平均值（%）RSD(%)12345610050193.499.594.997.093.694.295.42.510050293.198.899.396.595.393.2962.810050395.898.992.894.795.497.895.92.3432有关物质研究4.32

18、1仪器及色谱条件仪器与试剂试剂：乙睛为色潜纯，KH2P04、三乙胺、H3PC4为分析纯，水为注射用水 仪器：LC-10AT vp输液泵，SPD-10A vp紫外检测器（日本岛津公司）； 4.3.2.2检查波长的选择参照原料项下有关物质方法：流动相：乙睛-0.01mol/L KH2P04（含 0.1%三乙胺，用 H3P04调 pH 至 5.5 ）（ 37:63）检测波长：272nm流速：1.0ml/min柱温：室温色谱柱：C18 250X 4.6mm5ym4.3.2.3系统适用性试验供试品溶液的制备 取氯尼达明片20片，研细，称取适量（约相当于氯尼 达明20mg），精密置100ml量瓶，加乙腈5

19、0ml溶解，再加流动相稀释至刻度， 摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液；自身对照溶液制备：精密吸取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相 稀释至刻度，作为1%对照溶液。系统适用性溶液的制备 取氯尼达明片细粉、杂质 A、B、C各适量，加流 动相溶解并制成每1ml含氯尼达明200 pg/ml，含杂质A、B、C分别为2 g/ml 的混合溶液。照上述色谱条件，取1%对照溶液10卩注入液相色谱仪，调节检测灵敏度， 使主成分色谱峰的峰高约为满量程的 2025%。精密吸取上述溶液10 注入液 相色谱仪，记录色谱图。结果：图谱显示氯尼达明和相邻峰的分离度大于为1.5,主峰与杂质A、B、C达到基线分离；从

20、以上图谱可看出，在此色谱条件下，主峰与各杂质峰之间分 离度良好。4.324专属性试验辅料储备液：取处方比例量辅料适量，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤 过，取续滤液做辅料储备液。供试品储备液：取氯尼达明片 20片，研细，取本品适量（约相当于氯尼达 明400mg），置100ml量瓶，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液 作供试品储备液。a. 未破坏试验精密量取上述两种溶液各5ml，分别置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度， 作为未破坏样品溶液与空白辅料溶液。b. 酸破坏试验精密量取上述两种溶液各5ml，分别置10ml量瓶中，加2mol/L盐酸溶液1ml， 摇匀，室温放置过夜，加 2mol

21、/L氢氧化钠1ml，摇匀，加流动相稀释至刻度， 摇匀，过滤，作为酸破坏溶液。c. 碱破坏试验精密量取上述两种溶液各 5ml，分别置10ml量瓶中，加2mol/L氢氧化钠溶 液1ml，摇匀，室温放置过夜，加2mol/L盐酸1ml，加流动相稀释至刻度，摇匀， 过滤，作为碱破坏溶液。d. 氧化破坏试验精密量取上述两种溶液各 5ml，分别置10ml量瓶中，加3%过氧化氢溶液 0.5ml，摇匀，室温放置过夜，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，作为氧化破 坏溶液。e. 加热破坏试验精密量取上述两种溶液各5ml，分别置烧杯中，于电炉上加热至微黄色，放 置室温，加流动相溶解并转移至10ml量瓶中，摇匀，过滤，作

22、为加热破坏样品。f. 光照破坏试验精密量取上述两种溶液各 5ml，分别置10ml烧杯中，置强光4000Lx下放置 24小时后，加流动相溶解并转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，作为光照破坏样 品。取以上各溶液进样10山结果发现各破坏性试验中样品均产生降解，且皆与样品的主峰分离良好。主药氯尼达明、中间体试验也表明主峰与杂质峰和辅料峰 分离良好，表明本品在此分析体系中能与其它杂质良好分离。由以上专属性试验色谱图可知，该色谱条件可以有效检出破坏产生的杂质，灵敏度高，适宜于本品有关物质的检测。4.325样品有关物质测定在原料的杂质研究中，根据此，制剂仍确定了以1%氯尼达明为对照来计算杂质量。测定方法取本

23、品适量（相当于氯尼达明约 20mg），置100ml量瓶中，加乙腈溶解，加 流动相稀释至刻度，制成每1ml中含氯尼达明200旧的溶液，摇匀，滤过，续滤 液作为供试品溶液；精密吸取供试品溶液 1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释 至刻度，作为1%对照溶液。照上述色谱条件，取对照溶液20卩注入液相色谱仪， 调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的 2025%。精密量取供试 品溶液与对照溶液各10卩，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。规定：供试品溶液的色谱图中如有杂质峰， 各杂质峰面积的和不得大于对照 溶液主峰面积（1.0%）。取本品三批，按上述方法测定有关物质，结果见表12。表12有关物质

24、测定结果批号100501100502100503有关物质（%）0.650.520.534.4微生物限度检查取三批样品，依法检查（中国药典2005年版二部附录幻J），结果见卜表。表13微生物限度检查数据表供试品细困数霉困、酵母困大肠埃布困活螨10050130CFU/g10 CFU/g未检出未检出10050250 CFU/g10 CFU/g未检出未检出10050350 CFU/g10 CFU/g未检出未检出结果表明，三批样品微生物限度检查均符合规定。5含量测定：参照原料含量测定的方法进行试验，我们采氯尼达明含量测定测定的方法进 行了片剂的含量测定，并进行了方法学考察。5.1仪器TU-1810型双紫

25、外可见分光光度计（北京普析通用）高校液相：LC-10AT vp输液泵SPD-10A vp紫外检测器（日本岛津公司）；DV215CD电子天平（奥豪斯国际贸易（上海）有限公司）5.2试验部分5.2.1检测波长的选择：选用取氯尼达明原料含量测定的波长 272nm,取片剂辅料，制得辅料空白溶 液，于200400nm波长范围扫描，结果显示，溶剂辅料在此波长下对测定结果 无影响，故任然先用272nm作为含量测定波长。5.2.2色谱条件：流动相：乙睛-0.01mol/L KH2P04（含 0.1%三乙胺，用 H3P04调 pH 至 5.5 ）（ 37:检测波长：272nm流速：1.0ml/min 柱温：室温

26、色谱柱：Ci8 250X 4.6mm, 5m523.操作方法供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定重量，研细，精密称取适量（约 相当氯尼达明100mg），置100ml量瓶中，加乙腈振摇溶解，再加流动相稀释至 刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml置50ml量瓶中，加流动性稀释至刻度， 作为供试品溶液。对照品溶液的制备另精密称取氯尼达明对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙腈50ml溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。辅料空白溶液的制备取处方项下除主药外的其它辅料适量，照供试品溶液制备方法制得辅料空白溶液。测定

27、法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各 10山，分别注入液相色谱仪， 记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。5.2.4系统适用性按照上述方法，配制供试品溶液与辅料空白溶液，进行测定。由图知，氯尼 达明主峰与相邻杂质峰分离度大于 1.5;同时辅料空白对氯尼达明的测定无干扰5.2.5重复性试验精密称取本品（批号100501）适量，共6份，照供试品溶液制备方法制得 测试溶液，分别精密量取10 pl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表13。表13重复性试验编号123456称样量（mg）289.3289.9300.5293.5294.4285.4峰面积A571218557545785877457575566158032625715533比值（A/W）19744.819850.219558.919610.419712.220026.4平均值19750.5RSD (%)0.86经测试，重复性试验