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文档简介

1、 临床基因扩增检验操作规范临床基因扩增检验操作规范 一、临床基因扩增检验实验室的一、临床基因扩增检验实验室的 规范化设置及其各室的功能规范化设置及其各室的功能四个隔开的工作区域中每一区域都须有四个隔开的工作区域中每一区域都须有 专用专用的仪器设备。的仪器设备。 . 明确的明确的标记标记，如加样器或试剂等。，如加样器或试剂等。 单一方向单一方向顺序，从试剂贮存和准备区、顺序，从试剂贮存和准备区、 标本标本 制备区、扩增反应混合物配制和扩增区（简制备区、扩增反应混合物配制和扩增区（简 称扩增区）至产物分析区。称扩增区）至产物分析区。 使用使用不同颜色不同颜色或有明显区别标志的工作服。或有明显区别标

2、志的工作服。 实验室的实验室的清洁清洁应按试剂贮存和准备区至扩增应按试剂贮存和准备区至扩增 产物分析区的方向进行。产物分析区的方向进行。 各自各自的清洁用具。的清洁用具。（一）试剂贮存和准备区（一）试剂贮存和准备区（二）标本制备区（二）标本制备区（三）扩增区（三）扩增区（四）扩增产物分析区（四）扩增产物分析区二、各阶段操作要求二、各阶段操作要求（一）标本的采集（一）标本的采集（二）标本的稳定化处理（二）标本的稳定化处理（三）标本的运送（三）标本的运送（四）标本的贮存（四）标本的贮存（五）标本的处理（核酸提取）（五）标本的处理（核酸提取）（六）靶核酸的逆转录（六）靶核酸的逆转录（rt）和扩增和扩

3、增（七）扩增产物的分析（七）扩增产物的分析实时荧光定量pcrtaqman荧光定量荧光定量pcr原理原理探针两端分别用荧光基团和淬灭基团标记，因为距离相近，基团相互作用，不产生荧光；探针与模板杂交在引物区间内，当扩增进行时，taq dna聚合酶的5-3外切酶活性降解探针，荧光基团和淬灭基团分开，受激产生荧光信号；荧光信号强度与扩增产物量成正比；三、三、pcr污染与对策污染与对策（一）污染的预防（一）污染的预防1、阳、阴性对照、阳、阴性对照2、常见的环境污染源有、常见的环境污染源有 追踪可疑的环境污染源追踪可疑的环境污染源1. 环境污染处理法环境污染处理法2. 反应液的污染处理法反应液的污染处理法 t a t a t a t a t a pcr a u a u a u ung a a a 加热加热 a a a pcr（二）实验室布局不合理引起的污染问题（二）实验室

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