维生素C调控滋养层干细胞分化和胎盘发育的效应及分子机制百替生物PPT学习教案

1、会计学1维生素维生素C调控滋养层干细胞分化和胎盘发调控滋养层干细胞分化和胎盘发育的效应及分子机制百替生物育的效应及分子机制百替生物背景介绍背景介绍关键词关键词 1 1维生素维生素C:C:又称又称L-L-抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素。作为一种高效抗氧化剂，保护身体免于自由基的威胁。需营养素。作为一种高效抗氧化剂，保护身体免于自由基的威胁。早在早在70年前已有报道维生素年前已有报道维生素C（VC）补充能减少自发性流产。）补充能减少自发性流产。最近的研究表明最近的研究表明VC能诱导人胎盘细胞滋养层细胞和绒癌细胞株产能诱导人胎盘细胞滋

2、养层细胞和绒癌细胞株产生甾体激素和多肽激素，提示其在妊娠维持中可能的重要角色。生甾体激素和多肽激素，提示其在妊娠维持中可能的重要角色。VC对滋养层细胞分化、胎盘发育以及妊娠维持的效应及分子机制对滋养层细胞分化、胎盘发育以及妊娠维持的效应及分子机制却从未有所研究。却从未有所研究。第1页/共11页关键词关键词 2 2胎盘发育：胎盘发育：胎盘作为妊娠期特殊的内分泌和免疫器官，在维持妊胎盘作为妊娠期特殊的内分泌和免疫器官，在维持妊娠中期关键作用，胚胎的发生是一个受到高度调控的动态生理过娠中期关键作用，胚胎的发生是一个受到高度调控的动态生理过程，关键环节是滋养层细胞的分化。程，关键环节是滋养层细胞的分化

3、。受精卵受精卵 （输卵管壶腹部）（输卵管壶腹部） 桑椹胚（透明带）桑椹胚（透明带）晚期囊胚（子宫腔）晚期囊胚（子宫腔）胚泡（子宫腔粘附胚泡（子宫腔粘附）胚胎着床（子宫内膜基质）胚胎着床（子宫内膜基质）胎盘胎盘滋养层外胚层滋养层外胚层内细胞团内细胞团胎儿胎儿第2页/共11页背景介绍背景介绍关键词关键词 3 3滋养层（滋养层（trophoblast）:为哺乳类早期胚泡壁的单层细胞所形成的为哺乳类早期胚泡壁的单层细胞所形成的薄膜，从母体摄取胎儿营养起重要作用而有此名。植入时滋养层薄膜，从母体摄取胎儿营养起重要作用而有此名。植入时滋养层局部增生肥厚（极端滋养层）侵着于子宫壁的组织内，并将一部局部增生肥

4、厚（极端滋养层）侵着于子宫壁的组织内，并将一部分子宫壁溶解吸收。分子宫壁溶解吸收。cytotrophoblast, CT：细胞滋养层细胞：细胞滋养层细胞extravillous trophoblast,EVT：绒毛外滋养层细胞：绒毛外滋养层细胞villous trophoblast,VT：绒毛滋养层细胞：绒毛滋养层细胞syncytiotrophoblast, ST：多核合体滋养层细胞：多核合体滋养层细胞第3页/共11页背景介绍背景介绍滋养层细胞的结构及分化滋养层细胞的结构及分化第4页/共11页滋养层发育无序会导致稽留流产滋养层发育无序会导致稽留流产(怀孕怀孕12个月流产个月流产)、胎儿宫内、胎

5、儿宫内生长迟缓生长迟缓(IUGR)和先兆子痫。和先兆子痫。 而且而且, 滋养层对外胚层建立胚胎滋养层对外胚层建立胚胎中轴起重要作用。中轴起重要作用。滋养层细胞在胚胎发育过程中具有重要意义滋养层细胞在胚胎发育过程中具有重要意义, 对胚胎的植入影对胚胎的植入影响很大响很大, 植入失败可能导致严重的妊娠疾病。例如植入不完全植入失败可能导致严重的妊娠疾病。例如植入不完全会导致流产和先兆子痫会导致流产和先兆子痫, 植入过度会导致葡萄胎和绒毛膜上皮植入过度会导致葡萄胎和绒毛膜上皮癌癌, 对婴儿和母体都会造成很大的影响。对婴儿和母体都会造成很大的影响。背景介绍背景介绍滋养层细胞的功能滋养层细胞的功能第5页/

6、共11页滋养层分化和浸润调控：滋养层分化和浸润调控：母体或胎盘自身来源的细胞因子、生长因子、激素母体或胎盘自身来源的细胞因子、生长因子、激素生理因素的影响，如氧环境、离子浓度生理因素的影响，如氧环境、离子浓度背景介绍背景介绍第6页/共11页1. 分离正常早孕期人细胞滋养层细胞：分离正常早孕期人细胞滋养层细胞： 相差显微镜、相差显微镜、Giemsa染色、免疫细胞化学法、扫描电镜、染色、免疫细胞化学法、扫描电镜、 Transwell分析其形态。分析其形态。2. 不同浓度不同浓度VC对细胞滋养层细胞分化影响：对细胞滋养层细胞分化影响： 细胞孵育细胞孵育VC ，采用绒毛枝培养法，测定细胞中，采用绒毛枝

7、培养法，测定细胞中HCG（绒毛膜促（绒毛膜促 性腺激素）含量。性腺激素）含量。 预期结果：成功分离并鉴定细胞滋养层细胞，不同浓度的预期结果：成功分离并鉴定细胞滋养层细胞，不同浓度的VC可以可以 促进细胞滋养层细胞分化，且呈浓度依赖性；或筛选促进细胞滋养层细胞分化，且呈浓度依赖性；或筛选 出最优浓度。出最优浓度。细胞水平细胞水平第7页/共11页3. 最优浓度处理滋养层细胞相关指标测定：最优浓度处理滋养层细胞相关指标测定： 细胞因子：细胞因子：MMP-9、TIMP-1、TGF-、Leptin、HGF、EGF 浸润转移：浸润转移：Transwell浸润和转移实验、明胶酶谱实验浸润和转移实验、明胶酶谱

8、实验4.最优浓度处理滋养层细胞分化相关信号通路蛋白测定：最优浓度处理滋养层细胞分化相关信号通路蛋白测定： MAPK信号通路：信号通路：Raf-MEK-ERK PISK-AKT信号通路：信号通路：PISK-AKT、mTOR FAK信号通路：信号通路：Rho、Fock Wnt信号通路：信号通路：Gsk-3、-catenin第8页/共11页动物水平动物水平1.VC缺乏妊娠动物缺乏妊娠动物模型模型 采用基因突变造成采用基因突变造成L-谷氨酸氧化酶缺乏的成年未经产大鼠谷氨酸氧化酶缺乏的成年未经产大鼠 ，该品系大鼠无，该品系大鼠无 法合成维生素法合成维生素C，需补充维生素。，需补充维生素。2. 实验实验分组：分组：A.正常正常组组B.模型模型组组C.VC-L组：组： 0.5 mg/kg/dD.VC-M组：组：1.0 mg/kg/dE.VC-H组：组： 2.0 mg/kg/d第9页/共11页3. VC 对胎盘组织结构和细胞形态的影响对胎盘组织结构和细胞形态的影响 通过通过HE染色和电镜观察染色和电镜观察VC对胎盘海绵带滋养层细胞、巨细对胎盘海绵带滋养层细胞、巨细 胞和空泡化细胞增胞和空泡化细胞增 多多, 且迷路带及海绵带滋养细胞的影响。且迷路带及海绵带滋养细胞的影响。4.繁殖成绩：繁殖成绩： 母鼠增重、胎儿数、窝重、胎盘重、胎盘厚度、胎盘面积