生物化学实验复习题-2

1、生物化学实验复习题:1 .试述旋光法测定淀粉含量的实验原理。2 .在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷 物淀粉的比旋光度是不同的。其在171195之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。3 .淀粉含量测定的方法有几种比较各方法特点。4 .淀粉是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，测定淀粉的方法主要有酸水解法、酶水解法和旋 光法等。5 . 1、酸水解法：面粉经乙醛除去脂肪，乙醇除去可溶性糖类后，用酸水解淀粉为葡萄糖, 按还原糖测定方法测定还原糖含量，再折算为淀粉含量。6 . 2、酶水解法：而粉经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用 盐酸将双糖水解

2、成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。7 . 3、旋光法：在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条 件下，不同而粉淀粉的比旋光度是不同的。其淀粉的比旋光度在171195之间，因此可 用旋光法测定淀粉的含量。8 .简述旋光法测定淀粉的关键步骤。9 . 1.样品的处理在电子天平上称取小麦粉置于三角瓶中一加入50ml 1%HCI混成浆状（不能有结块）一 沸水浴中准确加热15min-先力0 1ml 30% ZnSO4混匀一再加1ml 15%亚铁制化钾混匀-* 移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤一弃去最初15ml收集其余滤液。2 ,旋光度测定取滤液20ml置于旋光管中，先

3、用1%HCI调节旋光仪“0”点，然后将样品溶液放入旋 光仪中测a10.写出计算粗淀粉含量的公式并说明各符号的含义。淀粉含量（） = *二00 X100 j Z x 少其中"aa=182.7L 2 dm甲：样品质量（g>衣1 -1不同谷物淀粉的比旋光度品利1aD20品种句6。小麦182.7马铃曾195.4黑麦184.0小米171.4大麦181.5养麦179.5水稻185.9燕麦181.3玉1-一13 .试述凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理。14 .含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮 则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸钱。浓碱可使消化液中

4、的硫酸铉分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸饵 到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标 准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔 数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。15 .蛋白质含量测定的方法有几种比较各方法特点。16 .定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin 一酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.考马斯亮 蓝法（Bradford 法）.17 .凯氏定氮灵敏度低，适用于氮,误差为±2%费时1 8.10小时将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而 分离）用于标准蛋白

5、质含量的准确测定；干扰少；费时太长19 .双缩胭法（Biuret法）灵敏度低20mg中速2030分钟多肽键+碱性Cu2 + ®紫 色络合物硫酸钱；Tris缓冲液：某些氨基酸用于快速测定，但不太灵敏：不同蛋白 质显色相似20 .紫外吸收法较为灵敏50100mg快速10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基 在280nm处的光吸收 各种噂吟和嗑咤：21 .Folin 一酚试剂法（Lowry法）灵敏度高5mg慢速4060分钟双缩腺反应；磷钳 酸一磷铛酸试剂被Tyr和Phe还原 硫酸筱：Tris缓冲液；廿氨酸：22 .各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化23 .考马斯亮蓝法

6、（Bradford法）灵敏度最高5mg快速515分钟考马斯亮蓝染料与蛋 白质结合时，其Imax由465nm变为595nm强碱性缓冲液；24 .SDS最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化25.简述凯式定氮法测定蛋白质的关键步骤。26.1,消化：在电子天平上称取小麦粉置于凯氏试管底部一加混合混合催化剂和3ml 浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（2h左右）取出放入通风橱内至不冒白 烟，向其中加20ml水，并移至100ml容量瓶定容一即得样品消化液。同时每4组8人做1空白实验：混合催化剂+3ml浓硫酸置于凯氏试管中放入消化炉 加热至淡绿色（lh左右）一冷却后加水移入100m

7、l容量瓶中定容得空白消化液。2 .蒸福与吸收：吸取10ml 2%的硼酸于三角瓶中一加4d甲基红-澳甲酚绿混合指示剂 （若变绿色则用LHCI调至紫红色）。将其置于冷凝管下端并使管尖插入液面以下，再吸取5ml消化液从漏斗上方加入蒸储室内用水洗两次，并加入10ml 40%NaOH后 水封（注意：勿使漏斗内玻杆取下以防漏气），然后打开通气阀进行加热蒸镭，直至吸收液由紫红色变成绿色，计时蒸饰3min先移去吸收液再停止加热以防倒吸。3 .滴定：用LHCI滴定吸收液由绿色退去变红色为止，记下耗去标准盐酸的体积。27 .写出计算蛋白质含量的公式并说明各符号的含义。蛋白质含量（%） = £X（匕-x

8、Hx K X 100W （X-M） 匕+ C：标准盐酸溶液摩尔浓度* Vi：滴定样品用去的盐酸溶液平均毫升数。Vo：滴定空白消化液用去的盐酸溶液平均毫升数。* W：样品重量（mg） o* 14.01：氮的原子量。K=5.7* M=12.5%* : V2=100ml28： v3=5m,29,.30 .试述淀粉酶活力测定的实验原理。31 .淀粉酶主要包括a -淀粉酶和B -淀粉酶两种。a -淀粉酶可作用于淀粉中的a 一1,4-糖 甘键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，B-淀粉酶可从淀粉的非还 原性末端进行水解，生成麦芽糖。淀粉能催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水 杨酸还原，生成棕

9、红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。+糖酸淀粉前活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准 曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一 定时间内生成的麦芽糖的量表示能活力。淀粉能存在于萌发后的禾谷类种子中，其中主要是a-淀粉酶和B-淀粉酶。两种淀 粉酶特性不同，a-淀粉酶不耐酸，在以下迅速钝化。B-淀粉酶不耐热，在7015min 钝化。根据它们的这种特性，采用加热的方法钝化B-淀粉酶，测出« -淀粉前的活力。 在非钝化条件下测定淀粉酶总活力(a -淀粉酶活力+ P -淀粉酶活力)，再减去« -淀 粉酶的活力，就可求出B-淀粉

10、醐的活力。33 .淀粉酶活力测定的方法有几种比较各方法特点。34 .简述淀粉酶活力测定的关键步骤淀粉酶活力测定a-淀粉酶活力测定吸取原液1ml 丁具塞试管中一70保温15min用于钝化B -淀粉酶一加1ml 1%淀粉置于 40c水浴中保温5min力II 1% 一二硝基水杨酸2ml沸水加热5min后加水至20ml混匀 测A1 (用1#管调零)(总酶活力测定吸取稀释液1ml千具塞试管中一加1ml 1%淀粉40保存5min加入1% 一二硝基水杨 酸2ml沸水加热5min后加水至20ml混匀测A2 (用1#管调零)35 .写出计算淀粉酶活力大小的公式并说明各符号的含义。a -淀粉幅活力麦芽犍亳克数/样

11、品鲜币：(8) 5分钊9_麦芽糖含状(长)x淀粉酶原液总体枳(.) 样品币：(g)(包国淀粉醒总活力麦芽糖毫克数 样品鲜重(g)5分钊口 麦芽犍含;代(mg)x淀粉原液总体积(mL) x稀祥倍数 一样品卡(g)36.淀粉酶活力=(a + p)淀粉酶总活力一a.淀 粉丽活力37 .试述SDS-PAGE法测定蛋白质分子量的实验原理。38 .聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量的方法，主要是根据各蛋白质组分的 分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所造成的电泳迁移率的差别。在聚内烯 酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS）,使所有蛋白质颗粒表面覆 盖一层SDS分子，导致蛋白质分子间原

12、有的电荷差异消失，此时，蛋白质分子的电 泳迁移率主要取决于它的分子量大小。当蛋白质的分子量间时， 电泳迁移率与分子量的对数呈直线关系。39 .试比较已做实验测定蛋白质分子量方法的异同点。40 .SDS-PAGE超速离心凝胶过滤粘度法生物质谱技术41.简述SDS-PAGE法测定蛋白质分子量的关键步骤。1 .电泳槽的安装：取两块玻璃板一将带玻璃条的板（高板）放置桌面上一在上面放置 “IT型橡胶条一最后将凹槽玻璃板（低板）压在高板上，置于电泳槽内，用锲子压紧。2 .凝胶液的制备与灌装:配置20ml凝胶液：在小烧杯中依次加入5ml 30%凝胶储液， 10ml PH凝胶缓冲液（

13、用前混匀再取），2ml 1%TEMED,重蒸水，10%过硫酸钺混匀后一 立即沿高板内侧倒凝胶液于两板之间直至低板上沿一插上梳子置于35"C培养箱中放置 15min,待胶凝后取下“U”条一重新将胶板放置于电泳槽内一向外槽内加三分之一槽深 电极缓冲液一向内槽加入电极缓冲液没过低板一最后拔出梳子。（3 .加样：用微量进样器加入10山标准蛋白于中间胶槽内一其余槽内加入10UI下列样 品牛血清蛋白绿豆分离蛋白4 .电泳：连接电极线，高板外侧接正极，低板内侧槽接负极，打开电源一调电流120mA 一电泳2h （当指示剂前沿超过二分之一胶长时停止）5 .剥胶：取下胶板倒去电极缓冲液一测量指示剂迁移距

14、离和染色前胶长，然后将胶板 置于水龙头下方冲玻板四周直至胶与玻璃板分离6 .染色与固定：将胶板放入染色盒内一向其中加入考马斯亮蓝R250使其浸没置于摇 床上染色过夜7 .脱色：用10%乙酸溶液脱色至谱带清晰，测定脱色后股长及各谱带迁移距离。42 .写出电泳法测定蛋白质分子量的计算公式并说明各符号的含义。1、计算相对迁移率：+A 5+XX壬女如 / R4D、_姿色前底长、，茶白片语将迁移8£离 相对XT修中（，一丁色存散&“X 3挤票而迂铉?就2、以相对迂移率Mr为横坐标、LgMr为纵坐 标，作出分子量标准曲线。3、求分子量（44 .试述赖氨酸含量测定的实验原理45 .蛋白质中

15、赖氨酸的含量是谷物品质的主要指标之一。由于动物及人类不能合成，须 从食物中得以补充，为此培育高含量赖氨酸的谷物，对于提高营养价值有重要意义。 本实验分别用前三酮溶液显色法和染料结合法，测定小麦种子中赖氨酸含量。谷物蛋白中赖氨酸残基有自由的£ NH3与黄三酮试剂可发生颜色反应，生成紫红 色物质，其颜色深浅与赖氨酸残基的数目成正相关，而其它氨基酸没有自由氨基， 不能发生这一反应。选用碳原子数目与赖氨酸相同的亮氨酸，配成标准溶液，做出 标准曲线，可用以测定谷物蛋白内赖氨酸的含量。46.47 .氨基酸含量测定的方法有几种比较各方法特点。常用的有，半定量法：纸层析法；定量法：HPLC柱前衍生化

16、法.48 .简述测定赖氨酸的关键步骤。L标准曲线的制作（每2组4人做1标准曲线）2、样品的处理与测定：在电子天平上称取小麦粉10mg于具塞试管底部一加1ml 2%碳 酸钠于80水浴中保温提取lOmin一加2ml玮三铜试剂80c水浴中保温30min后冷却至室 温一加5ml 95%乙醉和5ml蒸储水充分混匀后转移至离心管中3000转/分离心3min （离心 前必须平衡）一取上清液测A（以1号管调零）49 .写出计算赖氨酸的公式并说明各符号的含义。赖氨酸含量（%）=m 'I 'I。一一I。式中：m：标准曲线上查出的亮氨酸的量（微克工1.1 1=M|yg/M|euW二为样品的干重（mg

17、。B=0.0550 .试述甲醛滴定法测定氨基氮的实验原理。氮基酸为两性离子，在水溶液中有下列平衡;RCHC00-+2HCH0 = RCHCOO-+ H+NH3+常温下甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合生成亚羟甲基化合物，使上述平衡右移促使NH3+释 放H+,从而使溶液酸度增加，滴定终点移至酚酰的变色域内（pH值左右），根据滴定终点 时所消耗标准碱的量即可算出反应体系中存在的游离氨基即氨基氮的含量如果样品为一种 已知的氨基酸，即可算出该氨基酸的含量。如果样品为未知缄基酸或几种氨基酸的混合物, 则只能算出其氨基氮的含量。5L简述甲醛滴定法测定氨基氮的关键步骤。己知然基酸溶液中氨基酸含量的测定： 取3只三

18、角瓶编号2m11%甘亚酸2m11%甘氨酸2ml水（空白） 均加5ml水和5ml中性甲醛(用前加2滴酚加滴加LNaOH调至淡红色),及4滴%酚酰混匀一用L滴至粉红色出现为止一分别记下耗去标准碱的体积)52 .写出甲醛滴定法测定甘氨酸的公式并说明各符号的含义。 氨基氮含量(呜/")二&-皿°(2)甘氨酸含量(磔/”)二普x(D(3)甘氨酸含量(g/100mZ)=xl00式中：V：滴定样品所消耗标准碱的平均体积(ml> .Vo；滴定空白所消耗标准减的体枳(ml) oC;滴定时用标准氢氧化钠的浓度(0.1 mo/L).14.01 ： Iml Im。/L氢氧化钠4a于氟

19、的质量(mg。53 .-54 .试述纸上层析法分离氨基酸的实验原理。纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的一OH具有亲水性，因此能吸附 一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动，称为下行层析; 自下而上流动，称为上行层析。流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使物质在两相 之间不断分配而得到分离。55 .氨基酸分离的方法有几种比较各方法特点。56 .氨基酸的分离提纯方法主要有沉淀法、离子交换法、萃取法、电渗析等57 .离子交换法，根据氨基酸是两性电解质这一特征，以及目的氨基酸与杂质氨基酸pK、 pl值的差异,利用离子交换树脂对各种氨基酸吸附能力的不同对

20、氨基酸进行分离纯 化。离子交换法的分离步骤主要包括树脂的处理、装柱、平衡、加样、洗脱等步骤58 .沉淀法，沉淀法是历史最悠久的分离纯化方法，目前仍在工业上发挥着重大的作用。 氨基酸工业中常用沉淀法有等电点沉淀法，特殊试剂沉淀法和有机溶剂沉淀法。沉 淀法原理是根据某些氨基酸可以与某些有机或者无机化合物结合而形成沉淀，可以 利用这种性质向溶液中加入特定的沉淀剂，使目标氨基酸沉淀，与其他氨基酸分离, 在分离后再将氨基酸与沉淀剂分离即可。59 .萃取法，萃取法主要包括反应萃取法、溶剂萃取法、反向微胶团萃取、液膜萃取法 等。其中，反应萃取法是选择适当的萃取剂，使萃取剂解离出来的离子与氨基酸解 离出来的离

21、子发生反应，生成可以溶于有机相的物质，从而使氨基酸从水相进入有 机相，进而分离氨基酸。溶剂萃取法，由于氨基酸是离子型化合物，氨基酸在物理 萃取时难以高效提取的，因此常用化学发来萃取氨基酸。反向微胶团萃取的原理相 对复杂，表面活性剂自发形成的纳米级的一种聚体，它的极性尾在外与非极性的有 机溶剂接触，而极性头则排列在内形成极性核，极性核溶于水后就形成了特殊的“水 池”，当含有氨基酸的水溶液与含反相微胶团的有机溶剂相混合时，氨基酸以带电离 子状态进入反相微胶团的“水池”内或微胶团球粒的界面分子膜层内而被分离。液 膜萃取是将第三者液体辗成膜状，利用液膜的选择透过性，从而使目标产物透过半 透膜进行分离，

22、这是一种新型的氨基酸分离法，常用丁乳酸液泡膜分离L-苯内氨酸、 精氨酸等氨基酸。60 .电透析，由于氨基酸拥有不同的等电点，故可以通过控制溶液的PH值，使氨基酸 带有正负电荷，即当PH大于等电点时，带有负电荷，将氨基酸放置在电场中，会 带上负电，并且移向正极，相反，PH值小于等电点时，则带上正电荷，氨基酸向负 极移动。电透析主要有毛细电透析等方法，通过这种方法可以高效而精确地分离氨 基酸。61 .简述纸上层析法分离氨基酸的关键步骤。1、平衡：将展开剂（乙醇：水：冰乙酸= 50:10:1）放入培养皿中置于密闭容器内使其充满展开剂（24h左右）2、点样：取滤纸1张用铅笔在距下方2cm处划线并将所得

23、线段分成5等分从而得到4个标 记点,用微量进样器分别取5 u I下列样品phe必pro混合Aa向4个标记点上加样（样 品扩散中0Wlcm）3、展层：将滤纸卷成筒状且不能够重叠，并用棉线扎紧然后垂直放入培养皿中进行展层2h（当展开剂沿到达滤纸长度三分之二时，即可取出）测量展开剂前沿移动距离（a）4、显色：用前三酮-丙酮溶液朝点样而喷雾（不要喷得太多）然后将滤纸置于电炉上方20cm 处加热直至斑点出现为止，测量各斑点中心到点样点距离（b）62 .（63 .影响纸上层析法分离氨基酸的因素有哪些温度，层析液,样品的浓度等64 .试述凝胶层析法测定蛋白质分子量的实验原理。聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对

24、分子质量的方法，主要是根据各蛋白质组分的分子 大小和形状以及所带净电荷多少等因素所造成的电泳迁移率的差别。在聚丙烯酰胺凝胶系 统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS）,使所有蛋白质颗粒表而覆盖一层SDS分子， 导致蛋白质分子间原有的电荷差异消失，此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分 子量大小。当蛋白质的分子量间时，电泳迁移率与分子量的对数呈直 线关系。65 .简述凝胶层析法测定蛋白质分子量的关键步骤。1 .电泳槽的安装：取两块玻璃板一将带玻璃条的板（高板）放置桌面上一在上面放置“U” 型橡胶条一最后将凹槽玻璃板（低板）压在高板上，置于电泳槽内，用锲子压紧。2

25、 .凝胶液的制备与灌装：配置20ml凝胶液：在小烧杯中依次加入5ml 30%凝胶储液，10ml PH凝胶缓冲液，2ml 1%TEMED,重蒸水，10%过硫酸钺混匀一立即沿高板内侧倒凝胶液 于两板之间直至低板上沿一插上梳子放置15min,待胶凝后取下“U”条一重新将胶板放置 于电泳槽内一向外槽内加三分之一槽深电极缓冲液一向内槽加入电极缓冲液没过低板一最 后拔出梳子。3 .加样：用微量进样器加入7 Hl标准蛋白于中间胶槽内一其余槽内加入7口1下列样品牛 血清蛋白绿豆分离蛋白4 .电泳：连接电极线，高板外侧接正极，低板内侧槽接负极，打开电源一调电流120mA- 电泳2h （当指示剂前沿超过二分之一股

26、长时停止）5 .剥胶：取下胶板倒去电极缓冲液一量取指示剂迁移距离和染色剂的前胶长，然后将胶板 置于水龙头下方冲玻板四周直至胶与玻璃板分离6 .染色与固定：将胶板放入染色盒内一向其中加入考马斯亮蓝R250使其浸没置于摇床上 染色过夜7 .脱色：用10%乙酸溶液脱色至谱带清晰，测定脱色后胶长及各谱带迁移距离。66 .写出凝胶层析法测定蛋白质分子量的公式并说明各符号的含义。1、计算相对迁移率：相对迁移率（MR）二妥"灯X 蜜三方I口八J修十 23 ,秋色京段长人手不正迁屋充2、以相对迁移率Mr为横坐标、Lgw为纵坐 标，作出分子量标准曲线。3、求分子量67 .说明离心机使用时应注意的事项。

27、1离心机要放在平坦和结实的地而或实验台上，不允许倾斜；2通常离心机都会有登记表，请在使用前确实登记使用者、转头、转速、时间；3离心管一定要用天平平衡重量（重量平衡），盖上离心管盖子并旋紧：4把平衡好的离心管对称地放入离心陀中（位置平衡），盖上离心陀的盖子，注意有无旋紧:5完成离心时，要等待离心机自动停止，不允许用手或其他物件迫使离心机停转，待转头完 全静止后，才能打开舱门，请尽快取出离心管，先观察离心管是否完全，以及沉淀的位置, 尽速把上清倒出，小心不要把沉淀弄混浊。68 .使用分光光度计应注意哪些事项。1.取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光学表面。2,比色皿不能用

28、碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的 水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。69.操作旋光仪应注意哪些事项。¥旋光仪的使用及注意事项a.测定前应将仪器及样品置20c 士 的恒温室中或规定温度的恒温室中，也可用恒 温水浴保持样品室或样品测试管恒温lh以上，特别是一些对温度影响大的旋光性物质， 尤为重要。b.未开电源以前，应检查样品室内有无异物，钠光灯源开关是否在规定位置，示数开关是否 在关的位置，仪器放置位置是否合适，钠光灯启辉后，仪器不要再搬动。c.开启钠光灯后，正常起辉时间至少20min,发光才能稳定，测定时钠光灯尽量采

29、用直流 供电，使光亮稳定。如有极性开关，应经常于关机后改变极性，以延长钠灯的使用寿命。d.测定前，仪器调零时，必须重复按动复测开关，使检偏镜分别向左或向右偏离光学零位。 通过观察左右复测的停点，可以检查仪器的重复性和稳定性。如误差超过规定，仪器应维修 后再使用。e,将装有蒸馀水或空白溶剂的测定管，放入样品室，测定管中若混有气泡，应先使气泡浮于 凸颈处，通光面两端的玻璃，应用软布擦干。测定时应尽量固定测定管放置的位置及方 向，做好标记，以减少测定管及盖玻片应力的误差。f.同一旋光性物质，用不同溶剂或在不同pH值测定时，由于缔合、溶剂化和解离的情况 不同，而使比旋度产生变化，甚至改变旋光方向，因此

30、必须使用规定的溶剂。g.浑浊或含有小颗粒的溶液不能测定，必须先将溶液离心或过滤，弃去初滤液测定。有些 见 光后旋光度改变很大的物质溶液，必须注意避光操作。有些放置时间对旋光度影响较大的, 也必须在规定时间内测定读数。h.测定空白零点或测定供试液停点时，均应读取读数三次，取平均值。严格的测定，应在每 次测定前，用空白溶剂校正零点，测定后，再用试剂核对零点有无变化，如发现零点变化很 大，则应重新测定。i.测定结束时，应将测定管洗净隙干放回原处。仪器应避免灰尘放置于干燥处，样品室内 可放少许干燥剂防潮。70.写出凝胶层析法测定蛋白质分子量的仪器组成。每种仪器的作用是什么？7L电泳仪电泳仪是提供直流电

31、源的装置，它能控制电压和电流的输出72 .电泳槽电泳槽是电泳涂装作业的主槽73 .作用：用于分离蛋白质和寡糖核甘酸。作用原理聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚 丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳 的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状 及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。74 .使用电泳仪和安装电泳槽应注意哪些事项。电泳槽的安装：取两块玻璃板一将带玻璃条的板（高板）放置桌面上一在上而放置“u”型 橡胶条一最后将凹槽玻璃板（低板）压在高板上，置于电泳槽内，用锲子压紧。75 .赖氨酸

32、含量测定时，加入2%NazCO3是什么作用76 .影响凯式定氮法测定蛋白质含量的因素有哪些分析结果偏低的原因。>1、样品消化的完全程度。如：被浓硫酸脱水的样品（有机物），炭化成的氮，由于消化不完 全就不能被二氧化硫完全还原成氨，就会造成测定结果偏低。2、消化温度。消化食不能用强火，应保持缓和沸腾，以免粘附在凯氏瓶内壁上的含氮化合 物在无硫酸存在的情况下未消化完全而造成氮损失。3、蒸僧装置的气密性。若气密性差（漏气），蒸储出来的经气就会挥发流失。（所以，漏斗 加碱后应立刻水封，以免氨气由此处逸出而造成损失。）4、吸收液的温度。硼酸吸收液的温度不应超过40,否则对级的吸收作用减弱，而造成氨

33、损失。硼酸吸收液的温度不宜过高，过高则氨的吸收能力将减弱，会影响测量结果，使结果偏低。 最佳方式是保持溶液温度在20c以下，或将接收瓶置于冷水浴中。77 .凝胶层析法装柱时应特别注意哪些事项，1柱填充要均一，决不能出现气泡.在装柱时候要缓慢倒入凝胶,并轻轻敲打柱身赶走气泡.2柱上表面要平，平衡柱时间要长一些，让凝胶充分沉积为均一的柱床.I78 样体积要少，因此最好浓缩样品.79 床上表而不能干燥，要有l-2cm流动相覆盖.78.影响旋光法测定淀粉含量的因素有哪些试分析结果偏低的原因。79.1）溶剂的影响：旋光物质的旋光度主要取决于物质本身的结构。另外，还与光线透 过物质的厚度，测量时所用光的波

34、长和温度有关。如果被测物质是溶液，影响因素 还包括物质的浓度，溶剂也有一定的影响。因此旋光物质的旋光度，在不同的条件 下，测定结果通常不一样。因此一般用比旋光度作为量度物质旋光能力的标准2）温度的影响：温度升高会使旋光管膨胀而长度加长，从而导致待测液体的密度降 低。另外，温度变化还会使待测物质分子间发生缔合或离解，使旋光度发生改变。3）浓度和旋光管长度对比旋光度的影响：在一定的实验条件下，常将旋光物质的旋 光度与浓度视为成正比，因为将比旋光度作为常数。而旋光度和溶液浓度之间并不 是严格地呈线性关系，因此严格讲比旋光度并非常数.旋光度与旋光管的长度成正 比。旋光管通常有10cm、20cm. 22

35、cm三种规格。经常使用的有10cm长度的。但 对旋光能力较弱或者较稀的溶液，为提高准确度，降低读数的相对误差，需用20cm 或22cm长度的旋光管。80.现有一玉米样品，测定其中赖氨酸含量，试设计出实验方案。 I I MM 八 X，Ml(1)取材：称取烘卜、粉碎(过80目饰)的玉米粉0.3g(油料种子须经脱脂处理).(2)提取：将称取的Ff品放入试管，准确加入20mL蒸用水，摇匀。读取杼品悬液的总体枳mL,置于80C恒温水浴中提取20min0 (可间歇摇动)(3)定容：冷却后，用蒸饰水将试管中悬液定容至中姑液总体积刻度mL,即歧终样品液总定容体积仍为20mL,摇勾。(4)过渡：将提取液川注址过

36、沙，收集泄液作为待测样(池纸不能川蒸储水海涧).2.标准曲线制作及样品测定取9支刻度试管，按下表所示顺序操作*11克氨球含M的刑定管号空白标准充氨酸濯度幡度样品012345IIII充氨酸标准液(mt)020.40.60.81.0样品待测液(mL)2.02.02.0蒸温水(mL)2.01.81.61.4121.0而三酮试剂(mL)各2.0颇各管湍匆，加塞，80c保温30分钟，冷却至室混蒸慵水(mL)定容至于10mL,榜勺比色以0号管为空白参比，测定Z570nm处的吸光度记录吸光度(AsQ1 181.570纳米处吸光度82.引起赖氨酸含量测定结果误差的原因有哪些83.、84 .说出凝胶层析法中紫外

37、检测仪，部分收集器，记录仪，恒流泵如何设置参数?85 .紫外检测仪：当档位置100%T时，调光量至数显为100o当档位置于时调A数显为0记录仪：设置V纸速=2cm/h部分收集器：设置每lOmin收集1管，调恒流泵流速使每管收集液体为4ml即V流速=01访86 .旋光法测定淀粉时加入亚铁粗化钾和硫酸锌的作用是什么沉淀蛋白质用硫酸锌淀粉样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质，在碱性溶液中能将铁制化钾 还原，根据铁筑化钾的浓度和检验滴定量可计算出含糖量87 .凯式定氮法测定蛋白质时在蒸馈过程中应特别注意哪些事项。蒸饰与吸收：吸取 10ml 2%的硼酸于三角瓶中一加4d甲基红-澳甲酚绿混合指示

38、剂（若变绿色则用LHCI 调至紫红色）。将其置于冷凝管下端并使管尖插入液面以下，再吸取5ml消化液从漏 斗上方加入蒸循室内用水洗两次，并加入10ml40%NaOH后水封（注意：勿使漏斗 内玻杆取下以防漏气），然后打开通气阀进行加热蒸饰，直至吸收液由紫红色变成绿 色，计时蒸饰3min先移去吸收液再停止加热以防倒吸。88 .-89说出通过测定氮来对物质定量的方法，试比较已做过的两种方法的异同点。90 .凯氏定氮法测定蛋白质含量91 .写出纸层析分离氨基酸时，脯氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸Rf排序，分析其原因。氨基酸赖氨酸天冬氨酸内氨酸亮（白）氨酸Rf0.2294038140.57710.8609在同一实

39、验条件下，比移值Rf主要取决于分配系数，不同的物质分配系数不同，也就 有不同的Rf。此外，溶剂的溶质的性质、滤纸的性质、展层的温度和p H值均会影响 比移值Rf-在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经滤液滴点时，滴点上的氨基酸就 相继融入层析液，随着层析液上升，并发生在分配，即有一部分色素从层析液分配溶解 到固定相中，直到平衡。由于分配系数的不同，那些分配系数大的氨基酸分子，随层析 液向上移动得快，形成的斑点集中在滤纸的上部；而分配系数小的氨基酸分子，随层析 向上移动得慢，形成的斑点集中在滤纸的下而。93 .分析电泳法和凝胶层析法测蛋白质分子量时分子量大小与移动速度的关系。94 .电泳 分子量小、阴电荷多泳动最快；分子量大、阴电荷较少者泳动较慢95凝胶层析法大分子物质沿凝胶颗粒间隙随洗脱液移动，流程短，移动速率快，先被洗出层析柱：而小分子物质可通过凝胶网孔进入颗粒内部，然后再扩散出来， 故流程长，移动速度慢，最后被洗出层析柱，从而使样品中不同大小的分子彼此获 得分离96 .现有一小麦样品，测定其中粗淀粉含量，试设计出实验方案。97 .现有一大豆样品，测定其中粗蛋白含量，试设计出实验方案。98 .现有一小麦芽样品，测定其淀粉酶活力，试设计出实验方案。99 .有一种含有几种蛋白质的混合物，你采取哪些方法将它们分离纯化100 . 101 . 如何对酵母R